IL-3对小鼠骨髓来源树突状细胞分化发育的影响

比较 GM- CSF+IL- 4与 IL- 3+IL- 4两种方法培养制备的树突状细胞 (Dendritic cell,DC)在形态、产量、免疫表型和抗原摄取能力方面的差异。用 GM- CSF+IL- 4和 IL- 3+IL- 4分别诱导小鼠骨髓来源的前体细胞分化为成熟树突状细胞 ,通过相差显微镜、扫描电镜、激光共聚焦扫描显微镜进行形态观察 ,流式细胞术分析细胞免疫表型和摄取抗原能力。结果表明 ,IL- 3+IL- 4诱导的 DC产量高 ,细胞纯度好 ,形态上与 GM- CSF+IL- 4诱导的DC类似 ;细胞免疫表型显示高表达 MHC 类分子 ,但低表达或不表达 CD80、CD86 ;IL- 3+IL- 4诱导的 DC具有强大的摄取抗原能力。 IL- 3替代 GM- CSF可诱导低表达共刺激分子的耐受型

转染IL-3基因的骨髓基质细胞促进骨髓移植小鼠造血功能重建

为了探讨可调控表达IL 3基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠造血功能重建的促进作用 ,建立了可诱导表达IL 3基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,加入多西环素 (Dox)诱导骨髓基质细胞系表达IL 3并检测其活性。C5 7BL/ 6 (H 2 b)小鼠经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB/C(H 2 d)小鼠去除T细胞的骨髓细胞 1× 10 7/只 ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on +IL 35× 10 5/只 ,并灌服多西环素诱导IL 3表达。在第 30天 ,6 0天检测骨髓移植小鼠外周血红细胞 ,白细胞数 ,骨髓有核细胞数 ,骨髓CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果表明 :成功建立可诱导表达IL 3基因的骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,异基因骨髓移植共输注基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3可使异基因骨髓移植小鼠外周血红细胞、血小板、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E ,CFU GMEE明显增加。结论 :输注基因工程化基质细胞 ,并诱导细胞因子IL

JAK2／STAT3途径在IL-6抑制LPS诱导的树突状细胞分化成熟中的作用

目的观察JAK2/STAT3信号途径在IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)分化成熟中的作用。方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养BMDCs;用相差倒置显微镜观察BMDCs的形态特点;用LPS诱导DCs成熟;采用流式细胞术观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型上的变化;Western blot检测BMDCs细胞质p-JAK2、总STAT3和p-STAT3的表达水平。结果形态观察和FCM分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P<0.01)。Western blot结果显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDC中p-JAK2、p-STAT3表达随作用时间增加而明显上调,提示IL-6促进JAK2/STAT3信号途径活化。结论JAK2/STAT3信号途径参与了IL-6抑制LPS诱导的BMDCs成熟过程。

多西环素诱导表达下IL-3基因转染小鼠骨髓基质细胞促进造血

本研究探讨用多西环素调控IL 3基因表达的小鼠骨髓基质细胞系对小鼠造血干细胞增殖分化的促进作用。构建含小鼠IL 3基因逆转录病毒载体系统 ,转染小鼠骨髓基质细胞系 ,获得QXMSC1Tet on IL 3;体外加入多西环素诱导IL 3基因表达并检测IL 3表达活性 ;观察细胞培养条件上清液对造血祖细胞集落形成单位的作用及QXMSC1Tet on IL 3与骨髓细胞共培养对造血干细胞增殖分化的影响。结果表明 :多西环素提高了QXMSC1Tet on IL 3细胞系IL 3的表达 ,促进骨髓造血祖细胞克隆形成数 ;与骨髓细胞共培养可促进造血干细胞的增殖分化。结论 :应用多西环素诱导外源基因转染的骨髓基质细胞IL 3的表达 。

