黄连解毒汤通过抑制NLRP3炎性小体改善Tau/APP/PS1转基因AD小鼠神经元损伤的机制研究

目的 探讨黄连解毒汤对Tau/APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠神经元损伤的影响及机制。方法 将Tau/APP/PS1转基因AD小鼠随机分成模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组10只。选取10只相同月龄的雄性C57BL/6J小鼠作为对照组。药物干预4周后,ELISA法检测小鼠海马组织炎症因子及AD相关病理标志物可溶性淀粉酶前体蛋白α(soluble amyloid precursor protein α,s APPα)、β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)40、Aβ42和磷酸化Tau蛋白(phosphorylated tau protein,p-Tau)的水平,免疫荧光双标法检测海马Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体和小胶质细胞特异性标志物离子钙结合衔接分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)的表达,Western blot检测小鼠海马NLRP3炎性小体信号通路活化情况。结果 与对照组比较,模型组小鼠海马中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-1和Iba1表达明显增加(P<0.05),炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平上升(P<0.05),Aβ40、Aβ42和p-Tau水平及p-Tau/Tau值均升高(P<0.05),s APPα水平下降(P<0.05)。与模型组比较,不同剂量黄连解毒汤治疗组小鼠海马中s APPα水平上升(P<0.05),Aβ40、Aβ42及Tau蛋白磷酸化水平均明显下降(P<0.05),IL-1β、IL-18、TNF-α水平降低(P<0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1和Iba1表达减少(P<0.05)。结论 黄连解毒汤可能通过下调AD小鼠海马NLRP3炎性小体信号通路活性,抑制小胶质细胞活化,降低Aβ、p-Tau等神经元毒性病理产物的水平,从而改善海马神经元损伤。

黄连解毒汤洗剂对慢性骨髓炎患者皮肤去定植效果的影响研究

目的:探讨黄连解毒汤洗剂对慢性骨髓炎(附骨疽)患者皮肤去定植效果的影响。方法:选择本院接诊的60例慢性骨髓炎患者作为研究对象,采用随机数字表法分为两组,每组30例。对照组给予抗生素常规抗感染治疗,观察组在对照组治疗的基础上加用黄连解毒汤洗剂擦拭治疗,两组均治疗7天。治疗后,比较两组的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、炎症因子[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)]水平变化,并记录治疗过程中不良反应的发生情况。结果:观察组治疗后的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、CRP、TNF-α、IL-1、IL-6水平均低于对照组(P<0.05);两组不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:黄连解毒汤洗剂能降低慢性骨髓炎(附骨疽)患者的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌水平,改善炎症状态,值得在临床中推广。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉性心脏病小鼠心肌保护作用

目的 研究基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)小鼠心肌保护作用。方法 50只6周的雄性SD小鼠中取10只作正常对照组,其余小鼠给予高脂饮食建立CHD模型。采用随机数字表法将40只模型小鼠分为模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组各10只。黄连解毒汤低、中、高剂量组每日分别以10、20、40 g/kg剂量进行灌胃,每日1次,持续6周;正常组、模型组每日给予等量蒸馏水灌胃。干预后采用生化法检测各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平,酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、内皮素水平;采用苏木精-伊红染色法观察小鼠心肌细胞病理形态,蛋白质印迹法检测心肌组织中TLR4、NF-κB、NLRP3的表达。比较各组小鼠血脂、心肌组织中抗氧化相关指标和TLR4、NF-κB、NLRP3的表达。结果 模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组血脂水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低剂量组与模型组血脂水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);黄连解毒汤中、高剂量组总胆固醇、甘油三酯、LDL水平均低于模型组,HDL水平高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组心肌组织中SOD水平均低于对照组,丙二醛、内皮素水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组SOD水平均高于模型组,丙二醛、内皮素水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组心肌纤维排列整齐,横纹清晰且细胞完整,无细胞肿胀、炎症浸润等;模型组心肌纤维排列紊乱,结构发生异常,有严重细胞肿胀、炎症浸润;黄连解毒汤低、中、高剂量组未见心肌纤维断裂,黄连解毒汤中、高剂量组细胞肿胀和炎症浸润情况优于黄连解毒汤低剂量组,黄连解毒汤高剂量组优于黄连解毒汤中剂量组。模型组、黄连解毒汤中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。且黄连解毒汤各剂量组中以上指标变化呈剂量依赖性。结论 黄连解毒汤能降低CHD小鼠血脂水平,保护心肌细胞,其能够通过下调组织TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达以调节血脂水平并改善心肌功能,且黄连解毒汤的效果随着剂量的增加而增强。

