Optimization of Rhododendri Daurici oil liposome by Box-Behnken design and response surface method

Objective:To prepare the liposomes of mangrove oil,Optimization of the formulation of mangrove oil liposomes by Box Behnken response surface methodology.Methods:Preparation of Rhododendron oil liposomes by ethanol injection probe ultrasound,Determination of gemacrone by HPLC.The ratio of lecithin to cholesterol(X1),drug lipid ratio(X2)and phospholipid concentration(X3)were used as independent variables,and encapsulation efficiency(Y)was used as dependent variable,the formulation was optimized by Box Behnken response surface method,and the entrapment efficiency was predicted.The entrapment efficiency,particle size,polydispersity index(PDI),Zeta potential and drug loading of the optimized liposomes were evaluated.Results:The optimal prescription and preparation of Folium Rhododendri Daurici oil liposome was confirmed as follows:X1=7.28:1、X2=11.34:1、X3=9.32mg·mL-1,the encapsulation efficiency was(82.55±1.66)%,the particle size was(130.531±46)nm,the polydispersity index was 0.185±05,Zeta potential was(21.970±36)mV,the drug loading was(5.941±0.12)%.Conclusion:The Box Behnken response surface method is accurate to obtain the optimal formulation of mangrove oil liposomes,it has high precision and good prediction effect.And the preparation process of mangrove oil liposomes is stable and feasible.

幼龄大鼠给予芩暴红止咳口服液的非临床安全评价

目的:从多指标观察幼龄大鼠连续灌胃给予芩暴红止咳口服液13周可能引起的毒性反应和毒性靶器官,为临床应用提供参考。方法:120只雌、雄大鼠1:1同笼交配,记录仔鼠出生日期,至仔鼠出生20 d,取同日出生的仔鼠,按体质量随机分为对照组和芩暴红止咳口服液12.3、24.6、49.2 g·kg-1(以生药量计)组,每组40只,雌雄各半。仔鼠出生21 d开始,给予相应剂量的芩暴红止咳口服液,对照组给予超纯水,给药体积为10 mL·kg-1,每天给药2次,连续给药13周。观察动物的一般症状,进行体质量、摄食量、身体发育指标和生殖器官发育检查。分别于给药4周、13周和恢复期处死大鼠,检测相关指标,包括神经行为学、骨密度、免疫、眼科、尿常规、血液学指标、血液生化学指标、脏器系数和组织病理学。结果:与对照组比较,芩暴红止咳口服液低、中、高剂量组大鼠感觉功能、运动协调能力、学习记忆能力、骨密度、免疫功能、生殖器官发育及功能、眼科、尿常规、血液学指标、血液生化学指标、脏器系数和组织病理学均未见明显异常。结论:以多时间点、多指标体系可对中药复方制剂芩暴红止咳口服液进行较为全面的非临床安全评价,高剂量暴露量可达幼儿临床剂量的31.5倍;重复给药13周,未见明显毒性反应。

满山红滴丸急性毒性试验和主要药效学试验

目的:考察满山红滴丸的急性毒性和主要药效作用。方法:通过小鼠灌胃测定LD50,评价药物急性毒性;采用小鼠浓氨水致咳法、豚鼠枸橼酸致咳法、小鼠酚红排泌法考察其主要药效。结果:满山红的总黄酮有效部位灌胃给药,LD50为12.7863g·kg-1;分别以70,140,280mg·kg-1的满山红滴丸灌胃,能够显著缩短小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数,增加痰液的排除,分别以28,56,112mg·kg-1豚鼠灌胃,能够显著缩短豚鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数。结论:满山红滴丸有较低的急性毒性,有显著的止咳和祛痰作用。

高效液相色谱法快速测定满山红中槲皮素和杜鹃素的研究

研究了用固相萃取预分离，高效液相色谱法测定满山红中槲皮素和杜鹃素。槲皮素和杜鹃素用90%甲醇加热回流提取，提取液用Waters Sep-Pak-C18固相萃取小柱预分离，然后用ZORBAX Stable Bound（50×4．6mm i．d．，1．8μm）色谱柱，以O．2％的磷酸和甲醇（52：48，V／v）为流动相，槲皮素和杜鹃素在1．0min内可达到基线分离；用紫外二极管矩阵检测器检测。方法的加入标准回收率为98％～102％，相对标准偏差为1．6％～1．8％。本法可用于满山红样品中的槲皮素和杜鹃素的测定，结果满意。

超临界二氧化碳萃取满山红中黄酮类物质的工艺研究

目的确定超临界CO2萃取满山红中黄酮类物质的最佳工艺条件。方法通过正交实验考察最佳萃取工艺条件,并测定萃取物中总黄酮含量。结果最佳工艺条件是:原料粒度65目,萃取压力28 MPa,萃取温度为45℃,夹带剂用量1.5 m l/g。结论采用超临界二氧化碳萃取满山红中黄酮类物质是可行的。

