多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞中DR5、DcR2的表达变化

目的观察DR5、DcR2在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞中的表达变化,探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能发生机制。方法大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠,以构建PCOS模型,分别用免疫组织化学法、RT-q PCR分析观察并比较DR5、DcR2在PCOS组和对照组大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况。结果免疫组织化学结果显示,在PCOS组大鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞中,DR5的表达较对照组均显著增强(P<0.05),在PCOS组大鼠卵巢窦前卵泡和窦状卵泡颗粒细胞中,DcR2的表达较对照组同级别卵泡显著增强(P<0.05),在始基卵泡颗粒细胞的表达差异无显著性(P>0.05)。RT-q PCR分析显示,DR5 mRNA和DcR2 mRNA在两组中都有表达,且二者在PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞中的表达较正常对照组均明显增强(P<0.05)。结论DR5和DcR2在颗粒细胞中的异常表达可能对PCOS大鼠卵泡的异常发育起到了一定作用,它们可能是通过参与颗粒细胞凋亡过程而对卵泡的发育造成了一定影响。

缺血再灌注大鼠肾组织及尿液DcR2表达变化与肾损伤的关系

目的观察缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)大鼠肾损伤模型中肾组织及尿液诱骗受体2(decoy receptor 2,DcR2)的表达变化,探讨其与肾损伤的关系。方法健康雄性SD大鼠40只,使用完全随机方法分为假手术组和I/R 60 min组,分别于术后1、3、7、21、35 d收集血、尿及双侧肾组织。检测各组大鼠血肌酐(serum creatinine,Scr)及尿NAG水平,使用PAS染色、Masson染色观察肾组织形态学变化并予以病理损伤评分,免疫组化检测肾组织DcR2表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿DcR2水平。结果与假手术组Scr(21.3±1.6)μmol/L、尿NAG(4.4±0.6)U/mmol相比,I/R 60 min组1、3、7、21、35 d时Scr[(122.2±15.4)、(193.5±27.7)、(66.4±10.2)、(37.8±6.2)、(34.4±2.8)μmol/L]显著升高(P<0.05),尿NAG[(9.8±2.0)、(17.0±2.5)、(7.8±1.5)、(6.5±2.1)、(6.7±2.3)U/mmol]显著升高(P<0.05);病理结果显示皮髓交界区域出现明显的肾小管细胞坏死、脱落、基底膜裸露、细胞管型形成等病理表现,并于再灌注后期出现肾小管萎缩、间质纤维化等慢性化表现;I/R60 min组肾组织DcR2表达及尿DcR2水平较假手术组显著升高(P<0.05),DcR2表达量及尿DcR2水平与肾功能、肾组织损伤程度呈正相关(P<0.05);DcR2表达量与肾间质纤维化程度呈正相关(P<0.05)。结论缺血再灌注大鼠肾组织DcR2表达量及尿DcR2水平与肾功能及肾组织损伤程度密切相关,DcR2可能在缺血再灌注后肾间质纤维化的进展中具有重要作用。

尿DcR2/Cr评价IgA肾病肾小管间质损伤程度

目的探讨尿DcR2/Cr是否可作为反映IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)肾间质损伤的生物标志物。方法纳入2016年我院经肾活检诊断为原发性IgAN的患者210例,选取同期我院体检中心健康体检者80例作为对照组。收集2组人口学资料、临床数据。按照牛津分型评估IgAN患者肾组织损伤程度。采用酶联免疫吸附测定方法检测血清及尿液中DcR2水平,将尿DcR2/Cr值三分位后分析不同慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)分期的患者及间质损伤程度的百分比,ROC曲线分析尿DcR2/Cr评估IgAN肾小管间质损伤的敏感性及特异性。结果 IgAN中尿DcR2/Cr水平较对照组增加,而血清DcR2水平与对照组比较差异无统计学意义。据IgAN组尿DcR2/Cr值三分位后分析发现,尿DcR2/Cr<130 ng/g时CKD1~2期和T0期百分率最高,尿DcR2/Cr>201 ng/g时CKD4~5期和T2期百分率最高。相关性分析表明尿DcR2/Cr与尿微量白蛋白/肌酐(ACR)、u NAG/Cr、肾小管间质损伤呈正相关,与肾小球率过滤(e-GFR)呈负相关。ROC曲线分析表明尿DcR2/Cr用于评估肾小管间质损伤的曲线下面积为0.907,敏感性为87.0%,特异性为80.5%。结论尿DcR2/Cr水平在IgA肾病T2期较T0期的明显增加,其与IgAN肾功能及肾小管间质损伤程度密切相关,是评价IgAN肾小管间质损伤潜在的生物标志物。

TRAIL及其受体在正常心脏组织的免疫组织化学定位

目的 :观察正常人心脏组织中 TRAIL 及其受体 DR4、DR5、Dc R1和 Dc R2的表达分布情况 ,为进一步明确这些分子在心肌损伤中的作用机制提供形态学依据。方法 :用抗 TRAIL及其受体的单克隆抗体 (m Ab) ,应用免疫组织化学染色技术 ,检测正常人心脏组织中 TRAIL及其受体 DR4、DR5、Dc R1和 Dc R2的表达。结果 :TRAIL及其受体 DR4、DR5、Dc R1和 Dc R2在正常人心脏组织中均有表达 ,表达产物主要分布于胞浆内 ,胞膜上也有表达。结论

