铁皮石斛对D-半乳糖致衰老模型小鼠保护作用的研究

目的:研究铁皮石斛的抗衰老作用并探讨其作用机制。方法:小鼠40只随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和铁皮石斛组,每组10只。皮下注射D-半乳糖15 d后,维生素E组和铁皮石斛组分别灌胃Vit E、铁皮石斛;正常对照组、模型对照组灌胃等体积的生理盐水,8周后进行水迷宫试验、脏器指数测定、血清与肝组织T-SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA浓度的测定。结果:通过水迷宫实验发现,铁皮石斛组小鼠学习和记忆能力、空间搜索能力、空间辨别能力均较模型对照组明显增加(P<0.05);肝脏指数呈显著下降趋势(P<0.05),免疫器官胸腺与脾脏指数显著提高(P<0.05或P<0.01);血清和肝组织T-SOD、GSH-Px、CAT活力显著提升(P<0.01),MDA浓度显著降低(P<0.01或者P<0.05)。结论:铁皮石斛可通过增强机体免疫功能、提高抗氧化能力等发挥其延缓衰老的作用。

HPLC法测定铁皮石斛饮料中D-甘露糖的含量

目的:建立铁皮石斛饮料中D-甘露糖(D-Man)含量的测定方法。方法:样品分别经乙醇沉淀、盐酸水解和衍生化处理。色谱柱使用Agilent EclipseXDB-C18(4.6mm×250mm,5μm);20mmol/L乙酸铵-乙腈溶液(80.5:19.5)为流动相;流速1.0mL/min;检测波长250nm。结果:样品中西洋参多糖对甘露糖含量测定无干扰;样品中D-甘露糖在7.815～312.6μg/mL范围内,线性关系均良好,相关系数r=0.9997;样品回收率为99.66%,RSD为1.76%(n=6)。结论:本方法专属性强、灵敏、精确、重现性好,可用于本品多糖组成中D-Man含量的测定。

不同产地铁皮石斛的品质比较研究

为了筛选铁皮石斛优良种质,在广西、安徽、云南、浙江收集不同产地的铁皮石斛,参照2010年版《中国药典》提供的方法,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,柱前衍生化HPLC法测定甘露糖含量,并使用高效液相法测定毛兰素的含量。结果表明:在0.018～0.090mg范围内,葡萄糖与吸光值线性关系良好,相关系数r=0.9987,不同产地铁皮石斛多糖含量为25.15%～36.53%;柱前衍生化HPLC法测定D-甘露糖含量专属性强、精确、重现性好,不同产地铁皮石斛甘露糖含量为18.00%～32.35%;不同产地铁皮石斛毛兰素的含量为0～0.0043%。不同产地的铁皮石斛多糖、甘露糖和毛兰素含量差异显著,其中采自云南、浙江的种质在多糖和甘露糖方面有优良的遗传基础,而广西种质的毛兰素含量相对较高。

铁皮石斛胚状体对大鼠抗疲劳能力的影响

目的研究铁皮石斛胚状体对大鼠抗疲劳能力的影响。方法大鼠随机分为低、中、高剂量组(铁皮石斛胚状体0.2、0.4、0.8 g/kg),空白对照组、跑步对照组及铁皮枫斗组(铁皮枫斗1.2 g/kg),进行大鼠跑台实验。观察大鼠运动前、运动后0 min及运动后30 min血糖含量、全血乳酸含量变化并检测运动后肝糖元、肌糖元及血尿素氮的含量。结果与跑步对照组相比,铁皮石斛胚状体各剂量组可以在跑步30 min后提高血糖含量并降低全血乳酸含量,中、高剂量组可以降低运动后肝糖元及肌糖元的消耗,各剂量组均能明显降低血尿素氮的含量。结论铁皮石斛胚状体具有提高大鼠抗疲劳能力的作用。

铁皮石斛EST-SSR引物的评价、甄选与应用研究

开发、评价已筛选的铁皮石斛EST-SSR引物,并探讨其在遗传多样性、物种鉴定、遗传图谱构建、亲缘关系鉴定等方面应用。利用前期筛选的20对多态性较好的引物用于16份材料(15份铁皮石斛与1份串珠石斛)的聚丙烯酰氨凝胶电泳,统计扩增条带。采用Pop Gen32软件进行Nei’s基因多样度和Simpson指数等多态性指标的统计,分析单个引物和组合引物的区分率,之后采用NTSYSpc2.1软件计算遗传相似系数聚类图的构建。结果表明,引物DN4等16对引物多态性较高,而DN13、DN23、DN60和DN67多态性较低。单个引物均不能将所有供试样品区分开来,其中DN4、DN10、DN105、DN81、DN39和DN71区分率相对较高;利用组合引物能够将所有样品进行有效区分,其中DN4+DN10+DN105+DN39引物组合可作为核心引物予以使用,可用于铁皮石斛指纹图谱的构建和遗传多样性分析。聚类分析结果表明,该20对引物可以较好地应用于铁皮石斛种内、种间亲缘关系的鉴定。此外,引物DN4、DN13、DN39、DN58、DN65、DN67、DN10和DN99可用于铁皮石斛与串珠石斛的鉴定。本研究开发的20对引物可较好地应用于铁皮石斛遗传多样性分析、种质鉴定、亲缘关系鉴定和遗传图谱构建等方面,具有广泛的应用性。

铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分分离、鉴定及抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

目的分离、鉴定铁皮石斛叶中的黄酮碳苷类成分,并评价其体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性。方法采用大孔吸附树脂和制备型高效液相色谱法对铁皮石斛叶中的黄酮碳苷类成分进行分离和纯化,通过紫外光谱、核磁共振、高分辨电喷雾离子化质谱等波谱方法对化合物进行推导和鉴定。考察黄酮碳苷类成分与阳性对照(阿卡波糖)的α-葡萄糖苷酶体外抑制活性。结果从铁皮石斛叶中分离得到5个芹菜素-6,8-C-二糖苷,鉴定为芹菜素-6-C-α-L-鼠李糖-8-C-β-D-异鼠李糖(1)、夏佛塔苷(2)、异夏佛塔苷(3)、异佛莱心苷(4)和佛莱心苷(5)。化合物1~5和阿卡波糖抑制α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度分别为(1.79±1.27)、(2.05±0.72)、(1.93±0.67)、(1.09±0.46)、(1.36±0.58)、(18.69±1.24)μmol/L。结论从铁皮石斛叶中分离得到5个具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的芹菜素-6,8-C-二糖苷类成分,其中化合物1为新化合物,化合物2首次从该植物中分离得到。

霍山石斛与铁皮石斛对比研究进展

本文主要通过整理分析霍山石斛和铁皮石斛的相关文献,基于鉴别、含量测定、指纹图谱、药理作用、综合开发利用等研究进展,概括霍山石斛和铁皮石斛研究的异同,为霍山石斛进一步开发研究提供参考。

铁皮石斛总黄酮对D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影响

目的:观察铁皮石斛总黄酮对D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影响。方法:将昆明小鼠随机分为空白组,模型组,抗坏血酸(100 mg·kg^-1)组,铁皮石斛总黄酮高、低剂量(400 mg·kg^-1、200 mg·kg^-1)组。空白组除外,其余各组颈背部皮下注射5%的D-半乳糖连续6周,建立小鼠亚急性衰老模型。采用ELISA法检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)活性及丙二醛(monochrome display adapter,MDA)含量;检测小鼠皮肤组织中SOD、过氧化氢酶(catalase,CAT)、ATP酶活性及羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、脂褐素(lipofuscin,LF)、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白含量;取小鼠的胸腺、脾脏、肝脏、肾脏称质量并计算脏器指数。结果:与模型组比较,铁皮石斛总黄酮各剂量组可不同程度升高模型动物血清及皮肤组织中SOD、T-AOC、ATP活性,降低CAT活性,降低血清中MDA含量;升高皮肤组织中HYP、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白含量,降低LF含量;升高模型小鼠胸腺、脾脏、肾脏指数,降低肝脏指数(P<0.05;P<0.01)。结论:铁皮石斛总黄酮对小鼠皮肤衰老模型具有一定保护作用。

铁皮石斛产业化关键科学与技术的突破

针对铁皮石斛繁殖难、种植难、产品单一等产业发展重大问题,通过铁皮石斛基因组学研究,明确铁皮石斛为二倍体、有38条染色体、28 910个蛋白编码基因及在转录组水平上的器官基因表达特异性,具有大量种子而种子没有胚乳、广泛生态适应性、多糖合成的基因调控机制,为铁皮石斛遗传工程育种和活性药用成分的开发利用提供了理论基础;攻克了结实难、发芽难等繁育难题,建立了组培快繁体系,实现种苗工厂化生产,奠定了铁皮石斛人工种植基础;建立了铁皮石斛育种体系,明确了重要经济性状的遗传变异规律,育成铁皮石斛系列专用品种(品系),解决了实生后代分离严重问题,支撑铁皮石斛产业升级;揭示了目标化合物动态变化规律、养分吸收机制,突破了栽培基质、光调控、精准采收等关键技术,建立了设施栽培、活树附生、岩壁附生、立体栽培、盆栽等系列栽培模式,实现种出铁皮石斛、种出好的铁皮石斛。

