铁皮石斛多糖与Toll样受体4互作机制的计算模拟

为研究铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharide,DOP)具有免疫活性片段的结构特征及与Toll样受体4(Toll⁃like receptor 4,TLR4)的相互作用机制,基于对TLR4结合腔的亲疏水性分析,将DOP寡糖的分为疏水片段筛选和亲水片段筛选,通过分子对接和分子动力学模拟,分析作用最强的DOP片段的结构特征及与TLR4的相互作用机制。结果表明,找到作用最强的DOP七糖片段,具有与经典底物脂多糖相似的结合模式,其中疏水性四糖片段结合在疏水结合腔,亲水性三糖片段结合在电正性区域。具有潜在免疫活性的铁皮石斛多糖可以由乙酰基修饰的疏水四糖片段和没有乙酰基修饰的亲水三糖片段组成,主要通过氢键和疏水作用与TLR4进行相互作用,发挥免疫活性。

基于云南小曲清香白酒的特色铁皮石斛配制酒研发与抗氧化能力研究

石斛作为云南省特色名贵中药之一,具有润肺、清热、抗衰老、抗肿瘤等功效。本研究以云南小曲清香白酒(酒精度为30%alc/vol)为基酒,通过勾调和酒体设计,按药酒比为1∶10、2∶10、3∶10、4∶10、5∶10加入云南铁皮石斛原浆药液,形成5个石斛配制酒产品。经专业品酒师感官评定,以云南铁皮石斛原浆药液和30%alc/vol酒精度云南小曲清香白酒按照3∶10形成的石斛配制酒产品具有较突出的感官特性,该产品酒精度为23%alc/vol,酒体清亮透明,石斛药香与曲香协调,香气清雅舒适,口感醇净绵甜。该铁皮石斛配制酒产品主要活性成分经测定分析,石斛碱含量为0.127μg/m L,石斛多糖含量为5.080mg/m L,总多酚含量为7.190μg/mL,总氨基酸含量为26.029μg/mL。同时相较于云南小曲清香白酒基酒,石斛配制酒表现出较强的抗氧化能力。综上,以云南小曲清香白酒和特色铁皮石斛原浆药液勾调设计形成的石斛配制酒产品在一定程度上更适宜现代消费人群对露酒产品感官和营养功能的需求。

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。

铁皮石斛组培品与野生品的形态组织学和多糖含量比较研究

目的:比较铁皮石斛组培品和野生品在植物形态、组织结构及总多糖含量上有无差异。方法:显微切片观察、显微摄影;苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果与结论:铁皮石斛组培品与野生品在植物形态及组织结构上基本相同,总多糖含量无显著差异,表明铁皮石斛经组织培养和人工培植过程后药材性状和质量与野生药材相近,初步证明经过组织培养快速繁殖和人工培植铁皮石斛是解决其资源紧缺问题的有效途径。

铁皮石斛化学成分及药理作用研究进展

铁皮石斛是名贵的中草药之一。其含有多糖、芪类、生物碱、氨基酸和微量元素等多种成分,具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、降血糖和养阴生津等多种生物活性。本文综述了铁皮石斛化成分和药理学研究进展。

不同分子量铁皮石斛多糖体外抗氧化活性研究

采用分步醇沉法对铁皮石斛总多糖(DSP)进行分离,得到乙醇终浓度为40%(DSP3)、70%(DSP2)和90%(DSP1)的多糖。进一步对4种铁皮石斛多糖的抗氧化活性进行测定,结果显示:DSP1对DPPH·的清除作用、总抗氧化能力、抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血和抑制Fe2+-VC诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化作用效果最佳,DSP和DSP3次之,DSP2相对较弱;对·OH的清除率大小依次为DSP>DSP3>DSP1>DSP2;且不同相对分子质量的铁皮石斛多糖均可显著抑制羟基自由基介导的DNA氧化断裂。结果提示:不同相对分子质量铁皮石斛多糖均有抗氧化作用,且抗氧化能力与其相对分子质量大小有关。

