DAPPER1对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其表观遗传学调节机制

目的检测DAPPER1蛋白对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞株恶性生物学行为的影响,并进一步分析ESCC组织中DAPPER1蛋白表达及引起其表达异常的可能机制。方法应用MTT、克隆形成、划痕修复实验检测DAPPER1对ESCC细胞株恶性生物学行为的影响;应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测细胞株(TE13、T.Tn、Eca109)中DAPPER1 mRNA的表达及其启动子区甲基化状态;应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测ESCC组织中DAPPER1蛋白的表达。结果 DAPPER1在3株细胞中呈弱表达或阴性,应用甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-Dc)处理细胞后,其表达强度在各细胞株中均有不同程度的增加;同时,DAPPER1过表达及5-Aza-Dc处理可明显抑制TE13细胞的增殖及迁移能力;而应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatin A(TSA)处理细胞株后,DAPPER1在各细胞株中的表达无明显改变;DAPPER1蛋白在ESCC组织中的表达较癌旁组织明显下调(P<0.01),且其表达与该基因启动子区域异常甲基化状态有关(P<0.01)。结论 ESCC中DAPPER1主要起抑癌基因作用,并且该基因启动子区域的异常高甲基化可能是引起其表达下调的主要机制之一。

DACT1甲基化作为局部晚期鼻咽癌潜在生物标志物的临床研究

目的 分析Dapper1/Dpr1(DACT1)甲基化作为局部晚期鼻咽癌(NPC)预后生物标志物的可行性。方法 收集2018年6月~2021年3月黄石市中心医院耳鼻咽喉科保存的112例局部晚期NPC患者的肿瘤石蜡标本,采用焦磷酸测序分析DACT1甲基化状态,分为甲基化组(n=51)和非甲基化组(n=61)。随访记录患者的总生存期(overall survival,OS)。结果NPC细胞系中DACT1的甲基化依赖转录沉默。甲基化阳性在c T3~4级的患者中更为常见(P<0.001)。DACT1甲基化和非甲基化患者OS无差异(Log rank χ~2=0.066,P=0.797)。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)低表达者OS时间长于EGFR高表达者(Log rank χ~2=57.289,P<0.001),且在EGFR低表达患者中,DACT1非甲基化患者的OS较甲基化患者更长(Log rank χ~2=8.524,P=0.004)。Cox回归分析显示,DACT1-甲基化/高EGFR是影响局部晚期NPC患者OS的独立危险因素(P<0.001)。结论 对于EGFR低表达局部晚期NPC患者,DACT1非甲基化状态与更好的生存率相关。

DACT1基因羟甲基化在儿童WT1、IDH1/2、TET2基因突变的急性髓细胞白血病中的特征及临床意义

目的:研究dapper,β-连环蛋白拮抗剂,非洲爪蟾同系物1(dapper,antagonist of beta-catenin,homolog 1 Xenopus laevis,DACT1)在儿童急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的羟甲基化特征及其与预后的关系,寻找AML新的危险分层分子标志物。方法:测序分析本院血液科初发AML188例,根据是否存在Wilms肿瘤因子1(Wilms tumor 1,WT1)、异柠檬酸脱氢酶1/2(isocitrate dehydrogenase 1/2,IDH1/2)或TET蛋白2(ten-eleven translocation,TET2)基因突变,将病例分为WIT-AML组(30例)和非WIT-AML组(158例);用糖基化qPCR及qPCR方法检测WIT-AML(16例)、非WIT-AML(14例)和非AML患儿(14例)的DACT1基因羟甲基化水平(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)和表达水平,并用Spearman法研究羟甲基化与表达的相关性;随访患儿的缓解、复发及生存情况,采用COX回归分析DACT1羟甲基化对AML患儿总生存率(overall survival,OS)及无病生存率(event free survival,EFS)的影响。结果:WIT-AML组的DACT1 a、b区域(DACT1 a/b)甲基岛(CpG)羟甲基化(5hmC)水平较非WIT-AML组低(Ua=48.00,Pa=0.008;Ub=19.00,Pb=0.000),且其基因表达明显减低(Uexp=0.00,Pexp=0.000);DACT1 a/b甲基岛5hmC与DACT1的表达水平呈正相关(ra=0.812,Pa=0.000;rb=0.789,Pb=0.000);DACT1a 5hmC水平减低是EFS的危险因素(HR=3.896,95%CI=1.161~13.073,P=0.028),同样也是OS的危险因素(HR=4.109,95%CI=1.226~13.771,P=0.022)。结论:在WITAML中,DACT1 5hmC水平和表达水平明显降低,DACT1a区5hmC水平降低可增加儿童AML生存风险,可作为AML一个新的独立预后不良指标。

