鼓槌石斛花挥发性成分及其释放规律分析

【目的】检测鼓槌石斛花不同时间点的挥发性成分,分析其成分的差异及释放规律,为鼓槌石斛花的利用提供研究基础。【方法】采用静态顶空-气相色谱-质谱(HS-GC-MS)联用技术,检测并分析一天内6个时间点(6 00、9 00、12 00、15 00、18 00、21:00)鼓槌石斛花的挥发性成分。【结果】不同时间点挥发性成分释放量占一天量排序为:9 00(37.15%)>12 00(29.51%)>6 00(17.48%)>15 00(10.10%)>18 00(3.30%)>21 00(2.47%)。从鼓槌石斛花中共检测出44种匹配度90以上的挥发性成分,其中6个时间点先后有24、27、27、20、22、21种,分别占各时间点的97.58%、98.34%、97.60%、98.59%、95.42%、92.25%。6个时间点共有的成分有10种:己醛、γ-萜品烯、乙酸辛酯、萜品油烯、桧烯、D-柠檬烯、(-)-α-蒎烯、(E)-β-罗勒烯、(-)-β-蒎烯、双环[3.1.0]己-2-烯,4-亚甲基-1-(1-甲基乙基),这10种成分分别占6个时间点的40.36%、88.81%、64.54%、74.15%、68.79%、61.37%。【结论】鼓槌石斛花一天内在9:00挥发性成分释放量最大,主要挥发性成分是烯烃类,具有代表性的成分有3个:(-)-α-蒎烯、(E)-β-罗勒烯和γ-萜品烯。

鼓槌石斛化学成分的研究

目的 研究鼓槌石斛的化学成分 ,为阐明其活性成分 ,开发其资源提供科学依据。方法 采用胶柱层析法进行分离 ,根据光谱数据鉴定结构。结果 从中分得 10个化合物 ,分别为 :erianin( ) ,chrysotobibenzy( ) ,chrysotoxene( ) ,confusarin( ) ,erianthridin( ) ,dendroflorin( ) ,chrysotoxone( ) ,dengibsin( )和β- sitosterol( ) ,daucosterol( )。结论 化合物 为首次从石斛属植物中分得 ,化合物

鼓槌石斛生长发育规律研究

目的 掌握鼓槌石斛在栽培条件下的生长发育规律.方法 定株丛、定时期对鼓槌石斛生根、开花结果、植株生长进行观察.结果 人工条件下,从播种到出瓶炼苗,需要近一年的时间；一定的湿润条件能促进新根的快速萌发生长；鼓槌石斛的盛花期为4月初至4月中旬；茎的长度生长时间仅有60～70 d,此后不再生长,同时,叶片的数量也不再增加,但可保持数年不落.结论 鼓槌石斛生长发育的研究结果为其生产栽培提供科学依据.

鼓槌石斛HPLC/UV/MS指纹图谱的研究

目的:采用 HPLC/UV/MS 法对鼓槌石斛进行指纹图谱研究。方法:采用 Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈和0.05%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL·min^(-1),检测波长265nm;柱温25℃。结果:得到分离度较好的鼓槌石斛 HPLC/UV 指纹图谱,并用 HPLC/MS 对其部分色谱峰进行了初步归属。结论:本方法可用于鼓槌石斛指纹图谱的测定,并为其全面质量控制提供参考。

石斛抗氧化和滋阴作用的试验研究

[目的]研究金钗石斛、鼓槌石斛和铁皮石斛的抗氧化和滋阴药效异同,为其临床用药提供一定的科学依据。[方法]采用DPPH.清除率检测法评价其体外抗氧化活性;并采用氢化可的松建立阴虚大鼠模型,用试剂盒法测定血清中的超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和乳酸脱氢酶(LDH)的活力,并计算大鼠体重、进食量以及死亡率,评价石斛滋阴效果。[结果]体外抗氧化试验表明,3种石斛的抗氧化作用强弱为:铁皮石斛>鼓槌石斛>金钗石斛,铁皮石斛与鼓槌石斛抗氧化活性和Vc接近,金钗石斛次之;浙江产铁皮石斛和云南产鼓槌石斛抗氧化效果相当,均优于其他产地的。滋阴试验结果表明,铁皮石斛和鼓槌石斛滋阴作用等同,金钗石斛次之。[结论]铁皮石斛、金钗石斛和鼓槌石斛抗氧化和滋阴有差异,在临床使用时可有选择的使用。

