秋石斛胚性愈伤组织诱导及再生体系的建立

秋石斛(Phalaenopsis-hybrid Dendrobium)花姿优美、花色丰富,是热区重要观赏植物,具有极高的产业价值。本研究以秋石斛杂交种迷你(Den.Yaya Victoria)、水蜜桃(Den.Swirl)、三亚阳光(Den.Sonia Hiasakul)原球茎和无菌苗幼嫩茎段为外植体,探讨不同植物生长调节剂组合对不同品种秋石斛胚性愈伤诱导、不定芽分化及植株再生的影响。结果表明:在胚性愈伤组织诱导阶段,原球茎和生长2个月的幼苗茎段作为外植体诱导效果最佳,暗培养30 d即可获得胚性愈伤。3个品种的愈伤组织诱导最佳培养基是以MSD(MS+30 g/L葡萄糖+1 g/L花宝1号+8 g/L琼脂)为基本培养基,添加0.5 mg/L KT和0.2~0.5 mg/L 2,4-D。迷你、水蜜桃、三亚阳光的胚性愈伤诱导率最高分别为31.11%、22.78%和50%,其中迷你品种仅需15 d即可获得胚性愈伤。最佳胚性愈伤增殖培养基为MSD+0.5 mg/L IBA+0.5 mg/L KT,胚性愈伤状态保持良好且不发生分化,增殖倍数0.9。最佳分化培养基为1/2 MS+0.5 mg/L IBA+0.15 mg/L KT,在光照条件下,接种后的胚性愈伤组织能够快速诱导形成芽点,30 d内分化形成2~3片叶的幼苗,相同培养基中保持60 d能够自行生根获得完整再生苗。最佳生根培养基为1/2 MS+30 g/L蔗糖+0.5 mg/L NAA+8 g/L琼脂,生根率为100%,平均生根数5条,根长约1.3 cm。本研究所使用的胚性愈伤组织诱导、增殖和分化培养基具有一定的广谱性,可为后续秋石斛胚再生途径及分子育种研究奠定基础。

梵净山石斛快速繁殖技术研究

为研究梵净山石斛快速繁殖技术,对其保育提供基础资料,本实验分别以梵净山石斛茎段、种子为外植体进行组培快速繁殖技术研究。结果表明,以茎段为外植体,最佳消毒方法为:75%乙醇消毒30 s,0.1%HgCl_(2)消毒13 min,腋芽诱导最佳组合为:1/2 MS/B_(5)+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,不定芽诱导和增殖最佳组合为:1/2 MS+0.5 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA,以种子为外植体,种子萌发和原球茎诱导最佳组合为:MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+1 g/L活性炭,原球茎增殖最佳组合为:MS+0.5 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA,无菌小苗增殖最佳为:MS+0.5 mg/L NAA+1.0/2.0/3.0 mg/L 6-BA。生根壮苗最佳组合为:MS+0.5 mg/L NAA+1/0.1/0.5 mg/L IBA。

Investigation on the Morphological Characteristics of Dendrobium officinale Plantlets Propagated from Different Explants

[ Objective] This study aimed to investigate the differences in morphological characteristics of Dendrobium officinale plantlets propagated from different explants. [ Method] Randomly 1 000 D. offtcinale plantlets propagated via different regeneration pathways were selected for morphological investigation and classification. [ Result] D. officinale plantlets propagated from stem segment explants exhibited highly consistent morphological characteristics, while those propagated from seed explants exhibited a variety of morphological characteristics. [ Conclusion] Therefore, using seed explants for regeneration can effectively broaden the germplasms resources of D. officinale.

霍山石斛茎段培养诱导丛生芽的研究

以霍山石斛2a生嫩茎为外植体,开展霍山石斛茎段离体培养诱导丛生芽的研究。结果表明:在2.5%的次氯酸钠溶液消毒10min的处理效果较好,污染率26.67%,死亡率23.33%;茎段腋芽在MS、N_(6)培养基上萌发率均能达到90%,优于1/2MS、1/2N_(6);5%土豆泥与10%香蕉泥的组合,添加在MS、N_(6)培养基中,促进腋芽生长要优于仅添加一种有机物;在MS+5%土豆泥+10%香蕉泥的培养基上调整,0.7mg/L6-BA与0.07mg/L NAA的激素配比对霍山石斛丛生芽继代增殖作用突出,增殖倍数在4.2,且丛生芽长势良好。综合分析,最终筛选出霍山石斛丛生芽增殖最佳培养基为MS+5%土豆泥+10%香蕉泥+0.7mg/L6-BA+0.07mg/LNAA。

