铁皮石斛药材HPLC指纹图谱研究

目的建立铁皮石斛药材的RP-HPLC指纹图谱。方法采用梯度洗脱的方法,以KromasilKR100-5C18(250mm×4.6mm,5μm)为分析用色谱柱,以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相建立了铁皮石斛药材的指纹图谱,并进行了相似度的计算。结果该方法可使铁皮石斛中各成分得到较好的分离,并根据检测结果确定了15个共有指纹峰。结论该指纹图谱检测方法简便、重现性好,可作为铁皮石斛药材质量控制的重要方法。

液-质联用法测定铁皮石斛和西洋参及制剂中多菌灵残留

用高效液相色谱-质谱联用法定量检测铁皮石斛、西洋参药材及其制剂中的多菌灵残留。在酸性条件下以甲醇提取中药材和制剂中的残留多菌灵，分析色谱柱为Diamonsil C18（4．6mmi．d.×250mm，5μm），以4％四氢呋喃水溶液-甲醇梯度洗脱，采用选择离子监测模式，以m／z192为检测定量离子。多菌灵出峰时间在27min左右，线性范围为0．22—33ng，相关系数0．9993；方法检出限为0．015mg／L；定量限为0.022ms／L；平均回收率在95．6％以上。该方法灵敏、准确、可靠，定量范围宽，耐用性强，可作为中药中多菌灵残留的可靠检测方法。

铁皮石斛根茎中菲类化学成分分析

目的:研究铁皮石斛根茎的菲类化学成分。方法:运用各种柱色谱方法进行化学成分的分离纯化,并根据其理化性质、波谱解析、对照品比较以及文献报道对比鉴定化合物结构。结果:从其乙醇提取物中经反复纯化得到6个化合物,分别鉴定为2,3,4,7-四甲氧基菲(Ⅰ)、1,5-二羧基-1,2,3,4-四甲氧基菲(Ⅱ)、2,5-二羟基-3,4-二甲氧基菲(Ⅲ)、2,7-二羧基-3,4,8-三甲氧基菲(Ⅳ)、2,5-二羧基-3,4-二甲氧基菲(Ⅴ)、3,5-二羧基-2,4-二甲氧基菲(Ⅵ)。结论:其中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ为首次从石斛属植物中分离得到。

不同培养条件对铁皮石斛原球茎增殖的影响

[目的]为了找到适合原球茎增殖的培养条件,为工厂化育苗提供技术支撑。[方法]以铁皮石斛茎段诱导出的原球茎为实验材料,研究了不同基本培养基、不同碳源、不同浓度的脱落酸(ABA)和培养方式对其增殖的影响。[结果]在5种培养基中,原球茎增殖倍数均呈上升的趋势,其中改良MS的增殖倍数明显高于其他培养基;在低浓度的条件下,随ABA浓度的增加,原球茎的增殖速度加快,当浓度为0.5 mg/L时,增殖最大;蔗糖为碳源时原球茎增殖的效果比葡萄糖、果糖好;固体培养和液体振荡培养时原球茎增殖倍数最高。[结论]在改良MS中加入30 mg/L蔗糖和0.5 mg/L ABA,进行固体培养或液体振荡培养,铁皮石斛原球茎增殖的效果好。

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究

目的研究铁皮石斛Dendrobiumcandidum原球茎液体悬浮培养的可行性以及接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。方法利用完全随机实验设计和正交试验设计研究不同基本培养基、接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。结果无论鲜重还是干重,铁皮石斛原球茎在液体培养基上均极显著好于固体培养基(P<0.001)。不同基本培养基对铁皮石斛原球茎生长影响的研究表明,培养天数为30d时,对于鲜重67-V极显著好于B5(P<0.01),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS显著好于MS(P<0.05);对于干重67-V与B5没有显著性差异(P>0.05),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS极显著好于MS(P<0.01)。接种量和培养液体积对原球茎生长影响的研究表明,接种量影响最大,体积其次,互作最小,若不考虑互作,对于鲜重和干重,最佳处理为接种量6.194g/瓶+培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶;对于干重,若考虑互作,接种量为6.194g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为3.102g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为1.693g/瓶时,应选150mL/瓶或50mL/瓶。结论液体悬浮培养对铁皮石斛原球茎的生长有利,获得了最佳基本培养基、接种量和培养液体积的最佳搭配方案,表明通过液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎具有较好的开发应用前景。

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响

目的研究固体培养条件下2种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响。方法筛选获得铁皮石斛原球茎的继代培养基及其生长曲线。根据生长曲线,在原球茎生长的不同时期加入真菌诱导子,考察诱导子对原球茎鲜质量和干质量的影响。结果铁皮石斛原球茎继代培养基:1/2MS+20%土豆+3%蔗糖+0.8%琼脂。与对照相比,第11周和第13周加入MF23诱导子使原球茎鲜质量分别提高了16.4%(P<0.01)和23.4%(P<0.01),干质量分别提高了6.7%(P<0.05)和17.9%(P<0.01),继代培养基中加入MF23诱导子使原球茎干质量降低了9.9%(P<0.01)。与对照相比,第11周和第13周加入MF24诱导子使原球茎鲜质量分别提高了17.7%(P<0.01)和12.0%(P<0.05),第11周加入MF24诱导子使原球茎干质量提高了9.2%(P<0.05),继代培养基中加入MF24诱导子使原球茎干质量降低了13.9%(P<0.01)。结论在原球茎培养的早期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有一定抑制作用;在原球茎培养的后期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有促进作用。