石斛与铁皮石斛关系的本草考证

该文通过历代"本草"有关"石斛"基原、产地与质量和性状描述的考证,根据"石斛生六安、温台为上""味甘,平……""股短""细实"或"中实"等稳定的产地分布与性状描述,认为历代"本草"所指的优质"石斛"主要指石斛属的"铁皮石斛Dendrobium catenatum(D.officinale)"与"霍山石斛D.houshanense"。针对铁皮石斛曾使用的D.candidum,D.officinale,D.catenatum 3个拉丁学名,通过名实考证,其学名应为D.catenatum,D.officinale为其后出同名,考虑到D.officinale已被广泛使用并约定成俗,建议将其作为保留名,并以"铁皮石斛"作为中文的通用名称。

基于PLS分析石斛品质与生态因子的相关性

基于中药材产地适宜性分析地理信息系统(TCM-GIS)平台,获得了采样区域11个生态因子值.应用偏最小二乘回归法(PLS)分析了石斛中的化学成分及其与生态因子的相关性.结果表明:同种石斛不同产地的化学成分含量差异显著.土壤类型与铁皮石斛中多糖含量呈极显著正相关;年降水量与金钗石斛中石斛碱积累呈极显著正相关;温度是影响鼓槌石斛中毛兰素含量的主要因素.主成分分析表明,浙江是铁皮石斛的最佳产地,贵州是金钗石斛的最佳产地,而云南是鼓槌石斛的最佳产地.

铁皮石斛化学成分研究

目的研究铁皮石斛Dendrobium officinale的化学成分。方法使用硅胶色谱法、反相硅胶色谱法及半制备HPLC等技术进行分离纯化,采用现代波谱技术鉴定化合物结构。结果从铁皮石斛70%乙醇提取物中分离得到14个化合物,分别鉴定为苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、异鼠李素-3-O-α-L-鼠李糖基（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、conicaoside（3）、3,4,5-三甲氧基苯-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、2,6-二甲氧基-4-羟基苯酚-1-O-β-葡萄糖苷（5）、4-（3＇-羟丙基）-2,6-二甲氧基苯酚-3＇-O-β-D-葡萄糖苷（6）、胸腺嘧啶脱氧核苷（7）、紫丁香苷（8）、4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基葡萄糖苷（9）、（＋）-丁香脂素（10）、丁香脂素-4＇-O-β-D-单葡糖苷（11）、柚皮素（12）、对羟基苯甲酸（13）、4,4＇-二羟基-3,5-二甲氧基联苄（14）。结论化合物1~6为首次从石斛属植物中发现,7~8为首次从本植物中发现。

铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0.02mol·L^-1乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil100-5C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);检测波长250nm;流速1.0mL·min^-1;柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0.4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290nm;流速0.8mL·min^-1;柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0.15~3.0,0.075~2.25μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率分别为99.01%(RSD2.1%),101.69%(RSD2.0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12.75%~36.40%,2.93%~18.39%,19.23%~54.58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14.33%~29.47%,6.64%~15.20%,25.73%~44.37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0.0208~0.8320μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为101.96%(RSD1.8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0.0532~0.1224mg·g^-1(均值为0.0810mg·g^-1),0.0403~0.0900mg·g^-1(均值为0.0683mg·g^-1),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0.02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。

铁皮石斛化学成分的研究

目的研究铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimuraet Migo）的化学成分。方法采用反相硅胶色谱柱色谱、聚酰胺色谱柱色谱、凝胶色谱柱色谱等方法分离化合物，运用现代光谱技术鉴定化合物结构。结果从铁皮石斛中分离得到7个化合物，分别鉴定为：apigenin-6，8-di—C-pD—glucopyranoside（I），apigenin-6—0d-三-arabinopyranosyl-8-C-β-D—xylopyranoside（Ⅱ），apige-nin-6-C-（2＂-O-β-D—glucopyranosyl）-α—L—arabinopyranoside（Ⅲ），apigenin-8-C-（2＂-O-β-D—glucopyranosyl）-OL—L—arabinopyranoside（Ⅳ），quercetin-3-O-β-D—rutinoside（V），D—SUCrOSe（Ⅵ），3-sitosterol-3—O-β-D—glucopyranoside（Ⅶ）。结论化合物I—V均为首次从该植物中分离得到。

铁皮石斛原球茎的化学成分研究

目的研究铁皮石斛原球茎的化学成分。方法应用色谱技术分离铁皮石斛原球茎中的化学成分,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。结果从乙醇提取物的丙酮、三氯甲烷和95%乙醇三部分分离得到8个化合物,分别鉴定为:1-O-p-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ),arillatose B(Ⅱ),4-(β-D-吡喃葡萄糖基)苄醇(Ⅲ),4-羟甲基-2,6-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ),三十六烷酸(Ⅴ),二十七烷醇(Ⅵ),β-谷甾醇(Ⅶ),3β,25-二羟基-23-烯-环菠萝蜜烷(Ⅷ)。结论以上化合物均为首次从铁皮石斛原球茎中分得。其中,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ为首次从石斛属中分得。