超声龈下刮治联合黄连解毒汤加味含漱治疗慢性牙周炎临床研究

目的:观察超声龈下刮治联合黄连解毒汤加味含漱治疗慢性牙周炎热毒炽盛证的临床疗效。方法:选取104例慢性牙周炎热毒炽盛证患者,按随机数字表法分成对照组和观察组各52例。对照组剔除2例,最终纳入研究观察组52例、对照组50例。2组均进行龈上洁治、抛光,7 d后进行超声龈下刮治。对照组给予0.9%氯化钠溶液含漱,观察组给予黄连解毒汤加味含漱。比较2组临床疗效、牙周指数[牙周探诊深度(PD)、牙龈指数(GI)、牙龈出血指数(BI)、菌斑指数(PLI)]、龈沟液中炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平及龈沟液中氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)]水平。结果:治疗1个月后,观察组临床疗效总有效率98.08%,高于对照组84.00%(P<0.05)。2组PD、GI、BI、PLI均较治疗前降低(P<0.05),观察组上述4项牙周指数均低于对照组(P<0.05)。2组龈沟液中IL-1β、TNF-α水平均较治疗前降低(P<0.05),观察组龈沟液中IL-1β、TNF-α水平均低于对照组(P<0.05)。2组龈沟液中MDA、NO水平均较治疗前降低(P<0.05),龈沟液中SOD、GSH-Px水平均较治疗前升高(P<0.05);观察组龈沟液中MDA、NO水平均低于对照组(P<0.05),龈沟液中SOD、GSH-Px水平均高于对照组(P<0.05)。结论:超声龈下刮治联合黄连解毒汤加味含漱治疗慢性牙周炎热毒炽盛证,可有效改善牙周症状,作用机制可能与抑制牙周组织炎症及改善牙周组织氧化应激反应有关。

黄连解毒汤对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化炎症及主动脉斑块稳定性作用的机制研究

目的观察黄连解毒汤对ApoE^(-/-)小鼠主动脉粥样硬化炎症及斑块稳定性的影响,探讨黄连解毒汤治疗主动脉斑块稳定性的作用机制。方法将36只ApoE^(-/-)小鼠随机分为空白组,模型组,黄连解毒汤低、中、高剂量组,阿托伐他汀组,每组6只。模型组及给药组ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饮食构建主动脉粥样硬化模型8周后,黄连解毒汤低、中、高剂量组小鼠分别按10、20、40 g/(kg·d)剂量给予黄连解毒汤;阿托伐他汀组小鼠按10 mg/(kg·d)剂量给予阿托伐他汀;空白组、模型组给予等量的蒸馏水。每日灌胃1次,共8周。第16周末采集标本,采用苏木精—伊红染色观察各组小鼠主动脉内膜的组织形态;半自动生化分析仪检测各组小鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白—胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)及高密度脂蛋白—胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平;采用ELISA法检测各组白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)含量;组织学特殊病理染色技术测定斑块内巨噬细胞含量、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)细胞含量、斑块内胶原纤维含量及斑块内脂质含量,从而计算斑块不稳定指数(vulnerability index,VI)。结果黄连解毒汤能明显改善小鼠主动脉管壁的病理变化。与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平均显著上升(P<0.05),HDL-C水平显著下降(P<0.05);IL-1β、IL-6、TNF-α含量均显著增加(P<0.05),IL-10含量显著减少(P<0.05);VI显著增加(P<0.05)。与模型组比较,黄连解毒汤中、高剂量组小鼠血清TG、TC、LDL-C水平均显著下降(P<0.05),HDL-C水平显著上升(P<0.05);IL-1β、IL-6、TNF-α含量均显著减少(P<0.05),IL-10含量显著增加(P<0.05);各给药组小鼠主动脉内膜斑块VI均显著减少(P<0.05)。黄连解毒汤高剂量组改善上述指标的效果与阿托伐他汀组相当(P>0.05)。结论黄连解毒汤对动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠主动脉血管内炎症反应及斑块稳定性具有一定的改善作用,且呈剂量依赖性,其机制可能与降低血脂水平、缓解炎症损伤有关。

