不同植物生长调节剂对铁皮石斛(Dendrobium candidum)再生的影响

本实验以铁皮石斛无菌苗茎段为外植体,通过添加不同浓度的植物生长调节剂,诱导铁皮石斛愈伤组织形成与分化,建立铁皮石斛组织培养再生体系。结果表明,外植体接种5 d后,在改良MS培养基上添加2 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA,可达到100%的愈伤诱导率。将愈伤组织接种在MS培养基上,添加0.1 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,不定芽诱导率为90.8%。适合铁皮石斛芽增殖培养基为：MS＋7 g/L琼脂＋30 g/L蔗糖＋100 mg/L Vc＋0.5 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L NAA。PBU浓度为0.5 mg/L,NAA浓度为0.05 mg/L时,芽苗生长情况良好,最适合用于不定芽伸长。铁皮石斛最适生根的培养基为：MS＋7 g/L琼脂＋30 g/L蔗糖＋100 mg/L Vc＋0.5 mg/L IBA,生根率可高达94.1%。本研究成功建立了铁皮石斛高效再生体系。

PEG6000模拟干旱胁迫对铁皮石斛幼苗生理和叶绿素荧光特性的影响

【目的】研究聚乙二醇6000(PEG 6000)模拟干旱对铁皮石斛Dendrobium candidum生理和叶绿素荧光特性的影响,为铁皮石斛的品种选育、产业化栽培和近野生栽培等提供参考。【方法】以铁皮石斛‘晶品1号’D.candidum‘Jingpin No.1’幼苗为实验材料,通过不同质量分数PEG 6000(5%、10%、20%、30%)模拟干旱胁迫处理铁皮石斛幼苗,观察铁皮石斛幼苗茎段和叶片细胞结构,并检测铁皮石斛叶片过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)质量摩尔浓度、可溶性糖质量分数、可溶性蛋白质量分数、叶绿素质量分数及叶绿素荧光参数的动态变化。【结果】①高质量分数PEG 6000(20%-30%)处理后铁皮石斛茎段和叶片细胞内叶绿素质量分数减少。②PEG 6000模拟干旱胁迫处理对铁皮石斛幼苗可溶性糖和可溶性蛋白、MDA、POD和CAT有显著影响(P<0.05)。可溶性糖质量分数随着PEG 6000质量分数的增加和处理时间的延长均呈上升趋势,到第12天时达最高值;可溶性蛋白则呈下降趋势;MDA质量摩尔浓度、POD活性和CAT活性随着PEG 6000质量分数的增加呈先上升后下降的趋势,在PEG 6000为20%时达到峰值。③PEG 6000模拟干旱处理对铁皮石斛幼苗最大光化学效率(F_(v)/F_(m))、光合效率(α)、电子传递速度(ETR)、光化学猝灭系数(q_(P))和非化学猝灭系数(qNP)等叶绿素荧光参数有显著的影响(P<0.05)。随着PEG 6000胁迫处理时间的延长和PEG 6000质量分数的增加,α、ETR、F_(v)/F_(m)和q_(P)均呈显著下降趋势(P<0.05);而qNP则呈先上升后下降的趋势。【结论】20%PEG 6000处理12 d可用作铁皮石斛抗干旱品种的筛选,铁皮石斛幼苗可通过增加可溶性糖质量分数,减少可溶性蛋白质量分数,提高POD和CAT活性等防御酶活性抵抗和适应一定程度的干旱胁迫;铁皮石斛幼苗的最大光能转换效率降低,光合系统Ⅱ(PSⅡ)受到胁迫损伤,严重影响铁皮石斛幼苗的光合作用。同时,铁皮石斛幼苗通过启动qNP途径来消耗PSⅡ反应中心吸收的过剩光能,维持正常的光合作用。因此,可溶性糖和可溶性蛋白、POD和CAT以及叶绿体荧光参数均可作为铁皮石斛耐干旱的指标。