铁皮石斛甘露糖含量与其颜色的相关性研究

目的使用超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)对铁皮石斛甘露糖分离色谱条件进行优化,并将色差法原理与其主要活性成分甘露糖含量相关联,探讨铁皮石斛颜色与含量的相关性,为铁皮石斛药材质量建立一种快速测定及判断的方法。方法使用UPLC测定甘露糖含量,使用CIE L^(*)a^(*)b^(*)色差法原理定量茎粉末色泽,使用R软件及SPSS进行相关性及聚类分析。结果建立了一套UPLC-TUV快速分离及测定铁皮石斛甘露糖的方法,可在8 min内使甘露糖快速出峰且完全分离,比传统高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)方法快3~10倍;铁皮石斛甘露糖含量与茎粉末明暗色度L^(*)、黄绿色度b^(*)以及总色差E^(*)ab存在极显著负相关关系(P<0.01),说明其茎粉末L^(*)值越小即偏暗黄且b^(*)值越小即偏黄棕时甘露糖含量越高(13.5%~28.9%),偏浅黄色或浅绿色时甘露糖含量越低(6.4%~12.6%)。结论采用UPLC优化铁皮石斛糖组分色谱分离条件极大地缩短甘露糖测定所需时间,可为其糖组分快速准确测定提供参考;色差原理可作为判断和评价铁皮石斛种质资源的甘露糖含量范围及品质的参考依据。

不同附树栽培下铁皮石斛茎微量元素及有效成分分析

为筛选优良种源及最佳附生树种,促进贵州石斛产业发展,本文以5个不同种源铁皮石斛在麻栎(Quercus acutissima Carruth.)、枫香(Liquidambar formosana Hance)上的附树栽培为研究对象,分析了茎微量元素锰(Mn)、锌(Zn)、铁(Fe)、铜(Cu)、铬(Cr)、硒(Se)、镍(Ni)7种微量元素及总多糖、总黄酮、总生物碱等有效成分的差异。结果表明:从茎微量元素角度出发,最适宜于该地区推广种植的种源是梵净山种源,附生树种优选枫香;其次是广西九万大山高寒品种,附生树种优选麻栎;从有效成分积累的角度出发,广西九万大山高寒品种是较适宜于该地区推广种植的种源,附生树种优选麻栎;其次是安龙本地种源,附生树种以麻栎为佳。

五种药用石斛快速繁殖的研究

为解决石斛的快速繁殖和提高组培苗的成活率,以MS为基本培养基,把《中华人民共和国药典(2000版)》(以下简称中国药典)收载的5种药用石斛的茎段作为外植体进行了组培和快繁,并根据石斛的生物学特性,配制了多种基质进行炼苗。结果表明:不同种类的石斛在诱导侧芽萌发时所需培养基不同,但是在增殖、壮苗生根以及炼苗移栽时所需基质却具有相似性。环草石斛、铁皮石斛、束花石斛、马鞭石斛和金钗石斛在诱导侧芽萌发时的最适培养基分别为:MS+NAA0.1mg/L+6BA1.0mg/L、MS+NAA0.1mg/L+6BA1.5mg/L、MS+NAA0.5mg/L+6BA2.0mg/L、MS+NAA1.0mg/L+6BA2.0mg/L、MS+NAA0.1mg/L+6BA2.0mg/L。这5种石斛增殖、壮苗生根的最适培养基分别为:MS+NAA0.1mg/L+6BA3.0mg/L、1/2MS+NAA0.7mg/L。移栽最适基质为:碳酸盐小石子∶木屑=1∶2,再覆盖1cm厚的苔藓,幼苗移栽成活率达95%以上。本文首次报道了在实验室里获得马鞭石斛和束花石斛这两个种的组培苗,并初步解决了石斛试管苗脱瓶移栽成活率低的问题,使下一步进行大面积人工栽培成为可能。