鼓槌石斛组培快繁技术体系研究

以鼓槌石斛八成熟蒴果为外植体,通过对其种子无菌萌发培养、原球茎继代增殖及生根壮苗培养基的筛选,建立鼓槌石斛的组培快繁技术体系。结果表明:1/2 MS+1.0 mg/L NAA+8.0%土豆泥+0.10%活性炭培养基效果较理想,种子萌发率较高,发芽快;最适增殖培养基为3/4 MS+3.0 mg/L 6-BA+8%香蕉泥,增殖系数可达7.23;最佳生根培养基为3/4 MS+1.0 mg/L NAA+0.5 mg/L CA+8%香蕉泥,平均根数量达7.49条。炼苗移栽到松树皮作为栽培基质的苗床上,1个月以后,成活率均达80%。

鼓槌石斛未成熟种子无菌萌发与小苗组培快繁的研究

本文报道鼓槌石斛未成熟种子在离体培养下发育成苗及离体快繁的研究结果．在附加1．0mg／LBA和0．5mg／LNAA的MS培养基上，鼓槌石斛未成熟种子接种后最初一个星期内，发育较慢，以后明显较快，至接种后2w时，种胚的长度或直径增加到接种前的1．5倍～2．0倍；至接种后3w时也有10％～15％的种胚突破种皮，形成裸露的种胚（原球茎体）；至接种后第4w时，可以观察到裸露的种胚开始萌芽，首先出现盾片子叶，以后第1，第2和第3片幼叶逐渐依次形成．从接种到第1片幼叶（真叶）形成时，约需80d．在初代培养基上未观察到根的形成，这可能与初代培养基中追加有1．0mg/LBA有关．由于同一蒴果中的种子是发育不同步的，故种胚、原球茎体以及幼苗的发育也是不同步的．培养物（无根幼苗及原球茎体）转接到成分与初代培养基完全相同的新鲜培养基上进行继代培养时，原球茎体及无根幼苗的基部会增殖形成新生的原球茎体，继而发育成幼苗；少部分原球茎体在发育成苗之前脱分化形成颗粒状愈伤组织，这种愈伤组织可以增殖形成新的愈伤组织；或分化出芽点，继而发育成幼苗；或分化出原球茎体，继而再发育成幼苗．生根壮苗培养过程中试验了5种基本培养基，其适应性按顺序依次为H〉1／3MS〉1／2MS〉SJ-1〉MS．

鼓槌石斛园艺新品种金鼓紫槌的选育和栽培

金鼓紫槌是云南省德宏热带农业科学研究所选育的鼓槌石斛园艺新品种,经3 年区域栽培试验表明,其植物学性状稳定,根系发达,生长好;石斛毛兰素含量0.05%,盛产期平均产量3.9 kg/m^2,优质高产;具有较强的抗寒、抗旱和抗病性;适于在海拔550～1 700 m,年均温15～20℃,最低温〉5℃以上,冬季无霜,年降雨量1 400～1 900 mm,土壤pH 5.0～6.0 的地区种植.

鼓槌石斛毛兰素诱导人结肠癌Caco-2细胞凋亡

目的:研究毛兰素对人结肠癌Caco-2细胞增殖的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:采用SRB法检测毛兰素对Caco-2细胞增殖的抑制作用,用Hoechst33342染色法观察细胞的形态学改变,流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达水平。结果:与对照相比,毛兰素能抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖,且抑制率随着药物浓度与时间增加,呈剂量时间效应,48 h半数抑制浓度IC50为0.845μg/m L;毛兰素能诱导Caco-2细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G_2期;Caspase-3活性裂解片段表达增高。结论:毛兰素对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过线粒体途径诱导Caco-2细胞凋亡。

鼓槌石斛改善糖尿病性视网膜病活性及其机制

目的观察鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)乙醇提取物(DC)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导小鼠糖尿病性视网膜病(DR)的改善作用,并研究其可能的机制。方法采用STZ诱导C57小鼠发生糖尿病(DM),进而诱导产生DR,并给予DM小鼠DC干预。通过视网膜血管免疫荧光染色和视网膜组织苏木精-伊红(HE)染色来检测视网膜血管新生情况;采用实时PCR和酶联免疫分析(ELISA)分别检测视网膜组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通路基因表达情况和玻璃体、血清中VEGF含量。结果 DC不同剂量均能够明显降低STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管新生程度;研究其机制发现,DC能降低STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜内增加的低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α),VEGF及其受体VEGFR1和VEGFR2的基因表达,并能降低STZ诱导的糖尿病小鼠玻璃体和血清中增加的VEGF含量。结论 DC具有改善DR的药效活性,其机制为抑制VEGF信号通路的基因表达,并降低玻璃体和血清中的VEGF水平,进而抑制DR病变过程中的视网膜血管新生。

