孕激素对早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ受体基因表达的调控

目的 探讨孕激素对体外培养的人早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子 - 受体 (IGF- R)基因表达的影响。方法 采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术半定量检测不同浓度孕激素作用 72小时后及 0 .1μm ol/ L孕激素作用不同时间后人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达水平。结果 体外培养的人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA呈强阳性表达 ,孕激素降调 IGF- R m RNA的表达 ,并与浓度呈显著负相关 (r=- 0 .6 80 ,P<0 .0 0 1)。孕激素终浓度为 0 .1μm ol/ L时 ,IGF- R m RNA的表达与作用时间无显著相关性 (r=0 .0 0 5 ,P>0 .0 5 )。结论 孕激素可能通过降调人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达 ,调节基质细胞的增殖和蜕膜化 。

人子宫内膜基质细胞的体外蜕膜化及其与腺体细胞的关系

体外分离、培养人子宫内膜基质细胞和腺体细胞，待基质细胞生长融合后，加入孕酮刺激，使其蜕膜化。结果显示，孕酮（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ，Ｐ）组基质细胞胞体变大、变圆，尤以含胎牛血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ）组显著。用酶免疫分析法检测培养液中催乳素（ｐｒｏ－ｌａｃｔｉｎ，ＰＲＬ）含量发现，培养ｄ１７～２０ＰＲＬ分泌量达到高峰；免疫细胞化学染色可见基质细胞ＰＲＬ免疫反应阳性。在此基础上，将同期培养的腺细胞匀浆液加入到已蜕膜化的基质细胞中，结果发现，在加入腺体匀浆液３ｄ后蜕膜细胞胞体变小，ＰＲＬ分泌量减少，而对照组的ＰＲＬ产量则递增。结果提示，子宫内膜腺细胞对蜕膜反应有一定的抑制作用，其作用方式和机制有待于进一步探讨。

20β-羟基黄体酮的制备及孕激素样作用研究

目的制备20β-羟基黄体酮(20β-Hydroxyprogesterone,20β-DHP),以大鼠子宫内膜基质细胞(Rat endometrial stromal cells,RESC)为研究载体,研究其孕激素样作用。方法化学合成20-羟基黄体酮(20-Hydroxyprogesterone,20-DHP),经半制备高效液相色谱分离制备20β-DHP,并对其进行含量测定。从雌性SD大鼠体内原代分离培养RESC,采用免疫荧光法对其进行鉴定、纯度检测,绘制生长曲线。RESC培养后分为空白组、阳性对照(黄体酮,Progesterone,P4)组、20β-DHP组、20α-DHP组,采用MTT法观察20β-DHP及其同分异构体20α-DHP对RESC增殖的影响,采用RT-qPCR法检测3种药物对孕酮受体(Progesterone receptor,PR)和增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)基因表达的影响。结果分离得20β-DHP单体,纯度为96.27%。原代分离培养的RESC的免疫荧光结果显示标志蛋白Vimentin阳性,纯度在90%以上,活力良好。MTT结果显示20β-DHP及其同分异构体20α-DHP均可促进RESC增殖,且呈剂量依赖性,与P4作用类似;RT-qPCR结果显示20β-DHP及其同分异构体20α-DHP均可上调PCNA基因表达,下调PR基因表达(P<0.05),20β-DHP仅在12 h内对PR表达具有下调作用。结论20β-DHP及其同分异构体20α-DHP对RESC具有类似P4的孕激素作用,但20β-DHP对PR的下调作用受时间影响。