霍山石斛带节间的茎段在IBA/NAA诱导下的组织培养

论文研究了外源激素 (IBA、NAA)在霍山石斛带节间茎段的组织培养中的调节作用 ,探索了诱导出芽和诱导生根的最佳配比的培养基 。

铁皮石斛茎叶中挥发油成分的GC-MS分析

为探明铁皮石斛茎叶中挥发油的组成,采用固相微萃取技术提取铁皮石斛茎及叶中的挥发油,运用GC-MS对其化学成分进行分析鉴定。结果表明:铁皮石斛茎和叶中分离出80个42个化学成分,鉴定出73个和36个化学成分,其相对含量占挥发油总量的94.63%和97.72%;铁皮石斛茎和叶具有相同的挥发性化学成分27个,其主要成分均含有柠檬油精、壬醛、顺-3-己烯醇等。

环草石斛(D.loddigesii Rolfe.)快速繁殖研究

用环草石斛的茎段作为外植体进行组织培养,以MS培养基为基本培养基,通过形成丛生芽的形式快速繁殖试管苗,改变了过去通过原球茎诱导途径进行繁殖的方式,简化了操作步骤。结果表明:芽诱导、芽增殖与继代培养基、壮苗与生根培养基分别以MS+NAA0 1mg/L+6-BA1 0mg/L、MS+NAA0 1mg/L+6-BA3 0mg/L、1/2MS+NAA0 7mg/L为最好;移栽最适基质以碳酸盐小石子∶杉木屑=1∶2,上面铺盖1cm厚的苔藓为最好,幼苗的成活率达95%;取材的位置不同对环草石斛出芽也有一定的影响,茎尖部位明显要高于其它部位,茎中部次之,而茎基部几乎不能萌发;茎段外植体苗比种子苗成株快,茎粗,苗壮,易成活;外植体苗分段增殖时基部茎段的增殖系数比上部茎段大,生长速度快。继代增殖苗段比野生植株增殖快。同时还总结了环草石斛的组织培养和快速繁殖过程,并对其工业化生产进行了初步讨论。

福建省铁皮石斛茎腐病病原菌鉴定及其生物学特性

【目的】明确福建省铁皮石斛茎腐病病原菌及其生物学特性。【方法】从福建省诏安县、松溪县等地的3个种植基地采集典型病株并分离病原菌,采用形态学结合分子生物学(ITS、EF1-α、ACT、RPB2和LSU基因序列分析)的方法鉴定其病原菌种类,并对该病原菌菌丝体在不同温度、pH值、光照条件、碳源、氮源等生物学特性进行研究。【结果】经鉴定该病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。生物学特性研究表明其菌丝生长最适温度为30℃,pH为7,光照有利于菌丝生长,最适碳、氮源分别为淀粉和蛋白胨。【结论】分离鉴定了福建省铁皮石斛茎腐病病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),明确了病原菌生物学特性。

铁皮石斛茎段离体培养一次成苗技术研究

【目的】简化铁皮石斛繁育流程,缩短育苗周期.【方法】以铁皮石斛茎段为外植体,研究了铁皮石斛茎段组织培养一次成苗技术.【结果】70%的乙醇30s+1‰升汞10min消毒效果较好,外殖体污染率为43%,诱导率达97%;一次成苗培养基1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 3mg/L+香蕉泥100g/L+琼脂7‰+蔗糖25g/L增殖及生长情况最好;在该组培系统中铁皮石斛适宜的继代周期为50d,成苗率100%,平均根数5.4,繁殖系数5.6;铁皮石斛丛生芽移栽以腐叶土和腐叶土∶河沙(1∶1)两种基质的成活率高,且生长健壮.【结论】本技术简化了铁皮石斛组培工艺流程,缩短了育苗周期,降低了生产成本,适用于规模化生产.

铁皮石斛不同外植体组培快繁技术比较研究

运用铁皮石斛不同的外植体进行组培繁殖研究,选择出适宜当前中草药发展的合理繁殖途经。本研究以铁皮石斛种子及茎段为外植体进行组培快繁技术试验,结果表明,二者在诱导初始条件、增殖方式、增殖系数、继代周期、根的诱导分化及苗木移栽等方面存在差异。通过比较试验认为,铁皮石斛快繁体系建立以茎段外植体为宜,建立的繁育体系具有经济、高效、稳定等优点,为规模化育苗提供物质和技术参考。

报春石斛再生体系的建立

以茎段为外植体,建立了报春石斛Dendrobium primulinum的离体培养再生体系。结果表明:愈合组织诱导以培养基MS(Murashige and Skoog)+5.0mg·L-16-苄氨基嘌呤(6-BA)+1.5mg·L-12,4-D为最优,诱导率达33.33%;分化和增殖培养基均以MS+1.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1萘乙酸(NAA)+体积分数10%椰子水为佳,分化率最高可达83.20%,增殖倍数达3.82,外源物质椰子水可促进不定芽的形成及增殖。形成的无根苗转移到1/2MS+0.5mg·L-16-BA+1.0mg·L-1NAA+0.5g·L-1活性炭培养基上诱导生根发育形成完整植株。

