紫皮石斛总酚提取工艺优化及其抗氧化活性研究

目的:研究紫皮石斛总酚提取工艺及体外抗氧化活性。方法:在单因素试验的基础上,采用响应面法优化紫皮石斛总酚的超声波辅助提取工艺条件,通过测定紫皮石斛总酚对超氧阴离子、DPPH自由基及羟自由基的清除率,评价其抗氧化活性。结果:紫皮石斛总酚最优提取工艺条件为乙醇浓度69%,料液比1∶40(g/mL),提取时间31 min,在此条件下总酚提取量为1.56 mg/g,与理论值1.58 mg/g接近。紫皮石斛总酚对超氧阴离子、羟自由基及DPPH自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为19.40μg/mL、118.35μg/mL及30.75μg/mL。结论:优选的紫皮石斛总酚提取工艺合理可行,且其具有较强的体外抗氧化活性。

紫皮石斛花总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性研究

以紫皮石斛花为原料,采用超声波辅助法提取紫皮石斛花总黄酮。以乙醇体积分数、料液比、提取温度及提取时间为影响因素,总黄酮提取率为考查指标,在单因素试验基础上,采用响应面法优化紫皮石斛花总黄酮提取工艺条件。通过测定紫皮石斛花总黄酮对超氧阴离子、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基及羟自由基的清除率,评价其抗氧化活性。结果表明,紫皮石斛花总黄酮最佳提取工艺条件为乙醇体积分数60%,料液比1∶35(mg∶mL),提取温度70℃,提取时间29 min,在此条件下,总黄酮提取率为3.54%±0.013%,与预测值3.41%接近。紫皮石斛花总黄酮对超氧阴离子、DPPH自由基、羟自由基的半数抑制质量浓度分别为0.32,0.17,0.42 mg/mL,表明紫皮石斛花总黄酮具有一定的抗氧化作用。

齿瓣石斛提取物体外抗菌作用初步研究

[目的]研究齿瓣石斛的无水甲醇和水提取物的抗菌活性。[方法]采用试管稀释法测定齿瓣石斛无水甲醇和水提取物对11种临床常见的病原菌的MIC及MBC,初步判定其抑菌效果。[结果]无水甲醇和水提取物在体外对7种细菌有不同程度的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌的抑制作用最强,对痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌无明显作用;无水甲醇提取物的抗菌作用强于水提取物。[结论]齿瓣石斛无水甲醇和水提取物对所测试菌种具有良好的体外抗菌作用。

龙陵县紫皮石斛产业化发展研究

紫皮石斛是云南省石斛产业发展中重要的品种之一,是近年来云南部分山区农民脱贫致富在主要产业。本文通过对云南紫皮石斛主要产地———龙陵县紫皮石斛产业化的发展进行研究,认为龙陵石斛产业发展虽然具有了一定的基础,但还仍然存在产业化水平低,市场风险大的问题。针对紫皮石斛产业发展中存在的问题,提出一些促进紫皮石斛产业健康有序发展的建设性意见,对我国石斛产业的发展具有较好的借鉴意义。

紫皮石斛抗小鼠体力疲劳作用

目的:研究紫皮石斛对小鼠的抗体力疲劳作用。方法:取雄性昆明种小鼠50只,按体重随机分成5组(n=10):空白对照组,人参皂苷组,紫皮石斛高、中、低剂量组。空白对照组给予等体积的生理盐水,人参皂苷组给药剂量为200 mg/kg·d^(-1),紫皮石斛高、中、低剂量组给药剂量分别为35.04 g/kg·d^(-1)生药、17.52 g/kg·d^(-1)生药、8.76 g/kg·d^(-1)生药,每天灌胃1次,连续15 d。于末次给药后30 min,测定小鼠负重力竭游泳时间及体内血清尿素氮、血清乳酸、肝糖原的含量,评价紫皮石斛的抗体力疲劳作用。结果:与空白对照组比较,紫皮石斛能延长小鼠负重游泳力竭时间,能降低小鼠游泳后的血清尿素氮、血清乳酸的含量,能提高小鼠体内肝糖原的储备量,且差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:紫皮石斛具有抗体力疲劳作用。

