铁皮石斛原球茎与原药材免疫调节作用的比较研究

目的:比较研究铁皮石斛组织培养原球茎与原药材对免疫功能的作用及急性毒性反应。方法;用白细胞计数法、免疫器官重量法、碳粒廓清法、淋巴细胞转化试验来研究药物对环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下的对抗作用;以最大耐受量的方法研究药物的急性毒性。结果:铁皮石斛组织培养原球茎有升高环磷酰胺模型小鼠外周血白细胞数,增加模型鼠胸腺或脾脏指数,增强巨噬细胞的吞噬功能,促进模型鼠体内淋巴细胞转化的作用。口服给予药物量54.56 g生药/kg,小鼠仍能耐受。这些作用与原药材相似。结论:铁皮石斛组织培养原球茎与原药材均具有提高免疫功能作用,两者作用强度相似,最大耐受量相当于人临床用药量的227倍。

铁皮石斛原球茎分化适宜培养基研究

试验了基本培养基、蔗糖浓度、天然提取物以及植物激素对铁皮石斛原球茎分化的影响。原球茎分化的适宜培养基为:1/2Ms+20%马铃薯提取液+2mg/LBA+0.2mg/L NAA+2%蔗糖。

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1对氧自由基和脂质过氧化的影响

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1的体外抗氧活性研究表明,铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1能明显抑制.OH和O2.-,并呈现良好的量效关系,其IC50分别为1.181和0.727mg/mL;多糖DCPP1a-1可降低体外温育和Fe2+、H2O2诱导的小鼠肝组织匀浆MDA的产生,能抑制小鼠肝线粒体MDA的生成;在1和2mg/mL浓度下能减轻线粒体的肿胀程度,显示出一定的量效关系。表明原球茎多糖DCPP1a-1具有较强的抗氧化活性。也初步显示出离体培养的铁皮石斛可能为石斛多糖的开发提供新的药源。

铁皮石斛种子、原球茎和类原球茎体的超低温保存研究

对珍稀濒危植物铁皮石斛的种子、原球茎和类原球茎体进行了液氮超低温保存研究。把４个月龄的种子脱水至含水量为１２％～１９％，能获得较高的冻后存活率（９５％）和较快的恢复生长速率。种子在０．５ｍｏｌ／Ｌ脱落酸培养基上萌发３周所形成的原球茎，用玻璃化保护剂ＰＶＳ２处理１５ｍｉｎ，其冻后存活率可达８８％。将生长旺盛的暗培养类原球茎体的含水量在６～７ｄ内干燥至３０％±２％，其冻后存活率可达４８％～８０％。

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1的理化性质及抗肿瘤活性

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)色谱分离纯化,得灰色粉末状多糖DCPP1 a-1。采用薄层层析、高效液相色谱、紫外光谱、红外光谱和高碘酸钠氧化等方法进行组成结构分析;并研究了DCPP1 a-1的体内抗肿瘤作用。结果表明,DCPP1 a-1为均一组分,具有α-吡喃糖苷键,分子中1→6键、1→2/1→4键、1→3键所占的比例分别为4.0%,52.1%和44.9%,平均分子量为189kD,由甘露糖和葡萄糖按7.015∶1的摩尔比组成,是首次从原球茎中分离出的新型多糖。多糖DCPP1 a-1的三个剂量组50、150、250 mg/kg对H22肝癌小鼠有不同程度的抑瘤作用,抑瘤率分别为28.6%、19.3%和15.7%。其中以低剂量组的抑瘤效果最好(P<0.05),并显著提高了胸腺和脾指数(P<0.05)。

铁皮石斛不同来源材料多糖和氨基酸含量的比较

通过对铁皮石斛不同来源材料的主要药用成分多糖和氨基酸含量进行比较,结果表明:铁皮石斛不同来源材料的多糖含量不同;原球茎与野生品的多糖和总氨基酸含量相近,两者都含有7种人体必需的氨基酸,但野生品的必需氨基酸含量高于原球茎的,两者的含量分别占总量的37.9%、26.2%。初步证明以组织培养获得的铁皮石斛原球茎代替其野生品是解决铁皮石斛资源紧缺的有效途径。

铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究

对铁皮石斛悬浮培养原球茎多糖的提取、纯化条件进行优化研究,正交试验结果表明,提取的最佳工艺为80℃热水中浸提2 h,加水量20倍,提取3次,醇析时乙醇的浓度为80%。粗多糖脱蛋白时,氯仿/正丁醇(v/v)为1∶0.4,样品/氯仿+正丁醇(v/v)为1∶0.35,萃取时间采用5 min最佳。

