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基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法的Ddx3x肝脏条件性敲除小鼠模型的构建与鉴定
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作者 潘桢桢 徐玲 +5 位作者 张向颖 高耀 田原 范子豪 曹亚玲 任锋 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2024年第10期1275-1280,共6页
目的采用CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法构建DEAD-box RNA解旋酶3X连锁(DEAD-box RNA helicase 3X-linked,Ddx3x)肝脏条件性敲除小鼠。方法设计特异的sgRNA序列,在Ddx3x基因外显子4~10两端插入LoxP序列,构建Ddx3x-flox小鼠。采用PCR方法... 目的采用CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法构建DEAD-box RNA解旋酶3X连锁(DEAD-box RNA helicase 3X-linked,Ddx3x)肝脏条件性敲除小鼠。方法设计特异的sgRNA序列,在Ddx3x基因外显子4~10两端插入LoxP序列,构建Ddx3x-flox小鼠。采用PCR方法对F0代和F1代小鼠进行基因鉴定。将Ddx3x-flox F1代小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏条件性敲除Ddx3x基因小鼠(Ddx3x^(Δhep))。采用PCR方法和Western blotting方法分别检测Ddx3x^(Δhep)基因小鼠目的基因与蛋白的表达。选取8周龄雄性野生型C57/6J小鼠、Ddx3x^(Δhep)小鼠、Ddx3x^(fl/fl)小鼠,测定血清ALT、AST水平评价肝脏肝损伤情况。结果对F1代小鼠基因PCR鉴定的结果表明,基因型符合Ddx3x^(fl/fl);F1代小鼠与Alb-Cre小鼠杂交,子代与Ddx3x^(fl/fl)小鼠杂交,即获得Ddx3x^(Δhep)小鼠;PCR与Western blotting结果显示,目的小鼠肝组织中Ddx3x基因和蛋白表达显著降低。此外,Ddx3x^(Δhep)小鼠无胚胎致死现象,出生后生理状况良好。正常饲养条件下,Ddx3x^(Δhep)小鼠与Ddx3x^(fl/fl)小鼠及野生型小鼠相比,血清ALT、AST指标及体质量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法成功构建了Ddx3x^(Δhep)小鼠动物模型,为后续研究Ddx3x在肝脏中的生物学功能及作用机制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9技术 Cre-LoxP系统 ddx3x 肝脏条件性敲除小鼠
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DDX3X/NF-κB通路介导蛛网膜下腔出血小鼠早期神经元凋亡
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作者 郝广志 郇宇 +2 位作者 韩雨薇 董玉书 梁国标 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期85-90,共6页
目的:研究DDX3X/NF-κB通路在蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期神经元凋亡过程中的作用。方法:利用颈内动脉穿刺的方法构建SAH小鼠模型,对小鼠进行神经功能评分。使用表达DDX3X靶向shRNA的重组慢病毒(Lv-shDDX3X)预先敲低脑内DDX3X的表达,... 目的:研究DDX3X/NF-κB通路在蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期神经元凋亡过程中的作用。方法:利用颈内动脉穿刺的方法构建SAH小鼠模型,对小鼠进行神经功能评分。使用表达DDX3X靶向shRNA的重组慢病毒(Lv-shDDX3X)预先敲低脑内DDX3X的表达,或者通过NF-κB抑制剂NF-κB-IN-1(简称IN-1)抑制NF-κB信号通路,利用Western Blot检测小鼠皮质DDX3X和NF-κB(p65)的表达,通过TUNEL/NeuN染色检测各组小鼠大脑皮质神经元的凋亡。结果:SAH术后24 d小鼠神经功能显著障碍(P<0.05),皮质中DDX3X表达显著增加而NF-κB(p65)的表达显著降低(P<0.05)。预先敲低DDX3X后,小鼠神经功能显著恢复,NF-κB(p65)蛋白表达显著高于SAH组(P<0.05);当在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则小鼠神经功能恢复不明显。TUNEL/NeuN染色显示敲低DDX3X表达后小鼠脑组织中TUNEL阳性的死亡神经元数量少于SAH组(P<0.05),而如果在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则TUNEL阳性的神经元数量减少不明显。结论:DDX3X/NF-κB通路介导了SAH后早期脑损伤小鼠的细胞死亡。 展开更多
关键词 DEAD-box RNA解旋酶3(ddx3x) NF-ΚB 蛛网膜下腔出血 早期脑损伤 凋亡 小鼠