2种石斛属植物和小叶石仙桃多糖的组织化学定位

为对不同年龄的铁皮石斛(Dendrobium candidum)、铜皮石斛(D.moniliforme)及石斛伪品-小叶石仙桃(Pholidota chinensis)不同器官中的多糖进行组织化学定位,选择具有较高药用价值的石斛类药用植物和药用部位,确定铁皮石斛的最佳采收期,根据多糖的理化性质,材料经冰冻切片,用改良的高碘酸-席夫试剂(PAS)对多糖进行组织化学定位;结果表明,多糖类物质主要存在茎的薄壁细胞、根的皮层细胞、叶的叶肉细胞中。其总多糖含量有如下顺序:二年生的铁皮石斛茎>铜皮石斛茎≈>小叶石仙桃茎,铁皮石斛根≈铜皮石斛根>小叶石仙桃根,铁皮石斛叶≈小叶石仙桃叶>铜皮石斛叶。另外,在不同的器官中,铜皮石斛的多糖含量呈现“茎≈根>叶”和小叶石仙桃的多糖含量呈现“叶>茎≈>根”的规律,而二年生的铁皮石斛则为“茎>叶>根”。这表明在种间及同种植物的不同器官、不同年龄,其多糖的含量存在差异。而3种兰科植物中,以二年生铁皮石斛茎的多糖含量最高,表明其药用价值也最高。

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1对氧自由基和脂质过氧化的影响

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1的体外抗氧活性研究表明,铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1能明显抑制.OH和O2.-,并呈现良好的量效关系,其IC50分别为1.181和0.727mg/mL;多糖DCPP1a-1可降低体外温育和Fe2+、H2O2诱导的小鼠肝组织匀浆MDA的产生,能抑制小鼠肝线粒体MDA的生成;在1和2mg/mL浓度下能减轻线粒体的肿胀程度,显示出一定的量效关系。表明原球茎多糖DCPP1a-1具有较强的抗氧化活性。也初步显示出离体培养的铁皮石斛可能为石斛多糖的开发提供新的药源。

不同干燥工艺对铁皮石斛多糖及石斛碱的影响

【目的】研究不同干燥工艺对铁皮石斛主要有效成分多糖和石斛碱的影响,为铁皮石斛产后初加工及规模化生产提供理论依据。【方法】以铁皮石斛为原材料,采用自然晾干、热风干燥、真空干燥和真空冷冻干燥4种不同干燥方式对铁皮石斛进行干燥,探讨4种方式对铁皮石斛多糖和石斛碱含量等的影响。【结果】真空冷冻干燥产品L值最大,颜色较为鲜亮,色泽保持得较好,明显优于自然晾干、热风干燥、真空干燥产品。铁皮石斛干燥后多糖含量大小排列为:热风干燥>真空干燥>真空冷冻干燥>自然晾干。在热风干燥条件下,铁皮石斛多糖含量最高,达31.13%;自然晾干条件下,铁皮石斛多糖含量最低,为20.72%。不同干燥工艺对石斛碱含量几无影响。【结论】热风干燥方式下的铁皮石斛有效成分含量高、能耗低,且所需设备简单,在铁皮石斛加工企业中值得推广应用。

铁皮石斛中石斛多糖与石斛碱的纤维素酶法提取研究

本文利用纤维素酶法联合提取铁皮石斛中的多糖与生物碱,通过单因素实验研究酶用量、酶解时间、酶解温度和酶解pH对石斛多糖与生物碱收率的影响。实验结果表明,在本实验范围内,最佳提取工艺为:纤维素酶用量为原料的0.6%(质量分数),酶解时间为1.5h,酶解温度为50℃,酶解pH值等于5.0。在此工艺下,石斛碱的收率达19%,石斛多糖收率达0.35%。本工艺操作简便,成本较低,值得进一步深入研究。