铁皮石斛RNA提取及RT-PCR检测

目的 有效地提取铁皮石斛高质量的RNA,为研究环境胁迫对铁皮石斛生长与代谢影响的分子表达机制奠定基础.方法 建立声波处理的刺激组与对照组,改良苯酚-氯仿法制备的RNA,分光光度法检测其量,1.0%变性琼脂糖凝胶电泳检测其完整性;所得的总RNA经过RT PCR扩增,6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测显示其差异cDNA片段.结果 提取的总RNA A260/A230为3.16,A260/A280为1.96,产量达0.27μg/mg,电泳条带清晰,完整性良好,可筛选出明显的差异cDNA片段,分子质量在240～600 bp.结论 用该方法能高质高量地提取富含多糖的药用植物总RNA.

添加剂对铁皮石斛组织培养和快速繁殖的影响

1/2MS培养基添加活性炭、植物激素及香蕉汁、苹果汁、土豆汁等对铁皮石斛DendrobiumcanducumWall exLindl 快速繁殖的影响研究 ,结果表明 :适量的活性炭和 1 0mg/LNAA比较适合铁皮石斛原球茎的增殖 ;1/2MS及添加 0 5mg/LNAA和 0 5 %活性炭比较适于原球茎的分化 ;添加 0 5 %活性炭和香蕉汁、苹果汁能促进试管苗根的生成和生长。

铁皮石斛茎、叶挥发性成分研究

利用水蒸汽蒸馏提取铁皮石斛挥发性成分，用GC／MS进行分离测定，铁皮石斛茎中分离出24个成分，鉴定出14个化学成分，占挥发油总量的91．76％；铁皮石斛叶中分离出20个成分，鉴定出18个化学成分，占挥发油总量的97．40％。铁皮石斛茎、叶挥发性成分中，含有11种相同成分。铁皮石斛的不同部位其挥发油化合物组成和含量不尽相同，为铁皮石斛的综合利用提供参考数据。

铁皮石斛人工种子包衣技术研究

以铁皮石斛未萌发原球茎、萌发原球茎为繁殖体,利用蔗糖、淀粉、ABA、NAA、活性炭、多菌灵、海藻酸钠设计了36种人工胚乳并研究它们对铁皮石斛人工种子萌发及生长状态的影响,筛选出适宜的繁殖体和胚乳配方,在此基础上进行包衣制作。结果表明:以萌发原球茎为繁殖体的人工种子萌发率和成活率较高。适宜的人工胚乳组合为蔗糖3.0%、ABA 1.0mg/L、活性炭浓度0.5%、多菌灵3.0%、海藻酸钠3.0%。在铁皮石斛人工种子外层制作包衣,自然条件下可获得较高的萌发率和成活率。

稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响

目的研究稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响。方法通过正交试验,以石斛小苗为外植体,培养在附加了3种不同稀土元素组合的1/2MS+20%的香蕉提取物的培养基上进行培养。结果3种稀土元素中的镧(La)对试管苗增质量、叶绿素b、总叶绿素和石斛多糖的量都有显著的影响;3种稀土元素都对试管苗的叶片数、根数、分蘖数以及叶绿素a的量影响不显著。结论为铁皮石斛试管苗的壮苗以及品质的提高提供了科学的依据。

束花石斛抗凝血作用的初步研究

目的初步研究束花石斛DendrobiumchrysanthumWallexLindl的抗凝血作用。方法在研究比较束花石斛、金钗石斛DendrobiumnobileLindl、球花石斛DendrobiumthyrsiflorumRchbf和鼓槌石斛DendrobiumchrysotoxumLindl的乙醇提取物对小鼠全血凝血时间的影响基础上,观察束花石斛乙酸乙酯部位、生物碱部位和正丁醇部位对小鼠全血凝血时间和小鼠出血时间的影响,进一步对束花石斛乙酸乙酯部位用小鼠凝血因子和大鼠颈总动脉颈外静脉血流旁路实验性血栓法进行测定研究。结果在全血凝血时间实验中束花石斛乙醇提取物与其他三种石斛乙醇提取物相比对凝血时间的延长作用最为显著;而束花石斛乙酸乙酯部位与其他两个部位相比,对全血凝血时间和出血时间的延长作用最为显著,并能抑制大鼠颈总动脉颈外静脉血流旁路实验性血栓的形成,但对凝血因子没有显著作用。结论束花石斛乙酸乙酯部位可能主要通过抑制血小板聚集来发挥抗凝血作用的。