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MicroRNA-1285及其靶标DDX3X对猪塞内卡病毒感染PK-15细胞的调控作用
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作者 孙媛 唐晓钰 +5 位作者 白杨 陈雨琪 郑瑶瑶 吴佼玲 蓝天 马静云 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期357-366,共10页
[目的]探究MicroRNA-1285(miR-1285)及其靶标DDX3X在猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)感染PK-15细胞中的调控作用。[方法]利用qRT-PCR、双荧光素酶活性及Western blot等方法研究miR-1285和DDX3X对I型干扰素(IFN-β)分泌及RIG-I信号通路... [目的]探究MicroRNA-1285(miR-1285)及其靶标DDX3X在猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)感染PK-15细胞中的调控作用。[方法]利用qRT-PCR、双荧光素酶活性及Western blot等方法研究miR-1285和DDX3X对I型干扰素(IFN-β)分泌及RIG-I信号通路的作用,分析miR-1285及DDX3X对SVA 3C蛋白基因表达的影响。[结果]SVA感染PK-15细胞后,miR-1285表达量显著升高,并且miR-1285与DDX3X存在负靶向关系,二者可促进IFN-β转录及蛋白水平的表达。miR-1285通过靶向DDX3X对RIG-I信号通中的MAVS、TRAF3信号分子起调控作用。对于SVA 3C蛋白基因,DDX3X可以显著抑制其转录,并且可以逆转miR-1285所诱导的上调趋势。[结论]SVA感染PK-15细胞后,宿主miR-1285及其靶标DDX3X对IFN-β及病毒3C蛋白的表达具有调控作用,研究结果将为明确miRNAs调控SVA感染的分子机制奠定基础,并为SVA的防控和诊断提供新的科学依据。 展开更多
关键词 MicroRNA-1285 ddx3x 猪塞内卡病毒 IFN-Β RIG-I信号通路
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猴源DDX3X基因的克隆及生物信息学分析
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作者 杨洪 田浪 +5 位作者 张升波 张喜懿 温贵兰 程振涛 王开功 周碧君 《贵州农业科学》 CAS 2019年第12期70-75,共6页
为猴源DDX3X基因与相关病毒作用机理的深入研究奠定基础,根据Gen Bank预测的猪源DDX3X基因序列(登录号HQ266638)设计合成特异性引物,采用RT-PCR从猴源肾细胞中扩增DDX3X基因,将其克隆至pMD-19T载体测序,并对其进行生物学特征分析。结果... 为猴源DDX3X基因与相关病毒作用机理的深入研究奠定基础,根据Gen Bank预测的猪源DDX3X基因序列(登录号HQ266638)设计合成特异性引物,采用RT-PCR从猴源肾细胞中扩增DDX3X基因,将其克隆至pMD-19T载体测序,并对其进行生物学特征分析。结果表明:克隆的猴源DDX3X基因全长1989 bp,与猕猴的核苷酸序列同源性达99.6%,与绿猴、猕猴和人并列在同一遗传进化分支上,与三者的一致性较高;蛋白编码有662个氨基酸,共计20种氨基酸;甘氨酸含量最高,为11.5%,理论等电点为6.73;猴源DDX3X基因含有DEAD-Like解旋酶超家族结构域和C端结构域,DDX3X蛋白具有良好的亲水性,二级、三级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。猴源DDX3X基因与多个调节细胞进程、RNA加工的关键蛋白存在相互作用。 展开更多
关键词 ddx3x基因 猴源肾细胞 T克隆 生物信息学分析
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DDX3X regulates cell survival and cell cycle during mouse early embryonic development 被引量:4
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作者 Qian Li Pan Zhang +8 位作者 Chao Zhang Ying Wang Ru Wan Ye Yang Xuejiang Guo Ran Huo Min Lin Zuomin Zhou Jiahao Sha 《The Journal of Biomedical Research》 CAS 2014年第4期282-291,共10页
