Dendritoma治疗小鼠移植性脑胶质瘤的实验研究

脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发肿瘤,约占颅内肿瘤的40%。通过近年的研究证明,人脑并非是免疫特免区。肿瘤本身的低免疫原性,肿瘤产生的免疫抑制因子,以及肿瘤病人免疫力的低下,都是造成脑胶质瘤细胞＂免疫逃逸＂现象发生的原因[1]。而树突状细胞（dendritic cell,DC）作为体内功能最强的抗原递呈细胞,在以T细胞识别肿瘤抗原为核心的肿瘤免疫治疗中起重要作用[2]。

人树突状细胞与肝癌细胞系HLE融合细胞的构建

目的构建人源树突状细胞(DC)与肝癌细胞系HLE的融合细胞。方法含15%FCS的RPMI1640培养HLE细胞,用GMCSF和IL4培养成人外周血单核细胞7d,并用TNFα和PGE2促成熟2d后获得成熟DC;用荧光染料PKH67GL(绿色荧光)和PKH26GL(红色荧光)分别标记DC和HLE细胞,以50%聚乙二醇和10%二甲基亚砜为融合剂,构建可供流式细胞仪快速筛选的融合细胞。结果成功构建具有红、绿双色荧光的人源DC与HLE的融合细胞,融合率为16.8%。结论利用PKH67GL和PKH26GL为标记,可获得便于快速识别和筛选的DC与肝癌细胞的融合细胞,为使用融合DC疫苗治疗肝癌奠定了基础。

肝癌融合细胞疫苗的快速制备

目的用48 h 快速培养获得的成熟树突细胞与肝癌细胞系 HCCLM3构建融合细胞疫苗。方法用 CD14正选磁珠从外周血中分离出CD14^+细胞,加入含有 GM-CSF 和 IL4的树突细胞完全培养基培养24 h,再加入肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β、IL-6和 PGE2,继续培养24 h 获得树突细胞并检测免疫分子 CD80、CD86、CD83和 HLA-DR 的表达。用50%聚乙二醇+10%二甲基亚砜融合 HCCLM3与所获树突细胞构建融合细胞并检测其免疫分子的表达。自体 T 细胞增殖实验按照刺激细胞不同分为融合细胞组(RH)、树突细胞组(DC)、HCCLM3组(H)及树突细胞与 HC-CLM3混合组(HH)。结果48 h 培养获得成熟树突细胞的 CD80、CD86、CD83和 HLA-DR 表达率可达94.43%、99.71%、62.78%和99.34%,它与 HCCLM3构建的融合细胞同样表达此类免疫分子,并且对自体 T 细胞增殖的刺激作用更强(P<0.05)。结论用48 h 快速培养获得的树突细胞可以成功构建能有效刺激自体 T 细胞增殖反应的融合细胞,该方法优点显著。