满山红油的高效液相特征色谱考察

目的：探求不同产地和同一产地不同采收期的满山红油的高效液相（HPLC）特征色谱，为建立满山红油的色谱特征图谱提供依据。方法：按中国药典2005年版一部附录XD中挥发油测定的甲法，水蒸气蒸馏提取挥发油。采用梯度洗脱技术进行HPLC分离分析。色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C18柱，流动相为乙腈-0．1％磷酸水溶液，流速为1mL·min^-1；检测波长为210nm。用聚类分析方法处理色谱指纹信息，比较色谱以牻牛儿酮为参照色谱峰的32个特征峰的信息、单波长的全部指纹信息及200-350nm全波长的二维特征图谱的指纹信息。结果：所用的特征图谱测定系统对满山红油的分离良好，牻牛儿酮的纯色谱峰得到确认。采用200-350nm全波长的二维特征图谱的指纹信息较采用单波长全部特征指纹信息及色谱特征峰指纹信息的聚类结果更加可靠。结论：不同产地的满山红油中吉马酮的含量差异较大。不同产地的满山红油的色谱特征色谱比较相近，但有差别。200-350nm全波长的二维特征图谱的指纹信息更能全面表达满山红油的内在质量。

满山红滴丸平喘抗炎作用的研究

目的研究满山红滴丸的平喘及抗炎作用。方法通过对豚鼠的平喘作用实验、豚鼠离体气管平滑肌试验考察满山红滴丸的平喘作用;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、大鼠棉球肉芽肿试验考察抗炎作用。结果满山红滴丸分别以28、56、112mg/kg豚鼠灌胃,能够缩短豚鼠喘息潜伏期;0.12、0.24、0.48mg/ml的浓度均能显著对抗1.67×10-5g/ml磷酸组胺引起的豚鼠气管平滑肌收缩;分别以70、140、280mg/kg小鼠灌胃,能较明显地抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀;35、70、140mg/kg大鼠灌胃,中剂量和高剂量能够显著抑制大鼠棉球肉芽肿。结论满山红滴丸有较明显的平喘和抗炎作用。

HPLC法测定满山红油中牻牛儿酮含量

目的：建立满山红油中牻牛儿酮含量测定的高效液相色谱法。方法：使用Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为65%乙腈水溶液,流速为1.0m l.m in-1;检测波长为210nm。结果：牻牛儿酮在0.1010~1.010μg范围内与其色谱峰面积线性关系良好r=0.9996,平均回收率为100.1%,RSD为1.0%。结论：本法简便、准确、重复性好,可用于满山红油中牻牛儿酮含量的测定。

大孔吸附树脂纯化满山红总黄酮工艺研究

目的:从11种树脂中优选纯化满山红总黄酮的最佳型号,确定工艺条件及参数。方法:以饱和吸附量为指标,考察11种不同型号树脂的吸附能力;采用正交试验设计,以固形物中总黄酮含量为考察指标,对影响总黄酮提取工艺的因素进行研究。结果:11种树脂中,WLD型树脂对满山红总黄酮具有较好的吸附能力;树脂柱的径高比及样品溶液流速对纯化效果有显著影响。结论:经大孔吸附树脂纯化后,满山红中总黄酮含量达35%,表明本法可用于纯化满山红总黄酮。

超临界CO_2萃取的满山红挥发油成分分析

目的:对超临界CO2萃取法和水蒸气蒸馏法提取的满山红挥发油化学成分进行比较研究。方法:采用GC-MS法对两种方法提取的满山红挥发油进行成分分析。结果:超临界CO2萃取法提取的挥发油鉴定出52个成分,水蒸气蒸馏法提取的挥发油鉴定出48个成分,两者共有成分45个。结论:两种方法提取的挥发油成分接近。

满山红油液相色谱指纹特征的分析

目的:比较分析满山红油HPLC指纹特征,为满山红油的质量控制提供基础性研究资料。方法:采用Hypersil C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速:1.0mL.min-1,检测波长:210nm,测定了19批不同来源满山红油的HPLC-UV指纹图谱。用化学计量学的聚类分析和主成分分析方法结合相似度,比较分析全息指纹特征。结果:不同批次的满山红油按其指纹特征可分成两类。结论:牻牛儿酮峰对满山红油指纹特征类别的划分与指纹特征的相关性影响极大。

HPLC法测定满山红中牻牛儿酮的含量

目的建立满山红中牻牛儿酮含量测定方法,并测定不同来源的满山红样品。方法采用高效液相色谱法,ZORBAXRX-C18柱(150mm×4.6mm,5mm)色谱柱,流动相为65%乙腈水溶液,流速1.0mL/min,检测波长210mm。结果牻牛儿酮的线性范围为0.03024～3.024μG(R=1.000),回收率为98.6%～101.5%,RSD为1.3%～0.6%,不同采集地的满山红中牻牛儿酮的含量在0.0107～7.2862mg/g之间,不同月份的牻牛儿酮含量最多相差1.5倍。结论所建立的方法准确、重复性好,可用于满山红中牻牛儿酮的含量测定。不同采集地的满山红中牻牛儿酮含量差异极大。不同月份的牻牛儿酮的含量差异相对校小。