齿瓣石斛不同营养器官多糖的含量测定

目的探讨齿瓣石斛不同营养器官的多糖含量。方法采用硫酸-苯酚法对齿瓣石斛根、嫩条、叶、老条多糖含量进行测定。结果嫩条中的多糖含量明显高于其它部位,其含量的顺序分别为嫩条>叶>根>老条。结论齿瓣石斛采收嫩条部位比较合理,老条可用于分株繁殖和压条繁殖。

齿瓣石斛的原生境播种及其株丛生长特性研究

兰科(Orchidaceae)植物是植物保护中的"旗舰"类群,其种子细小粉末状,缺乏萌发所需的营养物质,研究种子萌发和幼苗生长特性对于兰科植物保育、资源可持续利用和产业化等具有重要意义。本研究以附生齿瓣石斛(Dendrobium devonianum Paxt.)为对象,建立原生境播种方法,研究其生活史周期和不同附主树种齿瓣石斛株丛生长特性。结果显示,采取稀牛粪+种子(或米汤+种子)的原生境播种方法,齿瓣石斛种子可大量萌发生长形成幼苗;种子萌发当年生长缓慢,完成由种子到种子的生活史周期需3~5年或更长;不同附主树种的齿瓣石斛株丛生长及结果情况存在差异,4年生假鳞茎在不同附主树种上的茎节数指标为:李树>梨树>桃树>披针叶楠;茎粗指标为:披针叶楠>梨树>桃树>李树;茎长指标为:梨树>披针叶楠>李树>桃树;结实率指标为:梨树>桃树>李树>披针叶楠,其中,梨树上的齿瓣石斛株丛自然结果率达24.86%。该研究为附生石斛的原生态栽培和回归保育提供了一条新途径。

珍稀林药植物齿瓣石斛芽增殖和快繁研究

以齿瓣石斛(Dendrobium devonianum Paxt)组培苗为外植体,对适合齿瓣石斛丛生芽增殖和生根的培养基进行筛选,并建立齿瓣石斛无性繁殖体系。研究结果表明,丛生芽增殖的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+25 g/L蔗糖,在此培养基上,增殖系数高,幼苗生长状况好;继代苗在MS+0.3 mg/L NAA+20 g/L蔗糖的培养基上生根效果最好,根系长而粗壮;适于组培苗炼苗的最佳基质为甘蔗渣,两个月后,成活率达90%以上。其研究结果对野生石斛资源的保护和合理开发具有重要的意义,并为齿瓣石斛的规模化生产提供科学依据。

齿瓣石斛病原链格孢菌生物学特性研究

对齿瓣石斛（Dendrobium devonianum Paxt，）黑斑病病原物链格孢菌（Alternaria tenuis Nees）进行分离并对其生物学特性进行研究。用常规组织分离法从齿瓣石斛叶片中分离黑斑病病原物链格孢菌，以PSA为基本培养基，研究培养基pH值、附加不同碳源和氮源、温度、光照等培养条件对链格孢菌菌丝生长及产孢的影响。齿瓣石斛链格孢菌菌丝最适宜生长的温度25℃，20℃最宜产孢；最适宜的pH值为5—6；光照对菌丝生长影响不显著，产孢量以光暗交替下培养最多；在PSA培养基上加入淀粉或硝酸铵对菌丝生长最好，产孢则以葡萄糖较好，在其他碳源或氮源的培养基上极少产孢。齿瓣石斛链格孢菌适宜在PSA培养基pH值为5—6，附加一定葡萄糖和硝酸铵，25℃和光暗交替下生长。

超临界二氧化碳萃取齿瓣石斛

目的采用超临界二氧化碳萃取(SFE)法萃取齿瓣石斛。方法使用正己烷、异丙醇、乙酸乙酯、乙醇作为夹带剂。SFE萃取分两阶段和一阶段萃取,前者使用纯CO2萃取,再添加夹带剂萃取;后者直接泵入夹带剂与CO2共同萃取,以比较两法的萃取效率。结果乙酸乙酯作为夹带剂更有利于齿瓣石斛中低极性化合物的溶出。直接泵入乙酸乙酯与CO2共萃的方式更有利于齿瓣石斛中各成分的溶出。结论本实验萃取方式为未来齿瓣石斛的进一步研究提供良好的基础。