IL-6通过SOCS3诱导小鼠髓源性DCs分化成熟障碍的分子机制研究

目的观察IL-6诱导小鼠髓源性DCs分化成熟障碍过程中SOCS3的表达变化并探讨其分子机制。方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养髓源性DCs(BMDCs)。用LPS诱导iDCs成熟,采用Real-Time RT-PCR和Western blot方法,观察IL-6处理前后LPS诱导的BMDCs中SOCS3表达的变化,并用甲基化特异性PCR观察SOCS3启动子CpG岛的甲基化状态。结果 Real-Time RT-PCR和Western blot结果显示,LPS能显著诱导BMDCs SOCS3 mRNA和蛋白的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs SOCS3 mRNA和蛋白表达上调的能力被显著抑制(P<0.05)。甲基化特异性PCR与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDCs SOCS3启动子区CpG岛被甲基化。结论 IL-6通过诱导SOCS3基因启动子区CpG岛的甲基化来抑制SOCS3表达,进而阻遏iDCs分化成熟,促进胃癌等肿瘤细胞侵袭转移。

银屑病患者骨髓基质细胞分泌IL-3与IL-7水平的检测

目的:检测银屑病患者与对照组骨髓基质细胞分泌IL-3与IL-7的水平。方法:采用密度梯度离心法分离患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,传代后流式细胞仪检测细胞表面标志并用ELISA法检测上清液中IL-3和IL-7的水平。结果:患者组骨髓基质细胞分泌IL-3显著低于对照组(P<0.05),而IL-7的分泌水平两组间无统计学差异(P>0.05)。结论:银屑病骨髓造血微环境可能存在异常。

TNF-α对放烧复合伤小鼠骨髓细胞IL-3R调节作用的研究

目的：研究重组人肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）对放烧复合伤小鼠骨髓有核细胞（ＢＭＮＣ）ＩＬ－３Ｒ的调节作用。方法：以放烧复合伤小鼠为模型，观察一次性静脉注入不同剂量的ＴＮＦ－α对ＢＭＮＣ增殖的影响及１０万ＵＴＮＦ－α对ＩＬ－３Ｒα表达及功能、ＢＭＮＣ数量的调节作用。结果：①静注不同剂量的ＴＮＦ－α对放烧复合伤小鼠ＢＭＮＣ增殖的影响不一；②１０万Ｕ的ＴＮＦ－α１、３ｄ上调放烧复合伤小鼠ＩＬ－３Ｒα的平均含量（对阳性率及功能无明显影响），而致ＢＭＮＣ数量明显降低；７ｄ时恢复至对照组水平；③１０万ＵＴＮＦ－α１、３ｄ致放烧复合伤小鼠ＢＭＮＣ计数明显降低。结论：１０万ＵＴＮＦ－α在体内虽能上调放烧复合伤小鼠ＩＬ－３Ｒα的平均含量而剌激造血，但可能因其同时激活造血调控网络整体效应却抑制骨髓造血。

淫羊藿苷和骨髓间充质干细胞共育液对兔骨关节炎模型关节液中IL-1、TNF-α、IL-10、MMP-3表达的影响

目的观察淫羊藿苷与骨髓间充质干细胞共育液对兔骨关节炎模型关节液中IL-1、TNF-α、IL-10、MMP-3表达的影响。方法将20只兔随机分为空白组、模型组、BMSCs组、BMSCs+ICA组。造模成功后BMSCs组和BMSCs+ICA组关节腔内分别注射BMSCs和BMSCs+ICA;空白组和模型组注射等量生理盐水。结果与对照组相比,各组治疗前关节液中IL-1、TNF-α、MMP-3水平升高,IL-10水平下降。与模型组相比,BMSCs及BMSCs+ICA组关节液中IL-1、TNF-α、MMP-3水平下降,IL-10水平升高,且BMSCs+ICA组改善幅度优于BMSCs组。结论淫羊藿苷和骨髓间充质干细胞共育液关节腔注射能降低兔骨关节炎模型关节液中IL-1、TNF-α、MMP-3的表达,升高IL-10的表达。

IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性DCs成熟的实验研究

目的观察白细胞介素-6(IL-6)对于内毒素(LPS)诱导的小鼠髓源性树突状细胞(DC)成熟效应的抑制作用。方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养髓源性DCs(BMDCs)。用相差倒置显微镜观察BM-DCs的形态特点。用LPS诱导DC成熟。采用FACS结合混合淋巴细胞反应,观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型和刺激同种淋巴细胞增殖功能上的变化。结果形态观察和FACS分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P<0.05)。混合淋巴细胞反应显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDCs刺激同种淋巴细胞增殖的能力明显减弱,并呈剂量依赖关系(P<0.05)。结论IL-6能明显抑制LPS诱导的BMDCs成熟,可能是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一。

白术对小鼠骨髓细胞增殖和IL-1的影响

目的 :观察白术对小鼠造血功能和 IL- 1产生的影响。方法 :用 1 0 0 %白术浸出液给小白鼠连续灌胃1 0 d,1次 /d,检测小鼠骨髓细胞增殖反应和 IL- 1的产生。结果 :白术组对以上两项免疫学指标均有明显增强作用 ,与对照组相比有非常显著性差异 ( P<0 .0 1 )。结论 :白术可促进小鼠骨髓细胞增殖反应和 IL- 1的分泌。

骨髓内皮细胞产物对 CFU-F、CFU-GM和WEHI-3细胞生长的作用

为了研究骨髓内皮细胞的造血调控功能 ,采用串联超滤技术从小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液 ( m BMEC- CM)中制备出不同相对分子质量 ( Mr)范围的超滤组分 ,进行细胞集落形成实验 ,检测了 m BMEC- CM及其超滤组分对骨髓成纤维祖细胞 ( CFU- F)、粒巨噬系造血祖细胞 ( CFU- GM)和小鼠粒单系白血病细胞系 WEHI- 3细胞生长的作用 .结果显示 :m BMEC- CM抑制 CFU- F的生长 ,对 CFU- GM和 WEHI- 3细胞的生长却未见明显影响 ;Mr>1 0 4 组分对 CFU- F的生长无明显作用 ,但促进 CFU- GM的生长和抑制 WEHI- 3细胞的生长 ;Mr<3× 1 0 3组分对这 3种细胞的集落形成均有抑制作用 .

含白细胞介素-3上清液促进小鼠骨髓基质细胞生长作用的体外观察

在培养液中加入WEHI-3上清液(含白细胞介素-3,IL-3)作为细胞刺激因子培养小鼠骨髓细胞,第6d培养的细胞结果表明,WEHI-3上清液能在体外促进基质细胞贴壁增殖。含20%WEHI-3上清液的实验组细胞数量为1.334×10~6个/L,光镜和扫描电镜下可见各具特征的4种基质细胞:1.类成纤维细胞:胞体呈长梭形,表面有许多丝状和微绒毛样的突起;2.网状细胞:胞体不规则,有树突状突起,偶见有沿突起走行的皱褶;3.类巨噬细胞:胞体椭圆形,细胞内含吞噬颗粒,ANAE阳性,表面有片层样皱褶和长丝状突起;4.脂肪细胞:此类细胞较少见,胞体呈圆形,细胞内含脂质,苏丹黑B染色阳性,表面平滑。同时,光镜和扫描电镜下均可见基质细胞与造血细胞间有密切接触。而对照组贴壁细胞数少,细胞胞体小,且胞质较少,酶活性也差。细胞数仅为58.83/mm^2。扫描电镜下观察,细胞胞体较小,表面低平。本研究结果表明,WEHI-3上清液具有促进小鼠基质细胞生长和增殖的作用,并可引起相应的形态及组织化学改变。

白细胞介素2和3活化的骨髓细胞杀灭肿瘤细胞和造血的作用

肺癌患者的骨髓有核细胞用IL-2活化后对自身肺脓癌细胞具有很强的杀伤能力,与外周血相比,杀伤活性高、有效活性时间长,表明可用骨髓有核细胞制备高能长效杀瘤活性细胞,进行癌的过继性细胞免疫治疗。先用IL-2培养,48h后加入IL-3培养,既可保持IL-2诱导的杀瘤活性,又有与新鲜骨髓同样的造血能力,可用本文方法净化骨髓中的肿瘤细胞作自身骨髓移植。