铁皮石斛近野生活树附生栽培技术研究

铁皮石斛Dendrobium officinale是我国名贵的中药材,市场需求量大,林下种植应运而生,铁皮石斛活树附生栽培模式是其最主要的形式。选择平原不同附生树种、山地天然次生阔叶混交林不同坡向不同附生树种进行近野生活树栽培试验,并进行生长及效果观测,以期实践总结出最佳的铁皮石斛的活树附生栽培技术。研究结果表明,不同附生树种、不同坡向对活树附生栽培铁皮石斛的茎高、茎粗和单丛鲜质量有显著影响,选择合适的林地和附生树种能有效提高铁皮石斛近野生栽培的产量。仙居县及类似地区铁皮石斛近野生栽培平原附生树种宜选择与南方红豆杉Taxus wallichiana var.mairei相似树冠相对透光率大的树种,铁皮石斛种苗宜选择‘晶品1号’;山地天然次生阔叶混交林铁皮石斛近野生活树附生栽培宜选择向阳坡和东南坡多的林地,附生树种优先选择青冈栎Cyclobalanopsis glauca、化香树Platycarya strobilacea、檵木Loropetalum chinense、枫香树Liquidambar formosana、野柿Diospyros kaki var.silvestris等阔叶树。

基于CiteSpace知识图谱及专利计量对铁皮石斛相关研究的可视化分析

基于CiteSpace知识图谱与专利分析,探讨铁皮石斛的研究热点与发展趋势。通过系统检索中国知网(CNKI)数据库和Web of Science(WOS)核心合集数据库关于铁皮石斛的中、英文文献,运用CiteSpace 5.8.R3软件对关键词信息绘制知识图谱,进行铁皮石斛发展历程与研究热点的可视化分析,并结合专利计量学研究手段分析铁皮石斛相关专利的领域分布与发展趋势,以及铁皮石斛在食品应用开发方面的专利情况。结果表明,研究热点国内外各有侧重,国内专注于铁皮石斛多糖、保健功能、化学成分、产品开发及基因等研究,国外偏向于动物实验及安全性评价等临床实验研究,在活性成分鉴定、药理作用及作用机制等领域研究较多。专利计量分析发现铁皮石斛食品种类丰富且大多为明确保健功能的食品,共涉及9种保健功能,其中以增强免疫力为主,占比42.04%,铁皮石斛在食品领域可在不同保健功能开发,产品制备技术以及铁皮石斛花、叶上进一步进行研究。本研究为分析铁皮石斛的研究内容、判断研究热点及食品专利申请方向提供参考。

铁皮石斛主要成分及其含量检测方法的研究

铁皮石斛是石斛属的一种,长期以来作为中药材食用,具有生津养阴的作用。铁皮石斛中含有水分、多糖、甘露糖、生物碱、微量元素等成分,主要的活性物质是多糖类化合物。2020年国家卫健委发布通知将铁皮石斛列为药食同源管理,这将推动铁皮石斛产业的发展,促使人们更进一步认识铁皮石斛。对铁皮石斛的主要成分及其含量检测方法进行分析,进一步了解铁皮石斛的价值。

发酵铁皮石斛花醇提物的抗氧化和美白活性研究

探究微生物发酵对铁皮石斛花功效活性的影响。分别将毕赤酵母、酿酒酵母、乳酸菌三株菌对铁皮石斛花进行纯种发酵,以80%乙醇为溶剂进行超声提取得到发酵铁皮石斛花乙醇提取物。测定其黄酮和总酚含量,通过DPPH、ABTS+自由基清除能力和总抗氧化能力测定,探究其发酵前后的抗氧化活性和抑制酪氨酸酶活性的美白功效。结果表明,经毕赤酵母发酵后的铁皮石斛花乙醇提取物中黄酮含量最高为13.17 mg/g,经酿酒酵母发酵铁皮石斛花乙醇提取物中总酚含量最高为1.04 mg/g。随着提取物浓度增大,提取物整体抗氧化能力逐渐增强,在1 mg/mL条件下,酿酒酵母发酵铁皮石斛花乙醇提取物的DPPH自由基清除率最高达81.5%,对ABTS+自由基清除率最高为66.9%,总抗氧化能力最强为1.03 mmol/g,乳酸菌发酵铁皮石斛花乙醇提取物的酪氨酸酶抑制率最高为37.8%。

基于云南小曲清香白酒的特色铁皮石斛配制酒研发与抗氧化能力研究

石斛作为云南省特色名贵中药之一,具有润肺、清热、抗衰老、抗肿瘤等功效。本研究以云南小曲清香白酒(酒精度为30%alc/vol)为基酒,通过勾调和酒体设计,按药酒比为1∶10、2∶10、3∶10、4∶10、5∶10加入云南铁皮石斛原浆药液,形成5个石斛配制酒产品。经专业品酒师感官评定,以云南铁皮石斛原浆药液和30%alc/vol酒精度云南小曲清香白酒按照3∶10形成的石斛配制酒产品具有较突出的感官特性,该产品酒精度为23%alc/vol,酒体清亮透明,石斛药香与曲香协调,香气清雅舒适,口感醇净绵甜。该铁皮石斛配制酒产品主要活性成分经测定分析,石斛碱含量为0.127μg/m L,石斛多糖含量为5.080mg/m L,总多酚含量为7.190μg/mL,总氨基酸含量为26.029μg/mL。同时相较于云南小曲清香白酒基酒,石斛配制酒表现出较强的抗氧化能力。综上,以云南小曲清香白酒和特色铁皮石斛原浆药液勾调设计形成的石斛配制酒产品在一定程度上更适宜现代消费人群对露酒产品感官和营养功能的需求。