玫瑰石斛HPLC特征图谱研究

目的：建立玫瑰石斛HPLC特征图谱.方法：采用ZORBAX SB-Aq色谱柱,流动相为乙腈-0.2％甲酸,梯度洗脱,流速1.0 mL＆#183; min-1,柱温30℃,检测波长270 nm.结果：建立了12批玫瑰石斛HPLC特征图谱,标记出41个共有峰,相似度为0.901～0.986.结论：该法稳定可靠、重复性好,为玫瑰石斛的鉴别提供依据.

石斛锈病病原初步鉴定及其防治药剂筛选

石斛锈病为齿瓣石斛(Dendrobium devonianum Paxt.)上的一种新病害。通过对锈病病斑的形状、颜色和冬孢子的外观形态进行观察,确定病原为担子菌门冬孢菌纲锈菌目柄锈菌属真菌。对锈病进行田间药剂防治试验,结果表明,43%戊唑醇SC、10%苯醚甲环唑WG、15%三唑酮WP三种药剂对该病防治效果较好,相对防效分别达到81.14%、76.36%和76.33%。

齿瓣石斛多糖及醇溶性浸出物含量积累规律研究

[目的]研究不同海拔、不同采收时间齿瓣石斛鲜条内的多糖含量以及醇溶性浸出物含量变化规律。[方法]采用循环水浴加热法提取齿瓣石斛中的多糖、醇溶性浸出物,并进一步运用化学试剂反应显色以及形成络合物;采用紫外分光光度法对石斛样品中的多糖含量进行测定,用差量法对石斛样品中的醇溶性浸出物含量进行测定。[结果]齿瓣石斛受海拔、采收时间的影响较大,不同海拔、不同采收时间所测齿瓣石斛所含多糖含量及醇溶性浸出物含量变化较大。在适宜种植齿瓣石斛的滇西地区,海拔越高,齿瓣石斛所含多糖及醇溶性浸出物含量越高;采收时间越长,齿瓣石斛所含多糖含量呈减少的趋势,但变化不明显,相反醇溶性浸出物含量却逐渐增加。[结论]该研究为齿瓣石斛种植和采收提供参考。

齿瓣石斛群体性状的变异及主成分分析

探索齿瓣石斛群体变异情况,为生产和育种提供参考。选择齿瓣石斛人工仿野生栽培1～3年的基地6个,每个基地随机选择3个样点,每样点面积2m2,统计6个主要变异类型的植株数;每个变异类型统计茎长、茎粗、茎节数、单条鲜重、叶长、叶宽、长宽比、叶面积;采用SPSS软件对不同类型齿瓣石斛性状进行差异显著性分析和主成分分析。结果表明齿瓣石斛狭叶粗壮型所占比例最高,血草型最少;铁线草的茎长、茎节数最大,显著高于血草型(P<0.05)和紫鞘粗壮型(P<0.05);宽叶粗壮型的茎粗和单条鲜重均显著高于其他各组(P<0.05);在叶长、叶宽、叶面积上,宽叶粗壮型、狭叶粗壮型、紫鞘粗壮型分列前三位,属于大叶类型,与血草型相比均有显著差异((P<0.05);齿瓣石斛主要群体性状指标存在不同程度的变异,以单条鲜重和叶面积变异程度最大;在齿瓣石斛育种工作中,可以尝试集中考察能反映齿瓣石斛综合性状的茎长和茎粗这2个植物学性状指标,以提高齿瓣石斛新品种选育的效率。