基于Nrf2信号通路探讨黄连解毒汤对阿尔茨海默病小鼠学习记忆的改善作用

目的探究黄连解毒汤对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆损伤的改善作用及其机制。方法将12只9月龄雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,60只3xTg-AD小鼠随机分成模型组、多奈哌齐组(0.65mg/kg)和黄连解毒汤低、中、高剂量组(1.95、3.9、7.8g/kg),每组12只,对照组和模型组灌胃予以生理盐水,其余各组灌胃予以相应剂量多奈哌齐或黄连解毒汤。给药1个月后,水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,ELISA法检测小鼠海马组织氧化应激指标(MDA、GSH水平和SOD活性),Westernblot法检测小鼠海马组织细胞核内Nrf2蛋白表达和下游蛋白HO-1、NQO1表达。结果与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数、目标象限时间与路程减少(P<0.05),海马组织MDA水平升高(P<0.05),SOD活性和GSH水平降低(P<0.05),HO-1、NQO1、核内Nrf2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,黄连解毒汤各剂量组及多奈哌齐组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数、目标象限时间与路程增加(P<0.05),海马组织MDA水平降低(P<0.05),SOD活性和GSH水平升高(P<0.05),HO-1、NQO1、核内Nrf2蛋白表达升高(P<0.05);与多奈哌齐组比较,黄连解毒汤中、高剂量组小鼠海马组织MDA水平降低(P<0.05),SOD活性和GSH水平升高(P<0.05),HO-1、NQO1、核内Nrf2蛋白表达升高(P<0.05)。结论黄连解毒汤能改善AD小鼠的学习记忆能力,其可能是通过激活Nrf2信号通路实现的,且高剂量下抗氧化作用最佳。

黄连解毒汤6种主要成分高效液相色谱检测方法的建立和应用

目的建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱(HPLC)方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.03 mg·mL-1磷酸二氢钾-乙腈(V∶V=7∶3)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为345 nm,柱温为37℃,进样量为20μL,建立检测黄连解毒汤6种主要成分(京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀)的HPLC方法。绘制HPLC检测6种成分的标准曲线,并进行方法学评价(线性、加样回收率、准确度和精密度、稳定性)。采用建立的HPLC方法检测黄连解毒汤样本。结果HPLC检测京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的线性范围分别为25.00~800.00、32.00~1024.00、20.00~640.00、20.30~650.00、13.13~420.00、25.00~800.00μg·mL-1,精密度和准确度均<2%,加样回收率分别为105.30%、102.88%、103.51%、107.76%、96.29%、99.34%。稳定性实验结果显示,室温放置24 h、反复冻融3次、2~8℃保存1周、-80℃冻存1个月,京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的峰面积相对标准偏差(RSD)均<2%,检测结果均稳定。采用HPLC检测黄连解毒汤的主要成分,浓度从高到低依次为药根碱(2799.00μg·mL-1)、小檗碱(2358.03μg·mL-1)、京尼平苷(1793.34μg·mL-1)、巴马汀(945.30μg·mL-1)、黄连碱(192.00μg·mL-1)、黄芩苷(171.00μg·mL-1)。结论建立的同时检测黄连解毒汤6种主要成分的HPLC方法快速、简便、重复性好、准确度高,可为后续黄连解毒汤的相关研究和临床应用奠定基础。