TRAIL及其受体在直肠癌中的表达及意义

目的:探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)及其受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在直肠癌及癌旁组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化EliVision法检测37例直肠癌及其癌旁组织和10例正常直肠粘膜组织中TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1、DcR2表达水平。结果:TRAIL在正常直肠粘膜组织、癌旁及直肠癌组织中的表达呈递减趋势,而DR4、DR5的表达则与之相反(P<0.05);TRAIL在中、低分化癌中的表达与高分化癌中的表达无差异,而DR4、DR5、DcR1、DcR2在中、低分化癌中的表达高于高分化癌中的表达(P<0.05);TRAIL及其受体的表达与肿瘤的病理类型、患者的年龄、性别等因素无明显相关性(P<0.05)。结论:TRAIL在直肠癌中表达较正常直肠粘膜组织减弱,DcR1、DcR2在直肠癌中的表达高于DR4、DR5,提示TRAIL及其受体可能与直肠癌的发生、发展密切相关,为临床应用提供了一定的理论依据。

TRAIL及其受体在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(DR4、DR5、DcR1、DcR2)在乳腺癌组织的表达及意义。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测60例乳腺癌及对应的正常乳腺组织中TRAIL及其受体的表达。结果乳腺癌组织中TRAIL、DcR1、DcR2表达均低于正常乳腺组织(P<0.05),且TRAIL及其受体的表达与乳腺癌的分期、分级等无关(P>0.05)。结论 TRAIL及其受体在乳腺癌凋亡过程中起着重要的作用,TRAIL及其诱骗受体低表达同乳腺癌的发生关系密切。

细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性。方法:应用Stratagene BacterioMatch two hy-brid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆。对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal114组共转化后呈阴性。结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究。

尿诱骗受体2/肌酐水平与糖尿病肾小管病预后的关系

目的探讨尿诱骗受体2/肌酐(DcR2/Cr)水平是否可作为预测糖尿病肾小管病(DT)预后的生物标志物。方法纳入2018至2021年经我科病理诊断为DT并留取尿液标本的患者共计65例,对基本资料、实验室检查结果、病理检查等进行回顾性分析,并随访患者、记录终点事件。根据尿DcR2/Cr水平分3组:第1组:DcR2/Cr<321 ng/mmol,第2组:321≤DcR2/Cr≤505 ng/mmol,第3组:DcR2/Cr>505 ng/mmol。使用单因素方差分析、Kruskal-Wallis检验进行组间比较,卡方检验进行率的比较,Cox回归模型分析尿DcR2/Cr与DT预后的关系,数据采用SPSS 26.0统计学软件进行处理。结果随着DcR2/Cr水平增高,尿白蛋白肌酐比(ACR)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、胱抑素C(CYC)、血肌酐水平呈增高趋势,而尿肌酐、估算肾小球滤过率(eGFR)逐渐下降(P<0.05)。血红蛋白、血清白蛋白水平随着DcR2/Cr增高而下降(P<0.05),甘油三酯、低密度脂蛋白随DcR2/Cr增高而增高(P<0.05)。DcR2/Cr水平与ACR、CYC、NAG均呈正相关(均P<0.01),但与eGFR呈负相关(P<0.01)。尿DcR2/Cr水平与间质纤维化肾小管萎缩(IFTA)评分、肾动脉玻璃样变评分、肾动脉硬化评分均呈正相关(均P<0.05)。Cox回归模型分析显示,尿DcR2/Cr水平与患者预后呈显著相关(P=0.001),其中第3组患者不良预后的发生风险是第1组患者的11.416倍。Kaplan-Meier生存曲线显示患者的DcR2/Cr水平越高,预后越差。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,尿DcR2/Cr的曲线下面积(AUC)最大,高于ACR、CYC和血肌酐。结论尿DcR2/Cr水平与DT密切相关,可能是预测DT预后的一个生物标志物。

胃癌及癌旁组织中TRAIL、DcR1、DR4、caspase3与Bcl-2表达的研究

目的:探讨TRAIL选择性诱导肿瘤细胞凋亡,而不损伤正常组织的可能机制。方法:采用免疫组化S-P法,检测38例胃癌及癌旁组织,14例正常胃粘膜组织中TRAIL及DcR1、DR4受体、caspase3、Bcl-2在胃癌及癌旁组织中的蛋白表达情况,结合其临床病理学资料,分析它们之间的相关性。结果TRAIL、DcR1、DR4、caspase3与Bcl-2在正常胃粘膜、癌旁5cm组织、癌组织上皮中阳性表达差异有显著性(P<0.05),其中TRAIL、DcR1、DR4、caspase3、Bcl-2癌组织上皮与正常胃粘膜阳性表达差异均有统计意义(P<0.05),TRAIL、DcR1、DR4、Bcl-2在癌组织上皮与癌旁5cm组织上皮中的表达差异有显著性(P<0.05);TRAIL、DcR1、DR4、caspase3与Bcl-2在正常胃粘膜与癌旁5cm组织上皮中的达差异均无显著性(P>0.05);TRAIL与Bcl-2高中分化癌组织中与低分化癌组织中的表达差异均有显著性(P<0.05);DcR1、DR4、caspase3与肿瘤分化程度无关;TRAIL、DcR1、DR4、caspase3与Bcl-2在癌组织中的表达与性别、年龄、分期、肿瘤位置、肿瘤大小及组织类型无关(P>0.05)。结论:DcR1、DR4、caspase3与Bcl-2与TRAIL作用机制相关,其中DcR1与Bcl-2可能是抑制因素,而DR4、caspase3是TRAIL作用环节的关键指标。