小鼠髓源未成熟树突状细胞的分离与培养

本试验旨在建立一种体外诱导培养小鼠未成熟树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。应用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rGM-CSF)在体外诱导小鼠骨髓前体细胞分化为未成熟树突状细胞,进行形态学观察、细胞表型分析、刺激T细胞增殖等方法,对小鼠髓源未成熟树突状细胞的体外诱导培养进行鉴定。试验结果显示,小鼠骨髓来源的DC在体外培养8d后,特异性细胞表面标志CD11c的表达量达到81.09%,中度表达MHCⅡ,低表达CD40、CD80、CD86。本试验成功地建立了体外小鼠髓源DC扩增的方法。

枸杞对小鼠骨髓细胞增殖和白细胞介素-1的影响

目的 :观察枸杞对小鼠造血功能和 IL -1产生的影响。方法 :用 10 0 %枸杞浸出液给小白鼠连续灌胃 10 d,1次 /d,检测小鼠骨髓细胞增殖反应、IL-1产生。结果 :枸杞组对骨髓细胞增殖反应明显增强 ,与对照组相比有非常显著性差异 (P<0 .0 1) ,而枸杞组 IL-1与对照组相比无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :枸杞可促进小鼠骨髓细胞增殖反应 ,而对

小鼠骨髓源性树突状细胞和DC2.4中RelB基因表达水平的比较研究

目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bonemarrow-deriveddendriticcells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平。方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导体系扩增骨髓前体细胞的方法产生未成熟的BM-DC,未成熟的BM-DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的BM-DC;DC2.4细胞系用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液于37℃,5%CO2条件孵箱中培养。用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟的BM-DC、未成熟的BM-DC和DC2.4,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果流式细胞术分析显示MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达,在成熟的BM-DC中则呈高水平表达;共刺激分子CD86在成熟的BM-DC和DC2.4中均呈高水平表达,而在未成熟的BM-DC中呈低水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达;而在成熟的BM-DC中呈高水平表达,成熟的BM-DC与未成熟BM-DC及DC2.4均存在显著差异(P<0.01)。结论RelB基因的表达与小鼠BM-DC的成熟状态密切相关。RelB基因在DC2.4中呈低水平表达,提示DC2.4是一种不成熟的DC细胞系。DC2.4具有的未成熟DC的特点可能与RelB基因的低水平表达有一定关系。抑制骨髓DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。

小鼠骨髓来源树突细胞体外扩增和鉴定

目的 探讨从小鼠骨髓分离纯化及大量扩增树突细胞 (DC)的方法 ,并对其行免疫表型和形态鉴定。 方法 制备 Balb/ c小鼠骨髓细胞 ,利用 0 .83% NH4 Cl- Tris溶液、抗鼠 CD4 / CD8/ CD4 5R单克隆抗体和补体溶液 ,依次去除红细胞、淋巴细胞、单核 -巨噬细胞、粒细胞等混杂细胞以获得纯化的 DC,再将其培养于含有小鼠重组的粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (m GM- CSF)和白细胞介素 4 (m IL - 4 )的 RPMI 1 6 4 0营养液中 ,培养第 6～ 8天收集悬浮的细胞 ,电子显微镜观察细胞形态并用流式细胞术检测小鼠 DC细胞表面特有的 CD1 1 b抗原和 MHC- 类分子的表达量。 结果 每只小鼠可扩增到 (2～ 4 )× 1 0 6个 DC细胞 ,细胞纯度 >85 % ;细胞表面高水平表达小鼠 DC细胞特异性抗原 CD1 1 b和 MHC- 类分子 ,电镜下细胞形态符合典型的树突细胞形态。 结论 联合应用 m GM- CSF和m IL-