黄连解毒汤加减治疗跟骨骨折术前肿胀的临床研究

目的:观察黄连解毒汤加减治疗跟骨骨折术前肿胀的临床疗效和安全性,并探讨其可能的作用机制。方法:将符合要求的70例SandersⅡ~Ⅳ型跟骨骨折患者随机分为2组,每组35例。2组患者入院后均给予石膏托外固定制动、抬高患肢、静脉滴注甘露醇注射液、皮下注射那屈肝素钙等常规治疗。常规治疗组在此基础上口服地奥司明片,每次0.9 g,每日1次,晚餐后服用,共服用7 d;黄连解毒汤组在常规治疗基础上口服黄连解毒汤加减,早晚各1次,共服用7 d。比较2组患者的患肢肿胀率、疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分、血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、血清白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)水平、中医证候积分及并发症发生情况。结果:①患肢肿胀率。2组患者的患肢肿胀率随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=246.771,P=0.000;F=282.982,P=0.000);治疗前2组患者患肢肿胀率的差异无统计学意义(t=0.596,P=0.553);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的患肢肿胀率均低于常规治疗组(t=2.147,P=0.035;t=2.799,P=0.007)。②疼痛VAS评分。2组患者的疼痛VAS评分随时间变化均呈逐渐降低的趋势(F=262.877,P=0.000;F=462.471,P=0.000);治疗前2组患者疼痛VAS评分的差异无统计学意义(t=0.432,P=0.667);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的疼痛VAS评分均低于常规治疗组(t=3.200,P=0.002;t=8.735,P=0.000)。③血清CRP水平。2组患者的血清CRP水平随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=1355.001,P=0.000;F=2271.167,P=0.000);治疗前2组患者血清CRP水平的差异无统计学意义(t=-0.470,P=0.570);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的血清CRP水平均低于常规治疗组(t=4.575,P=0.000;t=25.065,P=0.000)。④血清TNF-α水平。2组患者的血清TNF-α水平随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=366.536,P=0.000;F=811.863,P=0.000);治疗前2组患者血清TNF-α水平的差异无统计学意义(t=-1.019,P=0.312);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的血清TNF-α水平均低于常规治疗组(t=3.222,P=0.002;t=17.223,P=0.000)。⑤血清IL-6水平。2组患者的血清IL-6水平随时间变化均呈先升高后降低的趋势(F=895.505,P=0.000;F=1184.801,P=0.000);治疗前2组患者血清IL-6水平的差异无统计学意义(t=1.606,P=0.113);治疗第3天和治疗第7天,黄连解毒汤组患者的血清IL-6水平均低于常规治疗组(t=4.432,P=0.000;t=9.249,P=0.000)。⑥中医证候积分。治疗前2组患者的中医证候积分比较,差异无统计学意义(t=-0.595,P=0.554);治疗第7天,2组患者的中医证候积分均较治疗前减小(t=24.128,P=0.000;t=40.200,P=0.000);治疗第7天黄连解毒汤组的中医证候积分低于常规治疗组(t=9.272,P=0.000)。⑦并发症。2组各有2例患者发生下肢深静脉血栓,应用那屈肝素钙联合华法林治疗1周后血栓变小或吸收;黄连解毒汤组2例发生胃肠道不适、常规治疗组2例出现皮疹,均未予药物治疗,症状自行消失。2组患者并发症发生率的差异无统计学意义(χ^(2)=0.000,P=1.000)。结论:黄连解毒汤加减可有效减轻跟骨骨折患者的术前肿胀和疼痛,而且具有较高的安全性,其作用机制可能与其降低患者血清炎症因子水平有关。

黄连解毒汤与降脂药对ApoE^(-/-)小鼠固有免疫反应影响的比较研究

目的比较黄连解毒汤及降脂药阿托伐他汀、非诺贝特和罗格列酮对高脂饮食饲喂载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠全身固有免疫反应及主动脉局部免疫反应的影响。方法采用配对比较法将60只雌性8周龄ApoE^(-/-)小鼠分为对照、模型、阿托伐他汀、非诺贝特、罗格列酮和黄连解毒汤6组,每组10只,10只匹配的C57BL/6J小鼠为野生对照组。对照组与野生对照组小鼠给予普通饲料,模型组小鼠给予高脂饲料,给药组小鼠造模同时分别给予阿托伐他汀(3 mg/kg)、非诺贝特(33 mg/kg)、罗格列酮(0.67 mg/kg)、黄连解毒汤水煎液(5 g/kg)灌胃。4周后,每组取5只小鼠,生化检测血浆血脂水平,流式细胞仪检测外周血单核细胞比例及表面Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)和清道夫受体CD36的表达、单核细胞亚型比例,HE染色检测主动脉组织病理变化,RT-qPCR检测主动脉组织炎性细胞因子表达;余下小鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),流式微球阵列(cytometric bead array,CBA)和ELISA检测血浆细胞因子的水平。结果与野生对照组比较,对照组小鼠血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平明显升高(P<0.01),高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平明显降低(P<0.01);外周血单核细胞炎症亚型Ly6C++比例升高(P<0.05),Ly6C-和Ly6C+比例降低(P<0.05);主动脉组织炎性因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-12、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、单核细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein,MCP)-1和一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)-2表达升高(P<0.05);LPS刺激后,对照组小鼠血浆IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠TC、TG、HDL和LDL水平进一步升高(P<0.05);外周血单核细胞的比例增多(P<0.05),CD36的表达增加(P<0.05);主动脉组织炎性因子IL-1β、IL-12、TNF-α和NOS-2表达升高(P<0.05);LPS刺激后,血浆IL-1β、IL-12 p70和MCP-1水平升高(P<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀干预没有改善血脂水平(P<0.05),但降低主动脉组织炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、MCP-1和NOS-2 mRNA表达(P<0.05)。非诺贝特干预降低HDL水平(P<0.01);LPS刺激后,降低主动脉组织IL-12、TNF-α、MCP-1和NOS-2 mRNA表达(P<0.05)。罗格列酮干预没有改善血脂水平(P>0.05),但降低外周血单核细胞及其炎症亚型Ly6C^(++)比例(P<0.05),降低主动脉组织IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α和NOS-2 mRNA表达(P<0.05);LPS刺激后,罗格列酮降低血浆IL-12 p70的水平(P<0.05)。黄连解毒汤干预并未改善血脂水平,但显著降低外周血单核细胞及其炎症亚型Ly6C^(++)比例以及TLR4和CD36在单核细胞的表达水平(P<0.05),降低主动脉组织IL-1β、IL-12和NOS-2 mRNA表达(P<0.05)。结论黄连解毒汤、阿托伐他汀、非诺贝特和罗格列酮减轻高脂血症引发的固有免疫反应,且其免疫调节作用不依赖于降脂作用。其中黄连解毒汤和罗格列酮对全身固有免疫的调控作用优于阿托伐他汀和非诺贝特。