春石斛兰的茎段繁殖研究

采用春石斛兰的无菌苗作为研究材料,对其茎段繁殖进行系统地研究。采用茎段繁殖可以大大提高上部侧芽诱导率。在春石斛兰侧芽诱导中,较高浓度的无机盐抑制芽的生长;6-BA在0.2～0.8mg/L的浓度范围内,随着浓度的升高,春石斛兰的侧芽诱导率呈下降趋势;NAA在0.5～1mg/L的浓度范围内,春石斛兰的侧芽诱导率呈上升趋势。结果表明:春石斛兰茎段诱导侧芽的最适培养基为KC+6-BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L或1/2MS+KT1.5mg/L+NAA1.0mg/L。添加香蕉汁等有机附加物有利于侧芽的生长。

铁皮石斛茎段丛生芽的增殖培养研究

[目的]研究铁皮石斛茎段丛生芽的最适增殖培养方式。[方法]以铁皮石斛茎段为外植体,研究不同基本培养基、植物生长调节剂种类和浓度、有机添加物及培养时间对铁皮石斛丛生芽增殖的影响。[结果]MS培养基优于1/2MS、B5和N6;香蕉对丛生芽的分化有明显的促进作用;培养60 d时丛生芽的增殖倍数最高,生长势好。[结论]丛生芽的最佳增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5mg/L+香蕉100 g/L+活性炭0.5 g/L,培养时间以60 d为宜。

石斛干品基因组DNA的提取与RAPD分析

市场中药干品的药性差异一直是影响中药标准化的瓶颈,而检测技术相对落后是导致这一现象的主要原因。DNA分子水平检测的困难是药材干品的基因组DNA难以提取。本文以铁皮石斛(Dendrobiumcandidum)干茎为材料,采用了四种方法从干品石斛中提取基因组DNA。结果表明,采用改良的CTAB法可从石斛干品尤其是干茎皮中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23kb,以此DNA为模板进行不同引物的PCR扩增可获得清晰的RAPD条带。该研究初步建立了石斛干品合适的RAPD技术体系。

3种石斛属植物和细叶石仙桃的红外光谱分析和鉴定

利用傅里叶红外光谱仪和OMINI采样器直接迅速地测定3种石斛属常用原料药植物和常用伪品细叶石仙桃的红外光谱。结果表明,细叶石仙桃与石斛属组3种植物茎叶的红外光谱图存在较大差异,亲缘关系较远,而石斛属组内种间红外光谱图的差异较小。其中,铁皮石斛茎的特征峰为1 254、1 416、1 5453、365 cm-1等,铁皮石斛叶的特征峰为914、1 061 cm-1等。研究表明,铜皮石斛与铁皮石斛具有相似的红外光谱图,它可作为药用石斛品种代用品,而细叶石仙桃则不能作为药用石斛的代用品。

霍山三种石斛的内源GA、ABA含量对茎高生长的影响

本文研究了霍山三种石斛生长期的内源激素GA、ABA的变化与茎高生长的相互关系。结果表明:霍山三种石斛茎高生长与内源GA含量呈显著正相关,与内源ABA含量呈显著负相关。合适的GA/ABA比值是影响石斛茎高生长的重要因素。霍山三种石斛中的矮生品种米斛的内源GA含量尽管也较高,但其内源ABA含量一直维持较高水平,尤其生长后期迅速上升,GA/ABA含量比值低可能是其茎高生长缓慢的原因之一。

铁皮石斛不同外植体繁殖种苗的植株形态特征调查

为了研究利用不同再生途径繁殖的铁皮石斛组培苗植株形态特征的表现差异,分别随机抽取1000株人工栽培的不同再生途径繁殖的铁皮石斛组培苗植株进行形态特征调查,并进行分类归纳。结果表明,利用茎段外植体再生繁殖的铁皮石斛组培苗人工栽培植株,其形态特征表现高度一致;而利用种子外植体再生繁殖的铁皮石斛植株,其形态特征表现多种多样。由此可见,利用种子外植体再生繁殖,可以有效地拓宽铁皮石斛种质资源。