硅和硒复配剂对低温胁迫下铁皮石斛抗寒性的影响

为研究低温胁迫下硅和硒复配剂处理对铁皮石斛(Dendrobium candidum)抗寒性的影响,将铁皮石斛幼苗2℃低温胁迫7 d后,用不同浓度的硅和硒复配剂进行叶面喷施,共12种复配剂处理。结果表明,低温胁迫下硅和硒配合使用,才可以在一定程度上减缓铁皮石斛的低温伤害,具体表现为叶绿素含量和Pro含量的增加,SOD、POD和CAT活性增强,MDA含量下降;喷施浓度为50 mg/L硅+5 mg/L硒、50 mg/L硅+7.5 mg/L硒复配剂时,其叶绿素含量、Pro含量、抗氧化酶活性均显著增加,MDA含量显著下降,显著减缓了铁皮石斛的低温伤害,提高了其抗寒性。

铁皮石斛原球茎与原药材免疫调节作用的比较研究

目的:比较研究铁皮石斛组织培养原球茎与原药材对免疫功能的作用及急性毒性反应。方法;用白细胞计数法、免疫器官重量法、碳粒廓清法、淋巴细胞转化试验来研究药物对环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下的对抗作用;以最大耐受量的方法研究药物的急性毒性。结果:铁皮石斛组织培养原球茎有升高环磷酰胺模型小鼠外周血白细胞数,增加模型鼠胸腺或脾脏指数,增强巨噬细胞的吞噬功能,促进模型鼠体内淋巴细胞转化的作用。口服给予药物量54.56 g生药/kg,小鼠仍能耐受。这些作用与原药材相似。结论:铁皮石斛组织培养原球茎与原药材均具有提高免疫功能作用,两者作用强度相似,最大耐受量相当于人临床用药量的227倍。

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。

铁皮石斛种子、原球茎和类原球茎体的超低温保存研究

对珍稀濒危植物铁皮石斛的种子、原球茎和类原球茎体进行了液氮超低温保存研究。把４个月龄的种子脱水至含水量为１２％～１９％，能获得较高的冻后存活率（９５％）和较快的恢复生长速率。种子在０．５ｍｏｌ／Ｌ脱落酸培养基上萌发３周所形成的原球茎，用玻璃化保护剂ＰＶＳ２处理１５ｍｉｎ，其冻后存活率可达８８％。将生长旺盛的暗培养类原球茎体的含水量在６～７ｄ内干燥至３０％±２％，其冻后存活率可达４８％～８０％。

不同分子量铁皮石斛多糖体外抗氧化活性研究

采用分步醇沉法对铁皮石斛总多糖(DSP)进行分离,得到乙醇终浓度为40%(DSP3)、70%(DSP2)和90%(DSP1)的多糖。进一步对4种铁皮石斛多糖的抗氧化活性进行测定,结果显示:DSP1对DPPH·的清除作用、总抗氧化能力、抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血和抑制Fe2+-VC诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化作用效果最佳,DSP和DSP3次之,DSP2相对较弱;对·OH的清除率大小依次为DSP>DSP3>DSP1>DSP2;且不同相对分子质量的铁皮石斛多糖均可显著抑制羟基自由基介导的DNA氧化断裂。结果提示:不同相对分子质量铁皮石斛多糖均有抗氧化作用,且抗氧化能力与其相对分子质量大小有关。

铁皮石斛组培品与野生品的形态组织学和多糖含量比较研究

目的:比较铁皮石斛组培品和野生品在植物形态、组织结构及总多糖含量上有无差异。方法:显微切片观察、显微摄影;苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果与结论:铁皮石斛组培品与野生品在植物形态及组织结构上基本相同,总多糖含量无显著差异,表明铁皮石斛经组织培养和人工培植过程后药材性状和质量与野生药材相近,初步证明经过组织培养快速繁殖和人工培植铁皮石斛是解决其资源紧缺问题的有效途径。