黄连解毒汤调控肠道菌群介导的色氨酸代谢干预帕金森病作用机制研究

目的 基于16S rRNA技术及非靶向代谢组学技术,分析黄连解毒汤对帕金森模型小鼠肠道菌群及代谢产物的影响,探究黄连解毒汤干预帕金森病(PD)的作用机制。方法 通过皮下注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,20 mg·kg~(-1)·d~(-1))联合丙磺舒(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔注射诱导帕金森小鼠模型,给予黄连解毒汤干预后,测定小鼠的体质量、行为学指标;采用HPLC-QTRAP-MS/MS技术检测小鼠纹状体神经递质的水平;采用ELISA法检测小鼠纹状体炎性因子的水平;采用16S rRNA技术分析小鼠肠道菌群的变化;采用UHPLC-Q-TOF-MS检测小鼠粪便、纹状体内源性代谢物水平,结合主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选潜在的差异代谢物,导入MetaboAnalyst 5.0预测与PD有关的代谢途径。结果 黄连解毒汤显著改善帕金森小鼠的运动症状及神经炎症(P<0.01),调节小鼠神经递质水平(P<0.01),并纠正帕金森模型小鼠的肠道菌群紊乱,表现为肠道微生物多样性增加、菌群轮廓的恢复等。黄连解毒汤治疗后显著增加帕金森模型小鼠肠道中普雷沃氏菌、阿克曼菌等的丰度,下调梭状菌的丰度,并主要通过对帕金森模型小鼠粪便、纹状体中色氨酸代谢通路进行调节,恢复异常代谢产物水平。结论 黄连解毒汤显著改善帕金森模型小鼠的病理损伤,调节紊乱的肠道菌群及色氨酸代谢通路可能是黄连解毒汤干预PD的潜在机制。

基于网络药理学与分子对接探讨黄连解毒汤治疗白念珠菌感染的作用机制

目的运用网络药理学与分子对接探讨黄连解毒汤治疗白念珠菌感染的作用机制,为临床应用和基础研究提供理论依据。方法运用TCMSP和BATMAN-TCM数据库检索黄连解毒汤的有效成分及作用靶点,通过GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank数据库收集疾病相关靶点。运用Cytoscape 3.8.0软件构建“活性成分-靶点”网络,借助STRING平台构建交集蛋白互作网络,并使用Cytoscape对网络进行拓扑分析,获取核心靶点,通过R语言进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,最后将主要活性成分与核心靶点进行分子对接验证。结果黄连解毒汤治疗白念珠菌感染的活性成分有槲皮素、山柰酚、汉黄芩素、黄芩新素等,核心靶点为HIF1A、MMP9、AKT1、FN1、PTGS2、IFNG、IL1B、STAT1、CASP8。富集得到IL-17信号通路、Th17细胞分化、Toll样受体信号通路等,主要通过调节炎症反应和细胞免疫等生物过程发挥治疗作用。分子对接结果表明,主要活性成分与核心靶点具有较强的结合能。结论黄连解毒汤能通过多成分-多靶点-多途径共同治疗白念珠菌感染,为临床应用及基础研究提供理论基础和参考依据。