DDX3X is a highly conserved DEAD-box RNA helicase that participates in RNA transcription, RNA splicing, and mRNA transport, translation, and nucleo-cytoplasmic transport. It is highly expressed in metaphase II (MII)... DDX3X is a highly conserved DEAD-box RNA helicase that participates in RNA transcription, RNA splicing, and mRNA transport, translation, and nucleo-cytoplasmic transport. It is highly expressed in metaphase II (MII) oocytes and is the predominant DDX3 variant in the ovary and embryo. However, whether it is important in mouse early embryo development remains unknown. In this study, we investigated the function of DDX3X in early embryogenesis by cytoplasmic microinjection with its siRNA in zygotes or single blastomeres of 2-cell embryos. Our results showed that knockdown of Ddx3x in zygote cytoplasm led to dramatically diminished blastocyst formarion, reduced cell numbers, and an increase in the number of apoptotic cells in blastocysts. Meanwhile, there was an accumulation of p53 in RNAi blastocysts. In addition, the ratio of cell cycle arrest during 2-cell to 4-cell transition increased following microinjection of Ddx3x siRNA into single blastomeres of 2-cell embryos compared with control. These results suggest that Ddx3x is an essential gene associated with cell survival and cell cycle control in mouse early embryos, and thus plays key roles in normal embryo development. 展开更多
关键词 ddx3x early embryo P53 APOPTOSIS cell cycle
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MiR-206调控DDX3X促进胰腺癌不良预后及其机制的分析
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作者 段怡平 陈梁玥 +6 位作者 朱翠雯 马甜甜 李东旭 柳家翠 赵允畅 朱光庭 喻明霞 《分子诊断与治疗杂志》 2022年第2期222-227,共6页
目的研究miR-206在胰腺癌(PAAD)中表达和关键靶基因预测,分析靶基因DDX3X在PAAD中表达及突变与预后的关系,研究其在PAAD恶性进展中的分子机制。方法利用TCGA公共数据集进行生物信息学分析,比较miR-206在PAAD样本和正常样本的表达差异。... 目的研究miR-206在胰腺癌(PAAD)中表达和关键靶基因预测,分析靶基因DDX3X在PAAD中表达及突变与预后的关系,研究其在PAAD恶性进展中的分子机制。方法利用TCGA公共数据集进行生物信息学分析,比较miR-206在PAAD样本和正常样本的表达差异。通过starBase、TargetScan和miRDB在线数据库对PAAD中miR-206的靶基因进行预测,并用韦恩图整合了重叠基因。PPI分析获得评分最高模块的基因,确定关键候选靶基因。利用卡方检验分析DDX3X与患者肿瘤远处转移的关系。通过Kaplan-Meier法分析DDX3X在PAAD中的预后价值。利用KEGG和GO分析探索DDX3X参与的分子通路。结果与正常组织比较,miR-206在PAAD组织表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);筛选出369个基因作为miR-206的潜在靶标;PPI评分最高模块中的14个靶基因作为miR-206在PAAD起关键调控作用的候选基因;靶基因DDX3X在PAAD的突变率为1.1%,与患者不良预后的高风险有关。DDX3X在PAAD组织中表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05),且DDX3X高表达与PAAD患者差的总体生存率相关(HR=1.6,P<0.05);DDX3X与远处转移显著相关(P<0.05);DDX3X高表达与较差的OS有关(HR=1.61,95%CI:1.05~2.48,Logrank P<0.05)。靶基因DDX3X的GO分析发现其可能在蛋白磷酸化、核斑点和转录共激活因子活性等中发挥重要作用;在KEGG数据集中,对靶基因DDX3X显著富集的信号通路分析预测,其主要参与了细胞周期、胰腺癌和调节干细胞多能性、TGF-β、FoxO、MAPK等信号通路的调控,大多与肿瘤相关信号通路有关(P<0.05)。结论MiR-206的低表达水平使DDX3X在PAAD中显著上调,可通过多条分子通路调控PAAD的发生发展,DDX3X可作为PAAD潜在的新型标志物。 展开更多