鼓槌石斛研究进展

鼓槌石斛是传统的名贵药用植物,近年来对该植物的研究取得了显著的进展。在系统查阅相关文献的基础上,对鼓槌石斛种质资源分布、化学成分、药理作用、菌根真菌及基因多态性和指纹图谱的研究进展进行总结,以为鼓槌石斛的合理利用提供依据。

鼓槌石斛中抗癌成分毛兰素的含量测定研究

目的建立测定鼓槌石斛药材中毛兰素含量的高效液相色谱法。方法采用Agilent Zorbax Eclipse XDB—C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相为甲醇-乙腈-水（30：30：40）；流速为1．0mL·min^-1；检测波长为232nm；柱温为25℃。结果毛兰素在0．0935—5．984μg内呈良好的线性关系（r=1．0000）；平均回收率为100．4％，RSD=1．14％（n=9）。结论此法准确、重复性好，可作为鼓槌石斛药材的质控方法。

鼓槌石斛研究进展

在系统查阅相关文献的基础上,对鼓槌石斛的研究进行了综述,着重介绍了野生鼓槌石斛资源分布与现状、种苗繁育、化学成分、药理作用与活性几方面的研究情况。

4种药用石斛对增强小鼠免疫功能效果的比较研究

目的比较铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛和流苏石斛4种药用石斛对增强小鼠免疫功能的效果。方法 4种石斛以0.25,0.50 g·kg^(-1)连续给予正常小鼠30 d后,测定小鼠的T淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬率和吞噬指数;4种石斛以0.25,0.50 g·kg^(-1)连续给予受环磷酰胺免疫抑制的小鼠30 d后,显微镜下用细胞计数法计数免疫抑制小鼠血液中的白细胞数、淋巴细胞数和中性粒细胞数。结果 4种石斛0.25,0.50 g·kg^(-1)剂量均能显著增强T淋巴细胞增殖能力,并显著增加血液中的淋巴细胞数和巨噬细胞吞噬指数;铁皮石斛0.25,0.50 g·kg^(-1)剂量均能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬率、血液中的白细胞数、中性粒细胞数;鼓槌石斛和流苏石斛0.50 g·kg^(-1)剂量能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬率和血液中的白细胞数;金钗石斛0.50 g·kg^(-1)剂量能显著升高血液中的白细胞数。结论 4种石斛均能增强小鼠免疫功能,但铁皮石斛在增强巨噬细胞吞噬能力及提高免疫抑制小鼠血液中的中性粒细胞数方面效果优于另外3种石斛。

鼓槌石斛特异性PCR分子鉴定

目的研究能够特异性鉴别鼓槌石斛的PCR引物,并优化PCR检测体系,确立一种快速、准确鉴别鼓槌石斛的方法。方法从GenBank数据库中下载石斛属rDNAITS序列170余条,运用MEGA5.0对所有序列进行同源性比较,找出各变异位点,在非保守区设计1对特异性引物。对35份石斛属植物DNA模板进行特异性引物PCR扩增,显示阳性者为鼓槌石斛。结果将退火温度升至58℃时,鼓槌石斛能被该引物特异性地扩增出来,而其他石斛属植物均为阴性,且该引物的灵敏度可达到0.69 ng/μL。结论建立一种特异性鉴别鼓槌石斛的方法,运用该特异性引物可实现从同源物种中快速、准确地鉴定出鼓槌石斛,具有特异性好,操作简便、高效、准确等优点。

不同光照强度对鼓槌石斛生长特性和化学成分的影响

以鼓槌石斛为试材,利用人工调节遮阳网的层数和高度形成不同的光照环境种植鼓槌石斛,试验6个月后,测定鼓槌石斛茎粗、株高等生长指标和氨基酸、多糖、毛兰素、总酚等有效成分含量。结果表明:在透光率50%的光照条件下,鼓槌石斛的茎增粗最明显,株高增长率最快;不同光照条件的鼓槌石斛中所含的氨基酸含量、多糖、毛兰素、总酚含量有显著差异。其中,在7月,透光率仅为10%的条件下,鼓槌石斛中总酚、毛兰素含量最高,分别为0.945%、0.164 4%;在11月,透光率50%的遮荫条件下,多糖含量成分最高为6.388%。遮荫对鼓槌石斛的生长特性、多糖、总酚、毛兰素有显著影响。