铁皮石斛多糖对脾虚便秘小鼠免疫、肠道微生物及酶活性的影响

为了探讨铁皮石斛多糖对脾虚便秘小鼠免疫、肠道微生物及酶活性的影响,明确多糖对脾虚便秘的治疗作用,通过灌胃番泻叶水煎液7 d后控制饮食,饥饱失常8 d,建立小鼠脾虚便秘模型。造模成功后,正常组和模型组灌胃等量无菌水,治疗组灌胃铁皮石斛多糖溶液,分析小鼠体重、脾脏系数、胸腺系数、肠道菌群和酶活性的变化情况。结果表明,模型组的小鼠体重、体重变化率、脾脏指数、胸腺指数、五类可培养微生物(细菌总数、大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌和真菌)数量与正常组比较差异显著(P<0.01或P<0.05)。治疗完成后,小鼠体重和体重变化率显著增高,高于正常组(P<0.05);小鼠脾脏指数和胸腺指数均有不同程度恢复,接近正常组(P>0.05);大肠杆菌大量得到恢复,但远没有达到正常组水平(P<0.01);乳酸菌和双歧杆菌明显地减少,但总数显著超过正常组(P<0.01);木聚糖酶和蛋白酶接近正常组,淀粉酶显著增加,纤维素酶显著减少(P<0.01)。说明铁皮石斛多糖对增强机体免疫力、调控肠道微生态平衡和肠道酶活性方面有一定的促进作用,能优化肠道环境,改善脾虚便秘症状。

铁皮石斛原球茎多糖粗品与纯品的体外抗氧活性研究

目的:研究铁皮石斛原球茎多糖粗品(DCPP)和纯品(DCPP3 c-1)的体外抗氧活性。方法:利用邻二氮菲-Fe2+氧化法、AP-TEMED法、硫代巴比妥酸法(TBA)及分光光度法分析原球茎多糖清除自由基及抗脂质过氧化作用。结果:铁皮石斛原球茎多糖DCPP和DCPP3 c-1能显著地清除.OH和O2-,对.OH清除作用具有较好的量效关系,抑制率达50%的浓度(IC50)分别为0.982 mg/mL和0.930 mg/mL;DCPP清除O2-的IC50为0.619 mg/mL;而DCPP3 c-1在浓度为0.615mg/mL时,有较强的清除效果,而后随着浓度的增大,清除率呈下降趋势。DCPP和DCPP3 c-1能抑制小鼠肝组织自发性氧化和Fe2+、H2O2诱导的脂质过氧化,其中DCPP的抑制作用最强;2种多糖可抑制小鼠肝线粒体脂质过氧化物MDA的产生以及减轻肝线粒体肿胀度。结论:铁皮石斛原球茎多糖粗品和纯品具有抗氧化活性。

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1的理化性质及抗肿瘤活性

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)色谱分离纯化,得灰色粉末状多糖DCPP1 a-1。采用薄层层析、高效液相色谱、紫外光谱、红外光谱和高碘酸钠氧化等方法进行组成结构分析;并研究了DCPP1 a-1的体内抗肿瘤作用。结果表明,DCPP1 a-1为均一组分,具有α-吡喃糖苷键,分子中1→6键、1→2/1→4键、1→3键所占的比例分别为4.0%,52.1%和44.9%,平均分子量为189kD,由甘露糖和葡萄糖按7.015∶1的摩尔比组成,是首次从原球茎中分离出的新型多糖。多糖DCPP1 a-1的三个剂量组50、150、250 mg/kg对H22肝癌小鼠有不同程度的抑瘤作用,抑瘤率分别为28.6%、19.3%和15.7%。其中以低剂量组的抑瘤效果最好(P<0.05),并显著提高了胸腺和脾指数(P<0.05)。

铁皮石斛不同来源材料多糖和氨基酸含量的比较

通过对铁皮石斛不同来源材料的主要药用成分多糖和氨基酸含量进行比较,结果表明:铁皮石斛不同来源材料的多糖含量不同;原球茎与野生品的多糖和总氨基酸含量相近,两者都含有7种人体必需的氨基酸,但野生品的必需氨基酸含量高于原球茎的,两者的含量分别占总量的37.9%、26.2%。初步证明以组织培养获得的铁皮石斛原球茎代替其野生品是解决铁皮石斛资源紧缺的有效途径。

铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究

对铁皮石斛悬浮培养原球茎多糖的提取、纯化条件进行优化研究,正交试验结果表明,提取的最佳工艺为80℃热水中浸提2 h,加水量20倍,提取3次,醇析时乙醇的浓度为80%。粗多糖脱蛋白时,氯仿/正丁醇(v/v)为1∶0.4,样品/氯仿+正丁醇(v/v)为1∶0.35,萃取时间采用5 min最佳。