加味黄连解毒汤对早期乳腺癌切除术患者肿瘤缓解率、近期复发率及生存质量的影响

目的 探究早期乳腺癌切除术患者应用加味黄连解毒汤治疗对其肿瘤缓解率、近期复发率、生存质量的影响。方法 选取2020年3月—2022年6月医院收治的86例早期乳腺癌切除术患者进行研究,其中对照组42例采用常规西医治疗,44例观察组在对照组基础上采用加味黄连解毒汤治疗。比较两组肿瘤缓解率、1个月复发率、生存质量、疲乏情况及不良反应。结果 观察组中医症状积分低于对照组(P<0.05)。观察组肿瘤缓解率88.64%高于对照组肿瘤缓解率71.43%(P<0.05)。随访1个月,观察组复发率4.55%低于对照组复发率19.05%(P<0.05)。观察组国内活动、家庭关系、心理状态及工作与经济形势得分均高于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组与对照组Piper疲乏自评量表均下降,观察组下降幅度较对照组更大(P<0.05)。两组不良反应多为胃肠道反应,其中I^II级发生率最高,观察组为18.18%(8/44),对照组为14.29%(6/42),两组不良反应比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 加味黄连解毒汤治疗早期乳腺癌切除术患者可有效改善临床症状,降低近期复发率,提高肿瘤缓解效果及生存质量,且未新增不良反应。

黄连解毒汤对星形胶质细胞ODC1的影响及其在APP/PS1小鼠学习记忆中的潜在作用

目的:探究黄连解毒汤对APP/PS1小鼠海马星形胶质细胞中与尿素代谢有关基因ODC1表达的影响及对小鼠行为学的改善作用和神经保护作用。方法:以8月龄的雄性APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,随机分为模型组、黄连解毒汤组(990.45mg/kg)、多奈哌齐组(1.52mg/kg),对照组为8月龄雄性C57BL/6J小鼠,每组12只。对照组和模型组予以生理盐水灌胃,其余各组以相应剂量多奈哌齐或黄连解毒汤灌胃。给药一个月后,采用Morris水迷宫检测黄连解毒汤对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响;苏木素-伊红染色(HE)观察小鼠海马CA3区神经元病理改变;免疫组化法(IHC)观察小鼠海马组织GABA、GFAP、Aβ蛋白表达;实时荧光定量PCR反应(Real-time PCR)检测小鼠海马组织中ODC1基因的表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测检测小鼠血清GABA、GFAP水平;脲酶法检测小鼠海马尿素氮(BUN)含量。结果:与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数、目标象限停留时间百分比与目标象限移动距离均减少(P<0.05),HE染色可见较多的神经元固缩,细胞排列不规则,嗜碱性增强,胞质与胞核分界不清晰,ODC1表达倍数、血清GFAP、GABA及海马BUN含量均增加(P<0.05);与模型组比较,黄连解毒汤组和多奈哌齐组小鼠在穿越平台的次数、目标象限的停留时间百分比及移动距离均增加(P<0.05),神经元在形态上更为饱满,细胞之间的排列整齐有序,ODC1表达倍数、GFAP、GABA及BUN含量均下降(P<0.05);与多奈哌齐组比较,黄连解毒汤组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),而穿越平台的次数、在目标象限的停留时间百分比及移动距离方面并无明显变化(P>0.05),GFAP含量高于多奈哌齐组(P>0.05),ODC1表达、GABA与BUN含量无明显差异。结论:黄连解毒汤增强了APP/PS1小鼠的学习和记忆功能,为神经元提供了保护,并有效抑制了APP/PS1小鼠星形胶质细胞的过度活化和有毒副产物GABA的产生。这一作用可能与其在星形胶质细胞中抑制了与尿素代谢相关的ODC1基因表达有关。

基于网络药理学及分子对接技术探究黄连解毒汤治疗脓毒症的分子机制

目的:采用网络药理学方法和生物信息学理论,挖掘黄连解毒汤有效成分,预测黄连解毒汤治疗脓毒症的作用机制,为中医治疗该病提供理论依据。方法:利用TCMSP等数据库平台筛选黄连解毒汤有效活性成分。在Gene Card、OMIM及Disgenet数据库中获得脓毒症相关基因,结合疾病靶点及药物活性成分绘制PPI网络,对关键靶点并进行GO、KEGG富集分析以及运用Autodock软件进行关键靶点分子对接研究。结果:通过检索共筛选出黄连解毒汤有效活性成分59个,在此基础上获得206个预测靶点及关键基因;根据基因本体(gene ontology,GO)分析及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)结果可知,黄连解毒汤作用于该疾病主要涉及细胞因子活化、免疫和炎症相关过程激活等生物进程如肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)炎症信号通路及晚期糖基化通路(AGEs-RAGE)等。分子对接结果表明药对的活性成分可以对核心靶点(JUN和TNF)发挥调控作用。结论:黄连解毒汤治疗脓毒症作用机制是多层次、多角度的,其主要机制集中在抗炎及氧化应,为研究黄连解毒汤多成分、多靶点治疗脓毒症网络关系提供了新的研究思路。