关键词 胰腺癌 MiR-206 TCGA 预后 ddx3x
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基于虚拟筛选从中药中发现高选择性靶向DDX3X抑制剂
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作者 邵晨 宋昱 +3 位作者 史学伟 王宝珍 武靖 董志强 《中国药物经济学》 2024年第3期49-55,共7页
目的基于虚拟筛选从中药中发现高选择性靶向DDX3X抑制剂。方法基于对DDX3X蛋白解旋酶上一段独特基因序列分析,构建出选择性位点,针对该选择性位点从中药数据库中筛选出高选择性的DDX3X蛋白解旋酶抑制剂。通过分子对接、互作模式分析以... 目的基于虚拟筛选从中药中发现高选择性靶向DDX3X抑制剂。方法基于对DDX3X蛋白解旋酶上一段独特基因序列分析,构建出选择性位点,针对该选择性位点从中药数据库中筛选出高选择性的DDX3X蛋白解旋酶抑制剂。通过分子对接、互作模式分析以及计算自由结合能的方法筛选出具有潜在抑制活力的DDX3X抑制剂,并对活性位点的构效关系进行分析。结果最终筛选得到4个化合物(ZINC4096316、ZINC33861462、ZINC67903526、ZINC85530944)可作为潜在的DDX3X蛋白解旋酶抑制剂。结论基于DDX3X蛋白解旋酶上一段独特的基序构建选择性位点并筛选选择性抑制剂,对DDX3X蛋白解旋酶强效选择性抑制剂研发具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 ddx3x抑制剂 人类免疫缺陷病毒1型 分子对接 虚拟筛选 自由结合能
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《Exome sequencing identifies somatic mutations of DDX3X in natural killer/T-cell lymphoma》解读——创新转化,擅用科研的临床语言
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作者 赵维莅 《临床血液学杂志》 CAS 2016年第5期691-693,共3页
本文最初发表于《Nature Genetics》杂志2015年第47卷,题录为:Jiang L,Gu ZH,Yan ZX,Zhao X,et al.Exome sequencing identifies somatic mutations of DDX3X in natural killer/T-cell lymphoma[J].Nat Genet,2015,47:1061-1066。这是... 本文最初发表于《Nature Genetics》杂志2015年第47卷,题录为:Jiang L,Gu ZH,Yan ZX,Zhao X,et al.Exome sequencing identifies somatic mutations of DDX3X in natural killer/T-cell lymphoma[J].Nat Genet,2015,47:1061-1066。这是迄今为止NK/T细胞淋巴瘤最全面系统的基因组学图谱,也是对相关突变基因致病原理及其临床意义进行的深入系统阐述,反映了我国血液学工作者在淋巴瘤研究中的最高水平,有较重要的理论与临床意义。本文经通信作者的许可,再次通过佳文解读的方式对这一研究成果进行阐述,供各位赏析。 展开更多
关键词 自然杀伤/T细胞淋巴瘤 外显子测序 ddx3x基因
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DDX3X基因突变致X连锁精神发育迟滞1例并文献复习 被引量:2
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作者 刘念 王越 +6 位作者 史丹丹 姚运 丁金金 赵盼 罗强 王怀立 田培超 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2020年第15期1188-1190,共3页
回顾性分析2019年4月郑州大学第一附属医院儿科诊断的1例DDX3X基因突变引起X连锁精神发育迟滞102型患儿的临床资料。患儿,女,2岁3个月,因"发育迟缓1年余"就诊,利用二代测序技术进行全外显子检测,结果显示DDX3X基因13号外显子... 回顾性分析2019年4月郑州大学第一附属医院儿科诊断的1例DDX3X基因突变引起X连锁精神发育迟滞102型患儿的临床资料。患儿,女,2岁3个月,因"发育迟缓1年余"就诊,利用二代测序技术进行全外显子检测,结果显示DDX3X基因13号外显子存在c.1463G>A杂合突变,属于新发突变。中国人群尚无DDX3X基因突变患者报道,国外文献共检索到8篇相关病例报道,患儿均有不同程度精神发育迟滞。因此对不明原因的精神发育迟滞患者(尤其是女性),需警惕DDX3X基因突变的可能。 展开更多
关键词 ddx3x基因 X连锁精神发育迟滞 基因突变
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一例DDX3X基因新发变异所致X连锁精神发育迟滞患儿的分析
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作者 王琼 杨颖 +4 位作者 刘黎礼 铁晓玲 雷海虹 张李钰 车凤玉 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2022年第10期1111-1115,共5页
