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题名人α防御素5在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化研究
被引量:5
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作者
王艾平
粟永萍
程天民
邹仲敏
王军平
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机构
第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所
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出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期291-296,共6页
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基金
军队“十一五”科技功关项目(No.06G076)
~~国家自然科学基金(No.30771892)
~~重庆市院士基金(No.CSTC,2007AB5022)资助~~
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文摘
采用PCR扩增大肠杆菌偏好的人α防御素5成熟肽(mHD-5)密码子序列,并将其克隆至pMAL-p2x质粒,构建pMAL-p2x-mHD-5表达载体,转化大肠杆菌BL_(21)(DE_3),诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件。经亲和层析、酶切和离子交换层析等方法分离、纯化重组mHD-5(rmHD-5)多肽。采用浊度法测定rmHD-5对细菌的抑制活性。通过优化表达条件,获得约30%的可溶性目的蛋白表达量,并成功纯化rmHD-5。rmHD-5对大肠杆菌标准菌株(ATCC25922)具有较强的抑制活性,在终浓度为62.5μg/mL时,90%以上的细胞被抑制。结果表明采用可溶性融合表达策略,在原核表达系统中诱导表达并纯化具有生物活性的防御素是可行的途径之一。
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关键词
防御素
原核表达
纯化
生物活性
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Keywords
defensin, prokaryotic expression, purify, bioactivity
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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题名防御素基因工程制备研究进展
被引量:4
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作者
王艾平
王军平
粟永萍
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机构
第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤
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出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期436-442,共7页
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基金
国家自然科学基金(No.30771892)
重庆市院士基金(No.2007AB5022)
军队“十一五”科技功关项目(No.06G076)
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文摘
本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展,包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择,在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点,以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题,将来的研究方向和开发前景。
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关键词
防御素
重组表达
纯化工艺
生物活性
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Keywords
defensins, recombinant expression, purify process, bioactivity
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分类号
Q789
[生物学—分子生物学]
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