鼓槌石斛的种源鉴定及种植情况

课题组通过实地考察,总结了鼓槌石斛种源的纯正性及种源鉴定,并对现有资源及种植产业发展现状和种植技术进行了调查总结。现有的种源鉴定主要还是形态学等生物学特性鉴定,包括植株形态、生长环境、花的结构。结果表明:历经20年的发展,云南鼓槌石斛人工栽培面积达733.1hm^2,投产面积达722.1hm^2,产鲜花1 198.21t,实现产值2 396.4万元,产鲜茎13 309.7t,实现产值15 962.4万元。该研究结果将为鼓槌石斛优良品种选育,鼓槌石斛产业的健康、可持续发展提供技术支撑。

鼓槌石斛对小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变的改善作用及其机制研究

目的 观察鼓槌石斛乙醇提取物（ethanol extract of Dendrobium chrysotoxum，EEDC）对链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变（NPDR）的改善作用及其机制。方法采用STZ诱导小鼠发生糖尿病,进而建立糖尿病并发症NPDR实验动物模型,再给予EEDC进行干预。采用视网膜组织伊文思蓝渗漏实验观察NPDR小鼠中血-视网膜屏障（BRB）的破坏情况;采用real-time PCR（RT-PCR）检测视网膜组织中白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子（TNF-α）及早期生长反应因子（Egr-l）、组织因子（TF）、纤溶酶原激活物抑制剂l（Serpine l）的基因表达;进一步采用酶联免疫实验（ELISA）检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine l的量。结果与对照组相比,模型组小鼠视网膜组织伊文思蓝渗漏量明显增加,EEDC能够减少视网膜组织伊文思蓝渗透量;EEDC能够显著降低模型小鼠视网膜组织中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine l的基因表达;EEDC能够明显下调模型小鼠血清中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine l的量。结论 EEDC具有改善STZ诱导小鼠NPDR的作用,其机制为通过抑制NPDR小鼠视网膜和血清中增加的炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及与凝血/纤溶相关基因TF、Serpine l的基因表达,缓解BRB的破坏,从而发挥改善NPDR的作用。

鼓槌石斛乙醇提取物对糖尿病大鼠视网膜组织凋亡相关因子表达的影响

目的:观察鼓槌石斛乙醇提取物(EDC)对糖尿病大鼠视网膜凋亡相关因子表达的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组(DM组)及EDC低剂量组(LEDC组)和高剂量组(HEDC组)。除正常对照组外,其余各组大鼠均通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型。8周后,LEDC组、HEDC组分别给予EDC100 mg·kg^(-1)·d^(-1)、300 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常对照组和DM组予等量0.9%Na Cl溶液灌胃。干预8周后,采用HE染色观察各组大鼠视网膜各层结构,Western blot、免疫组化法检测视网膜组织Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,TUNEL法观察视网膜组织凋亡指数。结果:与正常对照组比较,DM组视网膜内界膜不完整,内、外核层界限模糊,神经纤维层肿胀明显;而EDC不同剂量组与DM组比较,内、外核层界限渐清晰,神经纤维层肿胀减轻。与正常对照组比较,DM组Bax、Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降;LEDC组、HEDC组视网膜Bax、Caspase-3蛋白表达明显低于DM组,Bcl-2蛋白表达明显高于DM组(P<0.05)。免疫组化结果显示,正常对照组视网膜中未见Caspase-3阳性表达,DM组Caspase-3明显表达于神经纤维层、内核层、色素上皮层,LEDC、HEDC组少量表达于神经纤维层、色素上皮层,并且HEDC组Caspase-3阳性表达低于LEDC组。TUNEL结果显示,DM组大鼠视网膜细胞凋亡指数明显高于正常对照组(P<0.01),而HEDC、LEDC组凋亡指数明显降低(P<0.01)。结论:EDC可能通过调控糖尿病视网膜病变过程中凋亡相关因子的表达,对糖尿病大鼠视网膜有一定的改善作用。