珍稀齿瓣石斛的生物学特性及其野生资源保护

阐述了齿瓣石斛的生物学特性及资源情况。为附生草本植物,主要分布于热带、亚热带温暖湿润地区,高温环境下茎条细长,低温(1℃以下)容易受冻,为冬季落叶型石斛。自然条件下,齿瓣石斛繁殖方式包括有性繁殖和营养繁殖,有性繁殖对环境要求严格,果实种子量大,为明显的"以量取胜"繁殖,是扩大种群分布范围的主要途径;营养繁殖分合轴生长和高芽繁殖,合轴生长形成并壮大株丛,有春秋两个萌芽峰期,而高芽是扦插、压条繁殖的保证。野生资源过度采摘、生境破坏与植树造林、繁殖特性缺陷、人工种植产业发展缓慢、供需矛盾突出等是齿瓣石斛野生资源濒危的主要原因。应制定相关政策,加强野生资源保护,推进齿瓣石斛工厂化育苗,并积极开展种子自然繁殖技术研究,降低种苗培育成本,加快规模化种植产业发展,实现齿瓣石斛资源的可持续利用。

3种石斛属植物假鳞茎高位腋芽的萌发初探

对比分析3种具有重要药用价值的石斛属植物高位腋芽萌发情况,为石斛种苗营养繁殖提供参考。方法:采集扁草石斛Dendrobium nobile Lindl.、铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo和齿瓣石斛Dendrobium devonianum Paxt.等3种石斛假鳞茎,观察高位腋芽萌发率和生长情况。结果:扁草石斛、铁皮石斛和齿瓣石斛的茎条高芽萌发率分别为93.7%、74.2%、83.3%;茎节萌发率分别为26.4%、15.8%、16.1%;高芽生长情况齿瓣石斛>扁草石斛>铁皮石斛。结论:3种石斛均具有典型高位腋芽萌发特性,随着当前市场石斛假鳞茎成本降低,利用其高位腋芽繁育种苗具有较好的发展前景。

齿瓣石斛原球茎诱导及植株再生技术试验

对齿瓣石斛原球茎诱导及植株再生技术试验的结果表明:齿瓣石斛原球茎最佳诱导培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.1 mg/L;增殖分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L;壮苗生根培养基为MS+IBA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L。

全自动凝胶净化-浓缩-固相萃取/气相色谱-质谱法测定紫皮石斛中有机磷农药残留

建立了以凝胶渗透色谱（GPC）和固相萃取（SPE）净化、气相色谱-质谱（GC-MS）法同时测定紫皮石斛中10种有机磷农药残留的方法。样品用乙腈超声提取,提取液经GPC去除类脂杂质和大分子物质,后经Envi-Carb/NH2固相萃取柱净化,选择离子（SIM）监测模式检测,外标法定量。在26min内10种农药得到很好的分离,农药残留量在0.02~0.5μg/mL,方法的线性良好,相关系数为0.997 3~0.999 9,农药加标浓度为0.05mg/kg和0.2mg/kg时,加标回收率在70.4%~115.8%,相对标准偏差在2.8%~9.6%,满足国家标准要求,检出限为0.005 2~0.011mg/kg。方法简便、快速、灵敏、准确,能够运用于石斛中多组分有机磷农药残留的定性和定量分析。

齿瓣石斛面膜的研制及其功效评价

以齿瓣石斛茎、花为主原料,采用正交实验及感官评分确定齿瓣石斛面膜液最优配方,通过体外实验测定其保湿率、自由基清除率及酪氨酸酶活性抑制率。结果显示,齿瓣石斛面膜液具有较好的保湿、清除自由基及抑制酪氨酸酶活性的作用,说明齿瓣石斛面膜具有一定的保湿、抗氧化及美白作用。

气相色谱法测定石斛中的农药残留

建立了毛细管柱气相色谱法同时测定石斛中18种有机氯和拟除虫菊酯类农药残留的方法。石斛鲜条经匀浆,乙腈提取、净化后,选用HP-5毛细管色谱柱,通过柱程序升温,进行检测,外标法定量。结果显示:18种农药取得很好的分离效果,农药残留量在0.008～0.4μg/mL范围内方法的线性良好,相关系数为0.9961～0.9999,18种混合农药加标量为0.05 mg/kg和0.5 mg/kg时,加标回收率在75.3%～109.2%之间,相对标准偏差小于10%,检出限0.001～0.01 mg/kg。