铁皮石斛原球茎多糖粗品与纯品的体外抗氧活性研究

目的:研究铁皮石斛原球茎多糖粗品(DCPP)和纯品(DCPP3 c-1)的体外抗氧活性。方法:利用邻二氮菲-Fe2+氧化法、AP-TEMED法、硫代巴比妥酸法(TBA)及分光光度法分析原球茎多糖清除自由基及抗脂质过氧化作用。结果:铁皮石斛原球茎多糖DCPP和DCPP3 c-1能显著地清除.OH和O2-,对.OH清除作用具有较好的量效关系,抑制率达50%的浓度(IC50)分别为0.982 mg/mL和0.930 mg/mL;DCPP清除O2-的IC50为0.619 mg/mL;而DCPP3 c-1在浓度为0.615mg/mL时,有较强的清除效果,而后随着浓度的增大,清除率呈下降趋势。DCPP和DCPP3 c-1能抑制小鼠肝组织自发性氧化和Fe2+、H2O2诱导的脂质过氧化,其中DCPP的抑制作用最强;2种多糖可抑制小鼠肝线粒体脂质过氧化物MDA的产生以及减轻肝线粒体肿胀度。结论:铁皮石斛原球茎多糖粗品和纯品具有抗氧化活性。

铁皮石斛原球茎多糖DCPP3c-1的分离纯化及结构初步分析

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)依次层析,分离纯化得灰色多糖DCPP3 c-1。其纯度经比旋光度法、柱层析、紫外扫描检测,组分和结构经薄层层析、高效液相色谱、红外光谱及高碘酸钠氧化等试验分析。结果显示DCPP3 c-1为均一组分,相对分子质量为72.4 ku,由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其分子物质的量之比为1.120 4∶1∶1.046∶23.354∶3.828∶1.046,分子中1→6残基占14%,1→2或1→4残基占40.7%,1→3键占45.3%。红外光谱显示其具有多糖特征吸收峰,并存在α-吡喃糖苷键。DCPP3 c-1是首次从液体悬浮培养的原球茎中分离得到的新型酸性杂多糖组分。

真菌诱导子处理的铁皮石斛原球茎HPLC-MS指纹图谱分析

目的比较真菌诱导子处理的铁皮石斛原球茎与对照原球茎、铁皮石斛在化学成分上的差别。方法用高效液相色谱-质谱联用技术,比较诱导子处理的铁皮石斛原球茎、对照原球茎和人工栽培的铁皮石斛的氨性氯仿提取物中各成分的色谱峰面积积分值和相对积分面积。结果诱导子处理的铁皮石斛原球茎和对照原球茎中共有26个相同的化学成分,相对积分面积和分别为98.47%和97.54%,其中有19个成分在诱导子处理原球茎中的色谱峰面积积分值高于对照原球茎,它们中分别有5个和6个特有的成分,其中生物碱类成分分别为3个和1个。诱导子处理的原球茎和铁皮石斛中共有25个相同的化学成分,相对积分面积和分别为95.72%和96.44%,其中有17个成分在人工栽培的铁皮石斛中的色谱峰面积积分值高于诱导子处理的原球茎,有8个成分在诱导子处理的原球茎中的色谱峰面积积分值高于铁皮石斛,这其中有7个是生物碱类的成分。结论真菌诱导子处理后,没有改变原球茎的化学背景,但能提高原球茎中化学成分的含量。人工栽培的铁皮石斛的质量明显优于诱导子处理的原球茎。原球茎中的生物碱类成分对诱导作用较敏感。诱导子处理能促进原球茎中生物碱类成分的产生或特异性积累。

铁皮石斛类原球茎空气干燥法超低温保存中的脱水蛋白分析

用空气干燥法将铁皮石斛类原球茎脱水至不同含水量 ,进行超低温保存和热稳定蛋白的SDS PAGE分析 ,并进行脱水蛋白的Western blot检测。结果表明 :在本试验条件下 ,含水量以g/gDM表示时 ,铁皮石斛类原球茎脱水时间 (x)对含水量 (y)的回归方程式为y =- 0 12 0 8x +9 96 36。含水量下降为 0 1～ 0 5g/gDM时 ,冻后存活率达到最大值。当含水量达 1 0g/gDM时 ,热稳定蛋白的含量明显增加 ,经免疫检测其中分子量分别为 2 8 7和 34 3kD的两个热稳定蛋白为脱水蛋白。认为含水量是铁皮石斛超低温保存成功的关键因素 ,也是引起脱水蛋白大量积累的重要条件。

悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上生长和分化的研究

目的:对悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上的生长和分化状况进行研究,以解决原球茎转接成活率低的问题。方法:选用不同基本培养基、碳源、培养基pH和激素,以生长鲜重和成苗数为指标,考察原球茎的生长和发育。结果与结论:降低固体基本培养基元素的含量有利于原球茎的生长,但不利于原球茎的分化。NAA,IAA,IBA和GA有利于原球茎的生长与分化,而偏酸的培养基pH和灭活的真菌不利于原球茎的生长与分化,灭活真菌容易引起原球茎的形态变异。