2种石斛属植物和小叶石仙桃多糖的组织化学定位

为对不同年龄的铁皮石斛(Dendrobium candidum)、铜皮石斛(D.moniliforme)及石斛伪品-小叶石仙桃(Pholidota chinensis)不同器官中的多糖进行组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的最佳采收期,根据多糖的理化性质,材料经冰冻切片,用改良的高碘酸-席夫试剂(PAS)对多糖进行组织化学定位;结果表明,多糖类物质主要存在茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中。其总多糖含量有如下顺序:二年生的铁皮石斛茎>铜皮石斛茎≈>小叶石仙桃茎,铁皮石斛根≈铜皮石斛根>小叶石仙桃根,铁皮石斛叶≈小叶石仙桃叶>铜皮石斛叶。另外,在不同的器官中,铜皮石斛的多糖含量呈现“茎≈根>叶”和小叶石仙桃的多糖含量呈现“叶>茎≈>根”的规律,而二年生的铁皮石斛则为“茎>叶>根”。这表明在种间及同种植物的不同器官、不同年龄,其多糖的含量存在差异。而3种兰科植物中,以二年生铁皮石斛茎的多糖含量最高,表明其药用价值也最高。

铁皮石斛化学成分及药理作用研究进展

铁皮石斛是名贵的中草药之一。其含有多糖、芪类、生物碱、氨基酸和微量元素等多种成分,具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、降血糖和养阴生津等多种生物活性。本文综述了铁皮石斛化成分和药理学研究进展。

石斛属RAPD分析及鉴定铁皮石斛的特异性引物设计

目的 :对石斛属植物亲缘关系进行分析 ,并设计一对能方便准确地鉴别铁皮石斛的特异性引物。方法 :用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对石斛属内 2 6个种和金石斛属的 1个种进行了基因组DNA多态性分析 ,并构建聚类树状图。根据筛选到的DNA片段序列 ,将Sangon18引物从 3’端延长至 2 0bp ,得到所要的特异性引物。结果和结论 :设计成的特异性引物能方便快捷地鉴别出铁皮石斛。此技术为药材的分子鉴定提供了一个新思路。

3种石斛光合作用和叶绿素荧光特性的比较研究

以美花石斛、春石斛和铁皮石斛为材料,对它们的叶片进行光合作用、叶绿素含量和叶绿素荧光等参数的测定。结果表明:3种石斛的光饱和点都低于300μmol.m-2.s-1,且美花石斛具有较高的净光合速率和较低的光饱和点,容易引起光抑制;美花石斛的羧化效率高于春石斛和铁皮石斛,其净光合速率随着CO2浓度的升高而迅速升高,并在CO2浓度达到500μmol.m-2.s-1时达到最大值;美花石斛的非循环电子传递速率(ETR)、实际光化学反应量子效率(Yield)和光化学猝灭系数(qP)都明显高于铁皮石斛和春石斛,而春石斛具有较高的非光化学猝灭系数(qN),其光合机构的自我保护能力较强;美花石斛的叶绿素a、叶绿素b以及总叶绿素含量都较低。研究发现,3种石斛的光饱和点均比较低,具有石斛喜阴的生活习性,都表现出对密林和悬崖等独特生长环境的适应,并以美花石斛的这种特性更为突出。

铁皮石斛原球茎分化适宜培养基研究

试验了基本培养基、蔗糖浓度、天然提取物以及植物激素对铁皮石斛原球茎分化的影响。原球茎分化的适宜培养基为:1/2Ms+20%马铃薯提取液+2mg/LBA+0.2mg/L NAA+2%蔗糖。

铁皮石斛及金钗石斛菌根真菌的分离及其生物活性测定

目的 :对我国云南、四川等地采集的野生铁皮石斛Dendrobiumcandidum和金钗石斛D .nobile根中的内生真菌进行分离并测定其生物活性。方法 :采用平板分离法分离内生真菌 ;所获得真菌分别与铁皮石斛种子、铁皮石斛及金钗石斛无菌苗共培养测定其生物活性。结果 :分离获得内生真菌 2 5种 ,主要属于担子菌Basidiomy cotina和半知菌Deuteromycotina ;生物活性测定结果表明 ,其中 5种真菌可促进铁皮石斛种子萌发 ;7种真菌可与铁皮石斛和金钗石斛幼苗形成共生关系 ,但仅有 3种真菌对幼菌有促生作用。结论 :分离和筛选促进石斛生长发育的适宜菌根真菌 ,是菌根技术应用于石斛生产的关键问题之一。