HPLC法测定满山红滴丸中金丝桃苷的含量

目的建立HPLC测定满山红滴丸中金丝桃苷含量的方法。方法 HPLC测定满山红滴丸中金丝桃苷含量。选择乙腈-磷酸-水系统,采用梯度洗脱的办法;检测波长为355 nm;色谱柱:Diamonsil(钻石)C18(150 mm×46 mm,5μm);柱温为25℃;流速为1.0 ml/min。结果制剂中其他成分不干扰测定,杂质峰和主峰达到有效分离。金丝桃苷在9.60-192μg/ml范围内与其峰面积呈良好的线性关系,Y=2 266 319.24X-19 602.96(r=0.999 9),各项指标达到方法学要求。结论HPLC适用于测定满山红滴丸中金丝桃苷的含量,结果准确。

芩暴红止咳口服液的质量标准研究

目的：完善和提高芩暴红止咳口服液的质量标准。方法：分别采用薄层色谱法和液相色谱法对满山红与暴马子皮进行定性研究；采用高效液相色谱法测定杜鹃素含量。结果：鉴别专属性强，含量测定杜鹃素在0．0123～0．3075μg范围内，线性关系良好，平均回收率98．13％（RSD1．04％）。结论：本方法快速简便、重现性好，可用于芩暴红止咳口服液的质量控制。

超临界CO_2萃取满山红挥发油

目的:确定超临界CO2萃取满山红挥发油的最佳实验条件。方法:采用正交实验确定超临界CO2萃取满山红挥发油的最佳实验条件。结果:超临界CO2萃取满山红挥发油的最佳实验条件为:萃取压力25M Pa,萃取温度45℃,萃取时间2.5h,萃取率3.82%,水蒸汽蒸馏提取得率0.24%。结论:超临界CO2萃取法优于传统的水蒸气蒸馏法。

满山红及其制剂中满山红油的含量测定

目的:测定满山红及其制剂中有效成分满山红油的含量,以探索满山红及其制剂的质量标准。方法:用HPLC法测定不同产地的满山红及消咳喘胶囊中满山红油的含量。结果:不同产地的满山红中挥发油含量差别较大,满山红油是消咳喘胶囊中的主要活性成分之一。结论:此方法稳定可靠,重现性好,适用于满山红及其制剂中挥发油的测定提取,为满山红及其制剂的质量评价提供了一定的科学依据。

满山红油自乳化释药微乳的制备研究

目的:筛选满山红油自乳化释药微乳的处方并进行制备方法研究。方法:通过原料药溶解度实验、正交试验设计和组方各成分伪三元相图绘制,以外观色泽和自乳化时间为指标,对满山红油处方中的油相、乳化剂、助乳化剂用量的配比进行筛选,确定最佳处方及制备工艺。结果:满山红油自乳化微乳的处方中油相为油酸,表面活性剂为吐温-80,助表面活性剂为正丁醇,最佳比例为:吐温-80(70%)、正丁醇(20%)、油酸(10%)。结论:按比例配制的满山红油释药微乳,在室温下放置数天,无沉淀,均一、稳定,该处方可用于满山红油自乳化微乳的制备。

GC法测定满山红油中■牛儿酮的含量

目的:建立满山红油中■牛儿酮的含量测定方法,为满山红油提供质量控制标准。方法:采用GC法,以苯基甲基硅酮(OV-17)为固定相,涂布浓度1.5%;柱温145℃。结果:牛尤彡牛儿酮在0.2～2.0μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9995,平均回收率为98.10%,RSD=1.31%n=9。结论:本方法简便,快速,结果准确,可靠,重现性好。

黑龙江省不同产地满山红遗传多样性的RAPD分析

目的:分析不同产地满山红遗传背景与遗传关系,建立中药满山红的RAPD分析方法。方法:CTAB法提取不同产地满山红的基因组DNA;琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物,SPSS17.0软件进行聚类分析,NTSYS2.10e软件进行遗传距离计算。结论:从100条随机引物中筛选出10个随机引物,其扩增产物谱带多,特征好,共扩增出806条条带,多态性条带数710条,多态性比例为88.1%。结论:不同产地间的满山红存在丰富的遗传多样性,RAPD分析技术可用于鉴定满山红。

超临界CO_2萃取的满山红浸膏成分分析及脱蜡方法研究

目的:确定超临界CO2萃取的满山红浸膏的化学成分,研究合适的浸膏后处理溶剂及脱蜡方法。方法:采用试管法对超临界CO2萃取的满山红浸膏进行成分分析与脱蜡研究。结果:满山红浸膏中除挥发油外,还含有香豆素,酚性物质,树脂,油脂等成分。无水乙醇和丙酮是理想的浸膏后处理和脱蜡溶剂。结论:该浸膏含较多的脂溶性成分,采用无水乙醇和丙酮作为浸膏的脱蜡溶剂是可行的。