黄连解毒汤在重度颅脑损伤合并肺部感染中的护理效果

目的分析黄连解毒汤在重度颅脑损伤合并肺部感染循证护理中的护理效果。方法2021年1月至2022年12月,选取重度颅脑损伤合并肺部感染患者60例,按随机数字表法分为对照组(30例,行循证护理)和研究组(30例,行黄连解毒汤联合循证护理),比较两组肺部感染治愈情况、肺功能指标水平、生活质量评分、住院时间、住院费用及护理满意度。结果研究组感染治愈总有效率、各项生活质量评分、护理满意度均高于对照组(均P<0.05)。研究组FEV1和FVC水平均高于对照组(均P<0.05),两组FEV1/FVC比较无差异(P>0.05)。与对照组比较,研究组住院时间更短,住院费用更低(均P<0.05)。结论黄连解毒汤应用在重度颅脑损伤合并肺部感染循证护理中,可有效提高肺部感染治愈率、生活质量、患者满意度,缩短住院时间,减少住院费用。

基于IRE1α/XBP1/CHOP通路探讨黄连解毒汤对内质网应激的作用机制

目的:研究黄连解毒汤含药血清对衣霉素诱导的人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)内质网应激的内质网跨膜激酶1(IRE1α)、X盒结合蛋白(XBP1)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)表达的影响,以探讨黄连解毒汤作用于内质网应激的细胞通路机制。方法:制备HLJDD和卡托普利含药血清,将细胞分为空白对照组、模型组、HLJDD低、中、高剂量组、卡托普利组。采用CCK8法检测细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。运用蛋白印记检测HUVEC的内质网应激葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78kD,GRP78)、CHOP、IRE1α、XBP1、PDIA6、eNOS蛋白的表达变化;实时荧光定量PCR检测细胞的GRP78、CHOP、IRE1α、XBP1、PDIA6及eNOS的mRNA表达。结果:与空白对照组相比,模型组细胞存活率降低,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP、IRE1α、XBP1、PDIA6表达升高(P<0.05);eNOS表达降低(P<0.05)。与模型组相比,黄连解毒汤各组和卡托普利干预后,细胞凋亡率明显降低,GRP78、CHOP、IRE1α、XBP1、PDIA6表达降低(P<0.05);eNOS表达升高(P<0.05)。结论:黄连解毒汤可改善ERS状态,抑制细胞凋亡,达到对内皮细胞的保护作用,其作用机制可能与抑制IRE1α/XBP1/CHOP信号通路有关。

基于网络药理学和分子对接探讨黄连解毒汤治疗真菌性角膜炎的作用机制

目的:应用网络药理学和分子对接方法深入研究黄连解毒汤治疗真菌性角膜炎(Fungal keratitis, FK)的作用机制。方法:首先,利用TCMSP、UniProt数据库收集黄连解毒汤的活性成分及相关靶点,通过Cytoscape 3.9.1软件进行可视化,检索GeneCards、与OMIM数据库获取FK的相关靶点。然后,借助Venny 2.1平台绘制韦恩图,利用STRING平台构建蛋白相互作用(PPI)网络,并用Cytoscape进行可视化分析。将靶点信息导入Metascape数据库,进行后续的GO功能和KEGG通路富集分析,通过微生信平台进行可视化。最后使用AutoDock进行分子对接。结果:共获得黄连解毒汤活性成分66个,对应靶点247个,FK相关靶点1141个,得到66个交集靶点;网络分析的结果显示TNF、IL6、TP53、IL1B、CXCL8和CCL2为黄连解毒汤治疗FK的核心靶点,槲皮素、山柰酚、汉黄岑素、黄岑素、β-谷甾醇和刺槐素为关键活性成分。共富集得到720条GO条目,119条KEGG通路。分子对接结果表明六种核心活性成分与TNF和IL6均有较好结合活性。结论:黄连解毒汤可能通过槲皮素、山柰酚、汉黄岑素、黄岑素、β-谷甾醇和刺槐素等核心活性成分作用于TNF、IL6等核心靶点治疗FK,为黄连解毒汤治疗FK提供理论依据。