小鼠骨髓和脾来源树突状细胞的分离与扩增培养

目的：探索树突状细胞（ＤＣ）及其前体的分离纯化及其体外扩增的方法。方法：无菌制备ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓和脾细胞；先后用红细胞裂解液、抗鼠ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ细胞单抗（ＭｃＡｂ）和补体溶液，依次去除红细胞，Ｔ、Ｂ细胞，粒细胞和单核巨噬细胞等混杂细胞而获得纯化的ＤＣ及其前体；又在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）和白细胞介素（ＩＬ４）协同诱导下培育，ＤＣ前体分化发育成ＤＣ或郎罕细胞（ＬＣ）并扩增，同时阻抑巨噬细胞发育生长。结果：ＤＣ／ＬＣ细胞数增加，其形态在光镜下多为特征性星形，也有梭形和多角形；扫描电镜下观察其绝大多数为特征性星形，且有１～４级不等的树突状突起，其纯度高达９５％以上。ＤＣ／ＬＣ在功能上明显刺激同种异体混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）。结论：①结果所得细胞的形态和功能符合ＤＣ／ＬＣ；②建立连续排异结合ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ４联合诱生培育的方法，可获得大量高纯度的ＤＣ／ＬＣ。

小鼠骨髓来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞的融合瘤苗研制

目的：为了提高肿瘤的免疫原性，有效地引发并增强宿主体内抗肿瘤免疫应答，特研制小鼠骨髓树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ，ＤＣｓ）与ＮＳ１骨髓瘤细胞的融合瘤苗。方法：利用特异的ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０单克隆抗体和补体缓冲液及ＤＣｓ的半粘附性，直接从骨髓细胞中分离出高纯度的ＤＣｓ及其前体；再联用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）和白细胞介素（ＩＬ）４体外培育，协同诱导ＤＣｓ及其前体分化增殖，以获得大量高纯度的ＤＣｓ；然后用聚乙二醇（ＰＥＧ），使其与８氮杂鸟嘌呤（ＡＧ）处理过且处对数生长期的ＮＳ１骨髓瘤细胞融合，并用次黄嘌呤氨基蝶呤胸腺嘧啶核苷（ＨＡＴ）选择培养基筛选融合细胞，观察融合细胞的生长特性和体内致瘤性；最后直接从ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠尾静脉免疫接种活的融合细胞，再观察其诱导宿主抗肿瘤的免疫效果。结果：①融合细胞也有刺激混合淋巴细胞增殖反应的能力，其在体外能分裂增殖，但明显低于肿瘤细胞，无体内致瘤性；②接种活融合细胞的免疫小鼠能抵抗野生肿瘤攻击长达９０ｄ未见诱发肿瘤；③对照组小鼠１００％出现诱发肿瘤。结论：融合细胞可能加工处理并表达尚未鉴定的肿瘤特异抗原，进而激发宿主体内抗肿瘤免疫反应，使?

不同成熟状态小鼠树突状细胞的体外诱导

目的:体外诱导小鼠骨髓来源的不同成熟状态树突状细胞(dendriticcells,DCs)。方法:rmGM CSF体外培养小鼠骨髓细胞,5～6d后,利用磁性细胞分离器(MACS)分离CD11c+细胞,部分细胞加入rmTNFα继续培养1～2d,通过流式细胞仪检测分别检测细胞表面标志,同种混合淋巴细胞反应检测细胞的体外刺激能力。结果:小鼠骨髓细胞经rmGM CSF培养5～6d,再经过MACS分离可获得大量未成熟DCs,细胞表面出现少量短而粗的突起,低水平表达MHCⅡ分子和共刺激分子CD80、CD86及CD40,刺激同种CD4+T细胞的混合淋巴细胞反应能力较弱;加入rmTNFα继续培养可获得成熟DCs,细胞表面出现大量细长突起,细胞表面高水平表达MHCⅡ分子和共刺激分子CD80、CD86及CD40,刺激同种CD4+T细胞的混合淋巴细胞反应能力较强。结论:通过rmGM CSF或rmGM CSF+rmTNFα体外培养体系可以获得大量未成熟DCs或成熟DCs,为进一步研究DCs的生物学功能提供实验基础。