霍山县3种石斛叶片光合特性及其对光强的响应

目的研究石斛的光合特性,了解其适宜栽种的光强。方法测定霍山县3种石斛(霍山石斛Dendrobiumhuoshanens,铁皮石斛D.candium,铜皮石斛D.moniliforme)的光合速率对光强响应曲线,不同光强处理时叶绿素荧光参数的变化及3.0×104lx瞬时光强下叶片荧光猝灭诱导。结果霍山县3种石斛属于阴生植物对光强的响应,光饱和点、光补偿点较低,净光合速率和表观量子效率都较低;大于4.0×104lx强光下石斛叶片受光抑制严重。结论霍山县3种石斛生长光强,一般为(0.2～2.0)×104lx;可以在(2.5～3.0)×104lx光强的环境中生长;不适宜在大于4.0×104lx光强的环境中生长。

三种内生真菌对铁皮石斛、金线莲生长影响的研究

目的 研究开唇兰小菇、石斛小菇、兰小菇等 3种小菇属内生真菌对兰科濒危药用植物铁皮石斛、金线莲生长的促进作用。方法 采用植物无菌原球茎及试管苗与真菌进行双重培养 ,观测原球茎增殖及苗的生长情况。结果 接种 3种内生真菌后 ,铁皮石斛苗的生长量高于对照 3～ 5倍 ,石斛小菇、兰小菇对铁皮石斛原球茎增殖也有明显促进作用 (P<0 .0 5 ) ;接种 3种真菌的金线莲苗 ,侧芽及侧根数均显著高于对照。结论 3种小菇属内生真菌能够促进铁皮石斛幼苗生长 ,促进金线莲侧芽及侧根的萌发 ,对铁皮石斛。

声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响

目的:测定特定的声波刺激对铁皮石斛组培苗多糖含量的影响程度。方法:以苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量。结果:连续刺激24天后多糖含量明显高于对照组。结论:特定的声波刺激可以明显地促进铁皮石斛多糖的合成,对石斛多糖代谢途径有显著的影响。

密花石斛的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的 采用 HPL C/ U V/ MS法对密花石斛进行指纹图谱研究。方法 采用 Agilent Zorbax SB- C1 8柱 ;甲醇和水为流动相进行梯度洗脱 ;流速为 1.0 m L/ min。结果 得到分离度较好的密花石斛 HPL C/ U V指纹图谱 ,标示了 9个共有峰 ,并用 HPL C/ MS对其部分色谱峰进行了初步定性。结论 该方法可用于密花石斛指纹图谱的测定 ,并为其全面质量控制提供参考。

铁皮石斛茎段诱导丛生芽的研究

以铁皮石斛 Dendrobium candidum Wall.ex L indl.的茎段作外植体 ,比较不同的培养基、激素等因素对茎段分化丛生芽的影响 ,以及不同浓度的香蕉汁和活性炭对试管苗生根的影响。结果表明 :1/ 2 MS较好 ,BA作用优于 KT、ZT,最适浓度为 2 .0 mg/ L ;丛生芽培养于 1/ 2 MS+10 %香蕉汁 +0 .5 %AC的培养基上 ,生根效果最好。

多效唑对铁皮石斛试管苗培养的影响

[目的]研究多效唑对铁皮石斛试管苗壮苗培养的影响。[方法]利用组织培养技术进行研究。[结果]结果表明,MS培养基中加入多效唑处理后对铁皮石斛试管苗生长有极显著影响,多效唑处理后试管苗矮化、节间变短、叶变小,苗高是对照的32.1%,茎粗是对照的161.0%,与对照相比都达到极显著差异;叶片数与对照无显著差异,叶长与叶宽显著减小;根长减小,根数显著增加,根粗增加不明显。[结论]多效唑可明显促进试管苗生长,有利于试管苗生根,提高移栽成活率。

促进铁皮石斛试管苗移栽成活的研究

目的有效加速铁皮石斛试管苗的人工繁殖。方法 :对铁皮石斛试管苗在移植时期进行不同基质 (有无伴生植被 )、根长和营养液浓度等方面的研究。结果 :最适宜的基质是 1/ 3泥炭 +1/ 3锯末 +1/ 3珍珠岩 ,覆以苔藓类伴生植被可大大提高移栽成活率。组培苗根长在 0 .5～ 1.0cm时是移植的最佳时期 ,移植半个月后施放 1/ 2倍营养液为最好。结论

铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗研究

目的:筛选适宜铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗的培养基,提高继代扩繁系数和组培苗的质量.方法:在相同的培养条件下,把相同发育阶段的原球茎接种于含不同激素比例的培养基中生长;把丛生芽接种于蔗糖浓度不同的培养基中生长;把相同高度的幼苗接种于含不同附加物的培养基中生长;对结果所产生的不同生长状况进行综合分析.结果:原球茎的增殖以1/2MS添加BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L或BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L的激素比例为佳;原球茎分化以1/2MS添加BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L或BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L的激素比例为佳;丛生芽的生长中以30%蔗糖浓度的培养基为佳;生根壮苗中最佳的附加物为香蕉.