NOD样受体家族蛋白3调控子宫内膜间质细胞催乳素分泌的作用机制

目的NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)在子宫内膜中的生理性功能研究较少。文中旨在研究NLRP3在子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的表达和调控作用。方法选自2020年4月至6月在东部战区总医院生殖中心20例不孕症患者的子宫内膜样本。收集人增殖期(n=10)及蜕膜期(n=10)的子宫内膜。另选用SPF级30只6~8周龄雌鼠和10只雄鼠,获取小鼠交配后见栓天数(dpc)0.5~7.5天的子宫内膜,采用Western blot、免疫组化检测NLRP3的表达及定位。体外利用对羟基苯甲酸甲酯(MPA)和8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)联合诱导人间质细胞系T-HESCs蜕膜化,检测蜕膜化过程中NLRP3的表达情况。干扰NLRP3的表达后,通过实时荧光定量PCR及ELISA分别检测细胞及其培养上清中蜕膜化标志物催乳素(PRL)的表达情况。结果免疫组化结果显示,在人蜕膜期子宫内膜中,可见大量NLRP3阳性细胞,蜕膜期NLRP3的表达量较增殖期显著上升。Western blot结果所示,人蜕膜期子宫内膜较增殖期NLRP3显著高表达。免疫组化结果所示,NLRP3在小鼠妊娠早期上调,dpc 3.5天表达最高,可见大量NLRP3阳性细胞表达,细胞质棕黄色深染,之后下降。Western blot结果所示,在小鼠妊娠早期,随着妊娠时间增加,NLRP3表达量先上升后下降,dpc 3.5天达到峰值,与dpc 0.5天和dpc 7.5天比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果所示,随着诱导人间质细胞蜕膜化时间延长,NLRP3及caspase-1表达量显著升高。与12 h NLRP3、caspase-1蛋白表达量(1.76±0.04、1.28±0.02)比较,0 h(1.00±0.01、0.98±0.01)明显降低,24 h(2.26±0.03、1.95±0.05)明显升高(P<0.05)。结论NLRP3可促进间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达和分泌,为研究NLRP3在子宫内膜围种植期调控间质细胞蜕膜化奠定基础。

子宫内膜间质细胞体外蜕膜化的激素调节

目的 探讨甾体激素、黄体生成素释放激素 (LHRH)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)、促卵泡激素 (FSH)在子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的作用。方法 取 18例育龄期妇女的增殖期子宫内膜 ,行体外分离、培养其间质细胞 ,加入生理剂量的雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)、睾酮 (T) ,以及LHRH、hCG、FSH ,在相差显微镜下观察细胞的形态学改变 ,采用放射免疫法测定培养液中泌乳素 (PRL)的含量。结果 E2 、P、T对子宫内膜间质细胞的生长及分化均有调节作用 ,PRL开始上升与多角形细胞出现的时间相一致 ,P、T对子宫内膜间质细胞分泌PRL起主要作用 (P <0 0 1) ,P与E2 、T有协同作用。LHRHhCG、FSH对子宫内膜间质细胞蜕膜化、分泌PRL均有促进作用 (P <0 0 1) ,以hCG的作用最强。结论 P、T、E2 在子宫内膜间质细胞生长分化过程中起重要作用 ,LHRH、hCG。

抗孕唑配伍米非司酮提高止孕活性的机理(英文)

目的:研究抗孕唑(DL111-IT)与米非司酮(Mif)合用抗早孕的作用点。方法:用组织学和细胞培养法观察对细胞的损伤;放射配基分析及PAP免疫组化观察子宫胞浆孕酮受体(PR)的影响。结果:两药合用,单用均造成蜕膜细胞坏死,胚胎生长抑制,以合用药组损伤力最强;药物作用于人蜕膜细胞24h的LD_(50)(mg·L^(-1))为:dL111-IT 18.1(15.1—21.4),Mif25.0(23.1—26.9),合用DL111-IT5.0+Mif3.5(1.8—6.5)。im DL111-IT24h及48h的PR与对照组比,含量下降47％,与Mif的结合率不变。结论:DL111-IT使PR数量下降,不影响Mif与PR的结合率,少量Mif即可有效拮抗孕酮;DL111-IT增强Mif对蜕膜细胞的损伤作用,影响胚胎发育而终止早孕。

人蜕膜间质细胞内孕酮受体和催乳素的定位及表达

目的 研究孕酮受体和催乳素在人蜕膜间质细胞内的定位及表达。方法 应用免疫组化双染法定位人蜕膜间质细胞内孕酮受体和催乳素。结果 蜕膜化的间质细胞胞浆内呈催乳素阳性染色。在蜕膜间质细胞内,孕酮受体染色完全定位在胞核内。当用孕酮受体和催乳素双染时,产生催乳素的细胞显示微弱的孕酮受体染色,而催乳素阴性的细胞则有很强的孕酮受体染色。米非司酮治疗过的蜕膜内,催乳素染色减低,而组织内孕酮受体的染色则更强更广泛。结论 在人蜕膜间质细胞内,孕酮受体和催乳素的表达呈相反的关系,而米非司酮的治疗可以转变这种关系。