铁皮石斛类原球茎增殖和分化的研究

通过单因素浓度试验和正交试验研究了5种金属离子、不同激素组合及不同天然附加物对铁皮石斛类原球茎增殖、分化的影响。试验结果表明,5种金属离子对类原球茎增殖影响的主次顺序为Mg2+(Fe2+(Ca2+(Mn2+(Zn2+,类原球茎增殖的最佳培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+10%马铃薯汁+3%蔗糖(含Mg2+1.0 mmol/L、Ca2+2.0 mmol/L、Fe2+0.1mmol/L、Mn2+0.1mmol/L和Zn2+0.03 mmol/L)。培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+20%马铃薯汁+蔗糖20g/L+琼脂0.8g/L最适于铁皮石斛类原球茎的分化。

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养研究进展

铁皮石斛是我国传统的名贵中药,具有很高的药用价值。为了解决铁皮石斛组织培养中存在的组培苗生产成本高、移栽苗成活率低等问题,铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究日益增多。从影响原球茎增殖和石斛多糖积累的因素及石斛多糖药理研究等方面阐述了关于铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究概况。

铁皮石斛种质资源的玻璃化法超低温保存

对铁皮石斛的原生质体、原球茎进行了玻璃化法超低温保存研究 ,存活率分别达 4 8%和 88% .实验结果表明 :材料、预处理、化冻方法。

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎的影响

目的研究固体培养条件下一种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长及总生物碱含量的影响。方法在铁皮石斛原球茎固体培养的后期加入内生真菌诱导子,并以加入等量葡萄糖溶液、麦麸培养基、蒸馏水为对照,考察真菌诱导子对原球茎鲜重、干重及总生物碱含量的影响。结果与加蒸馏水的对照相比,真菌诱导子、对照的麦麸培养基和葡萄糖溶液均可以极显著性地提高铁皮石斛原球茎的干重(P<0.01),分别提高了35.7%,34.3%和22.7%;并显著性地提高原球茎的折干率达20.7%,20.7%和16.3%(P<0.05)。与加真菌诱导子的原球茎相比,附加等量麦麸培养基和葡萄糖溶液培养的原球茎总生物碱含量分别降低了23%和17%。结论在铁皮石斛原球茎固体培养的后期加入真菌诱导子能促进原球茎的生长,并对总生物碱含量有一定的影响。

蔗糖对铁皮石斛原球茎生长与多糖积累的影响

在确定合适碳源的基础上,研究比较不同蔗糖浓度下铁皮石斛原球茎生长和多糖的积累情况.结果表明,在葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖4种碳源中,蔗糖和葡萄糖对原球茎生长和多糖积累的影响优于乳糖和果糖.在蔗糖浓度为30～60g/L时,浓度越高,原球茎生长受到抑制越大,而且生长周期延长,但多糖含量增加越快,多糖含量越高;当蔗糖浓度超过60g/L时,蔗糖表现出明显的抑制效应;适合多糖积累的蔗糖起始浓度为30 g/L时,有利于原球茎的生长,最大干重量为17.93g/L,多糖最高含量为208.7mg/g,培养40 d时,其产量为3 679.6 mg/L.

光强对悬浮培养下铁皮石斛原球茎生长的影响

以长势均一、色泽深绿的铁皮石斛原球茎为试验材料,分别在1 000lx、2 000lx和3 000lx的光强下进行12h/d的光照培养,每隔7d测定其鲜质量、多糖含量、叶绿素含量及叶绿素a/b,研究光强对悬浮培养下铁皮石斛原球茎生长的影响。结果表明,2 000lx光强完全满足液体条件下铁皮石斛原球茎生长的要求,鲜质量和多糖(23.4%)的积累最高,同时叶绿素含量也最大,光强较低时,其叶绿素a/b值也较低,这与自然生境下铁皮石斛的相关参数一致。表明提供一定光强和光周期,采取悬浮方式规模化培养铁皮石斛原球茎是可行的。

铁皮石斛种胚萌发和原球茎质量控制

本文讨论了植物生长素对铁皮石斛种胚萌发和 ABA对原球茎质量的影响 .实验结果表明 NAA在 0 .0 5～ 2 .0× 10 -6范围内都能促进种胚萌发 ,而 2 ,4 - D促进种胚萌发的浓度范围很窄 ,仅在浓度为0 .5× 10 -6时能促进种胚萌发 ;0 .5× 10

热水浸提法提取铁皮石斛原球茎多糖的工艺

利用正交试验对铁皮石斛原球茎多糖提取的工艺条件进行优化,考察料水质量比、浸提温度、浸提时间和浸提次数4个因素对铁皮石斛原球茎多糖得率的影响。结果表明,铁皮石斛原球茎多糖的最佳提取工艺为浸提次数4次,浸提时间3 h,料水质量比1∶60,浸提温度80℃,多糖得率为9.17%。在4个提取因素中,对铁皮石斛原球茎多糖提取影响最大的因素是浸提次数,其次是浸提时间,料水质量比和浸提温度影响都比较小,其中浸提次数不同水平间呈极显著差异,浸提时间、料水质量比和浸提温度对铁皮石斛原球茎多糖提取率影响不显著。