铁皮石斛原球茎多糖DCPP3c-1的分离纯化及结构初步分析

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)依次层析,分离纯化得灰色多糖DCPP3 c-1。其纯度经比旋光度法、柱层析、紫外扫描检测,组分和结构经薄层层析、高效液相色谱、红外光谱及高碘酸钠氧化等试验分析。结果显示DCPP3 c-1为均一组分,相对分子质量为72.4 ku,由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其分子物质的量之比为1.120 4∶1∶1.046∶23.354∶3.828∶1.046,分子中1→6残基占14%,1→2或1→4残基占40.7%,1→3键占45.3%。红外光谱显示其具有多糖特征吸收峰,并存在α-吡喃糖苷键。DCPP3 c-1是首次从液体悬浮培养的原球茎中分离得到的新型酸性杂多糖组分。

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养研究进展

铁皮石斛是我国传统的名贵中药,具有很高的药用价值。为了解决铁皮石斛组织培养中存在的组培苗生产成本高、移栽苗成活率低等问题,铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究日益增多。从影响原球茎增殖和石斛多糖积累的因素及石斛多糖药理研究等方面阐述了关于铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究概况。

不同生长龄铁皮石斛茎与叶中总多糖、总生物碱及总黄酮含量的差异

采用苯酚硫酸法、酸性染料比色法以及硝酸铝比色法分别测定并比较不同生长龄铁皮石斛茎与叶中总多糖、总生物碱及总黄酮的含量差异,为铁皮石斛资源的充分合理利用提供科学依据。结果表明,不同生长龄铁皮石斛茎与叶中总多糖、总生物碱、总黄酮的含量均有显著差异,其中总多糖主要集中于茎,总生物碱和总黄酮主要集中于叶;总多糖含量以2年龄茎最高,为35.32%,总生物碱含量以1年龄叶最高,为0.036%,总黄酮含量以半年生叶最佳,为0.104%;总多糖含量随着生长龄的增加而逐渐减少;3年龄以内的总生物碱和总黄酮含量明显较高,且不同龄之间含量差异较小,而当植株生长至4、5年龄时,其总生物碱及总黄酮的含量明显较低。铁皮石斛茎与叶中各含有较高的不同有效成分,茎和叶均可作为药用资源加以充分利用;为获取最佳效益,综合考虑生长周期、生物量及药用成分含量等因素,人工栽培的铁皮石斛以3年龄内采收为宜,不宜栽种4年以上。

石斛多糖的抗菌作用研究

目的研究石斛多糖的抗菌作用,为进一步推广石斛的临床应用提供实验数据支持。方法采用滤纸片抑菌圈法比较铁皮石斛多糖与金钗石斛多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎球菌的抗菌作用。结果铁皮石斛多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎球菌抑菌圈的直径分别为(2.72±1.29)mm、(12.42±2.12)mm、(4.53±2.12)mm,金钗石斛多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎球菌抑菌圈的直径分别为(11.40±1.73)mm、(10.25±1.90)mm、(7.18±2.39)mm,组间比较差异具有统计学意义(t=15.578、3.526、6.849,P<0.05)。结论两种石斛多糖均对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎球菌抑菌均具有明显的抑菌作用,金钗石斛多糖抑菌作用更为明显。

石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究

目的：探讨石斛多糖（ dendrobium candidum polysaccharide,DCP）与 rIL- 2联合应用对脐带血 LAK细胞（ CB-LAK）和肿瘤病人外周血 LAK细胞（ PB-LAK）体外杀伤肿瘤细胞作用的影响。方法：应用 3H-TdR释放法测定 CB-LAK和 PB-LAK细胞的杀伤活性。结果：① rIL-2(500 u/ml)能明显提高 CB-LAK对 Raji细胞的杀伤活性 ,0 h的 CB-LAK活性为 13.63％ ,rIL-2(500 u/ml)诱导 48、 72、 96、 120 h后 ,CB-LAK活性分别提高至 22.28％、 26.23％、 28.55％和 25.76％ (P0.05）；③ DCP（ 200 mg/L）与 rIL-2（ 500 u/ml）联合培养 96 h，显著增强 PB-LAK杀伤活性。 10例恶性肿瘤病人外周血（ DCP＋ rIL-2）组与单纯 rIL-2组诱导的 PB-LAK平均活性分别为 34.78％和 23.24％ 。