目的分析1例DDX3X基因变异所致X连锁精神发育迟滞患儿的临床特征和基因检测结果。方法采用全外显子组测序和Sanger测序分别进行变异检测和家系验证,同时对DDX3X基因变异患者的临床资料进行文献复习。结果患儿携带DDX3X基因的一个杂合新... 目的分析1例DDX3X基因变异所致X连锁精神发育迟滞患儿的临床特征和基因检测结果。方法采用全外显子组测序和Sanger测序分别进行变异检测和家系验证,同时对DDX3X基因变异患者的临床资料进行文献复习。结果患儿携带DDX3X基因的一个杂合新发变异NM_001193416.3:c.1332_1333delCT(p.Leu445Serfs*19),其父母均未携带相同变异。结论确诊了1例DDX3X基因变异所致的X连锁精神发育迟滞患儿,扩大了DDX3X基因的变异谱,为患儿的临床诊断和家系的产前诊断提供了参考。 展开更多
关键词 ddx3x基因 X连锁精神发育迟滞 全外显子组测序 Sanger测序
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ZNF384融合儿童B系急性淋巴白血病的临床及分子特征 被引量:1
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作者 张伟娜 王鹏飞 +4 位作者 朱璐 胡政斌 丁文姣 王嘉怡 何映谊 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2022年第4期242-248,共7页
目的总结我中心ZNF384融合阳性儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的临床及实验室特点,为该亚组白血病的诊断及治疗提供依据。方法收集2018年4月—2021年12月期间我院ZNF384相关融合阳性的B-ALL患儿的临床资料,分析该亚组白血病患儿的临... 目的总结我中心ZNF384融合阳性儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的临床及实验室特点,为该亚组白血病的诊断及治疗提供依据。方法收集2018年4月—2021年12月期间我院ZNF384相关融合阳性的B-ALL患儿的临床资料,分析该亚组白血病患儿的临床特点、实验室特征以及治疗效果。结果通过血液肿瘤全景式基因变异分析,在420例初发B-ALL和25例复发B-ALL中共发现15例ZNF384融合阳性病例,其中13例为初发,占比为3.1%(13/420);2例为复发,占比8.0%(2/25)。在融合伙伴方面,TCF3最常见,共6例,另有5例EP300-ZNF384,2例CREBBP-ZNF384,1例ARID1B-ZNF384,1例未报道过的DDX3X-ZNF384。6例TCF3-ZNF384融合患儿年龄相对较小。ZNF384融合的白血病细胞免疫表型为pro-B或common-B,CD10不表达或低度表达,多伴髓系抗原CD33、CD13表达。ZNF384融合伴随多种基因突变,12例患者(80%)存在激酶信号通路相关基因突变,最常见为NRAS突变。13例初发ALL患者分别采取中国儿童癌症协作组(CCCG)-ALL 2015或2020化疗方案,均能获得完全缓解。1例TCF3-ZNF384阳性婴儿白血病患儿在化疗维持阶段后期微小残留病灶转为阳性。2例复发病例按CCCG复发ALL2017方案化疗,能再次获得缓解,其中1例为早期复发并伴TCF3-ZNF384融合。结论ZNF384融合在儿童B-ALL中常见,有多个伙伴基因,具有独特的免疫表型,伴随激酶信号通路突变,整体预后良好。TCF3-ZNF384融合患儿年龄相对较小,可能相对预后不良。新发现的DDX3X-ZNF384融合进一步丰富了对ZNF384融合的认识。 展开更多
关键词 B系急性淋巴细胞白血病 ZNF384融合 ddx3x-ZNF384
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基因型-表型关联分析在孤独症谱系障碍早期诊断的研究 被引量:6
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作者 高延 洪琦 +7 位作者 吴慧旦 郭辉 蒋滔滔 夏慧芸 马晓樱 丁碧蓝 卓秀慧 白婷 《中国儿童保健杂志》 CAS 2018年第7期733-736,740,共5页
目的探讨表型和基因型分析在孤独症谱系障碍(ASD)早期诊断的临床应用。方法对122名患者进行临床检查和评估,并利用遗传学技术对孤独症患者进行染色体核型分析和分子倒置探针技术(MIP)分析。结果发现1例基因突变患儿,临床表型有典型孤独... 目的探讨表型和基因型分析在孤独症谱系障碍(ASD)早期诊断的临床应用。方法对122名患者进行临床检查和评估,并利用遗传学技术对孤独症患者进行染色体核型分析和分子倒置探针技术(MIP)分析。结果发现1例基因突变患儿,临床表型有典型孤独症症状、严重智力障碍和行为问题、有肌张力低、运动发育落后病史。头颅MRI示胼胝体发育不良和侧脑室轻度增大。9号染色体发生臂间倒位,核型为46,XX,inv(9)(p12q13)。患儿在孤独症易感基因DD3 X3上存在一处杂合框移突变,家系验证结果显示为新发突变。结论 DDX3 X是ASD易感基因,该基因变异会导致神经发育多种功能损害,且存在性别差异。ASD临床表型和遗传基因型的关联研究,为临床预警和早期诊断提供依据。 展开更多
关键词 孤独症谱系障碍 ddx3x基因 分子倒置探针技术 基因型 表型
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