DACT1对Ⅰ型卵巢癌恶性侵袭行为的影响

目的探讨β-环连蛋白抑制基因1(dapper antagonist of catenin-1,DACT1)对Ⅰ型上皮性卵巢癌迁移侵袭能力的影响及可能机制。方法免疫组织化学检测Ⅰ型人卵巢癌临床组织中DACT1的表达;采用人黏液性卵巢癌细胞株3AO构建外源性转染DACT1的稳转株,通过划痕实验、Transwell迁移及基质胶侵袭实验检测细胞运动能力;免疫荧光观察DACT1对细胞骨架重塑的影响。结果Ⅰ型卵巢癌组织中DACT1表达低于正常卵巢组织(P<0.01)。外源性转染DACT1后3AO细胞株迁移侵袭能力降低(P<0.01),且腹腔内成瘤能力有所下降,细胞骨架中特化膜结构减少。结论 DACT1对Ⅰ型卵巢癌浸润转移具有抑制效应,其在Ⅰ型卵巢癌组织中的低表达可能与其疾病发生相关。

Dapperl在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控

目的研究Dapper1（Dpr1）在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控。方法用RT-PCR方法检测30例患者胃癌及癌旁正常组织中Dpr1 mRNA的表达情况；用RT-PCR检测SGC7901细胞转染pcDNA3．1-Dpr1质粒前后Dprl和survivin mRNA表达的变化；用Westernblot检测转染前后Dvl-2、β-catenin及survivin蛋白表达的变化；用流式细胞术检测转染后SGC7901细胞凋亡率的变化。结果本组30例胃癌组织中17例DapperlmRNA表达下调，发生率为57％，且与胃癌的浸润深度和分化程度相关（P〈0．05）；转染pcDNA3．1-Dpr1后SGC7901细胞中Dpr1 mRNA表达水平上调，survivin mRNA表达水平下调；Dvl-2、β-catenin以及Survivin蛋白表达量降低；转染pcDNA3．1-Dpr1质粒后SGC7901细胞的凋亡率升高。结论Dpr1能够通过经典WNT通路抑制凋亡相关蛋白survivin的表达，在胃癌细胞的凋亡中发挥重要作用。

DACT1在乳腺癌组织的表达及临床意义

目的 探讨DACT1在乳腺癌及癌旁组织中的表达及与其他临床病理特征的相关性,并分析其与术后生存数据的关系.方法 检测120例乳腺癌组织及68例癌旁组织中DACT1的表达,比较两组表达率的差异,以及实验组DACT1表达水平与其他临床病理指标的相关性.结果 乳腺癌DACT1的阳性表达率（18.3％）显著低于癌旁组织（56.2％,P＜0.05）.相关分析结果显示,DACT1表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、组织学分级、雌激素受体（ER）、人类表皮生长因子受体2（Her-2）存在明显相关（P＜0.05）;但与年龄及孕激素受体（PR）表达无明显相关（P＞0.05）.生存分析显示,DACT1蛋白表达水平高的乳腺癌患者预后较DACT1低表达水平的患者好（P＜0.05）.结论 DACT1在乳腺癌组织中的表达较癌旁组织中明显降低,且随着肿瘤大小的增大、淋巴结转移的出现、组织学分级及临床分期的增高而表达下降,并与ER表达呈正相关,与Her-2表达呈负相关,其高表达的患者预后较好,表明其可能在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用.