基于网络药理学方法与分子对接技术探讨黄连解毒汤治疗类风湿关节炎的作用机制

目的:基于网络药理学方法和分子对接技术探讨黄连解毒汤治疗类风湿关节炎(RA)可能的作用靶点及相关机制。方法:通过TCMSP平台收集黄连解毒汤的活性成分和靶点,从GeneCards和DisGeNET数据库中检索RA疾病靶点,将疾病靶点与黄连解毒汤活性成分靶点取交集,获得黄连解毒汤治疗RA的潜在作用靶点。应用Cytoscape3.9.1软件构建中药-活性成分-疾病靶点可视化网络,分析网络节点度值以筛选关键活性成分。通过蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析得到黄连解毒汤治疗RA的关键蛋白靶点,利用DAVID数据库对黄连解毒汤治疗RA的潜在靶点进行GO功能分析及KEGG通路富集分析,预测其作用机制。最后,借助AutoDockTools1.5.6软件进行分子对接,分析活性成分与关键蛋白靶点的相互作用关系。结果:共收集黄连解毒汤活性成分85个,对应治疗RA的潜在靶点114个。PPI网络分析显示,TP53蛋白(TP53)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)等为黄连解毒汤治疗RA的关键靶点;GO功能分析显示,黄连解毒汤治疗RA的机制涉及基因表达的正向调控等680个生物过程、细胞外空间等60个细胞组分、酶结合位点等128个分子功能;KEGG通路富集分析显示,黄连解毒汤活性成分主要通过AGE/RAGE、TNF、TLRs及PI3K-Akt等信号通路来对抗RA;分子对接显示,黄连解毒汤主要的有效活性成分与关键靶点分子TP53、TNF、IL-6能够自发结合。结论:黄连解毒汤通过多成分、多靶点及多通路发挥其治疗RA的作用。

基于SCF/C-kit信号通路探讨黄连解毒汤对脑出血急性期模型大鼠胃损伤的影响

目的:观察黄连解毒汤对脑出血急性期模型大鼠胃损伤的干预作用,并从干细胞因子/酪氨酸激酶受体(SCF/C-kit)信号通路方面探索其作用机制。方法:选择健康SD雄性10周龄大鼠进行实验。取部分大鼠采用自体血注入法制作脑出血模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和黄连解毒汤组,每组24只;另取24只大鼠仅进针不注入自体血,作为假手术组;另取24只常规饲养大鼠作为正常组。黄连解毒汤组大鼠予黄连解毒汤颗粒剂悬浊液54 mg/d灌胃,莫沙必利组大鼠予莫沙必利悬浊液0.27 mg/d灌胃,其余各组均灌胃给予生理盐水。分别于给药24 h、4 d、7 d后,随机取每组8只大鼠,处死取材。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组各时期大鼠胃组织损伤情况并进行病理损伤评分,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组各时期大鼠胃组织SCF、C-kitmRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组各时期大鼠胃组织SCF、C-kit蛋白相对表达量。结果:正常组与同期假手术组大鼠胃黏膜病理评分、胃组织SCF、C-kitmRNA及蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05);正常组、假手术组上述指标不同时间点组内比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠胃黏膜各观察时点病理评分均明显高于同期正常组、假手术组(P<0.01),胃组织SCF、C-kitmRNA及蛋白相对表达量均明显低于同期正常组、假手术组(P<0.01)。黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠各观察时点胃黏膜病理评分均明显低于同期模型组(P<0.01),给药7 d时评分均明显低于同组给药24 h、4 d时(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤组大鼠各观察时点胃黏膜病理评分均明显低于同期莫沙必利组(P<0.01)。黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠各观察时点胃组织SCF、C-kitmRNA及蛋白相对表达量均明显高于同期模型组(P<0.01),给药7 d时上述指标相对表达量均明显高于同组给药24 h、4 d时(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤组大鼠各观察时点上述指标相对表达量均明显高于同期莫沙必利组(P<0.01)。结论:脑出血急性期常继发急性胃黏膜损伤,黄连解毒汤对脑出血急性期胃黏膜损伤有一定的保护作用,其可能通过调控SCF/C-kit信号通路保护胃黏膜,有效减轻胃黏膜损伤。

黄连解毒汤联合针灸治疗颈动脉粥样硬化的临床效果

目的探讨黄连解毒汤联合针灸治疗颈动脉粥样硬化(CAS)的临床效果。方法选取2021年7月至2023年1月福建中医药大学附属第三人民医院收治的80例CAS患者作为研究对象,按随机数字表法分为对照组(40例)与治疗组(40例),对照组采用针灸治疗,治疗组采用黄连解毒汤联合针灸治疗,比较两组患者的血脂指标、颈动脉硬化指标及不良反应情况。结果治疗后,治疗组甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均低于对照组,治疗组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,治疗组颈动脉内-中膜厚度(IMT)、斑块面积(PA)、斑块积分(Course积分)均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗前后颈动脉中重度狭窄率、不良反应情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄连解毒汤联合针灸治疗CAS可有效调节血脂水平,改善颈动脉粥样硬化,具有较高的安全性,值得临床推广。