石斛多糖对胶原诱导关节炎小鼠免疫活性的影响

目的探究石斛多糖(DSP)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠体内辅助T(Th17)/调节性T(Treg)细胞比例平衡及免疫炎症的影响。方法构建CIA小鼠,通过关节HE染色和后肢右爪形态观察进行模型鉴定。分别给予CIA小鼠100、200和300 mg/kg DSP灌胃处理将小鼠分为对照组,模型组,低、中、高浓度DSP组。观察小鼠足爪病变情况,HE染色观察小鼠右肢滑膜组织病理改变,流式细胞术检测小鼠脾脏中Th17细胞,Treg细胞比例和CD4^(+)CD28^(-)PD-1^(low)OX40^(+)T细胞比例的变化,免疫组化法观察小鼠右肢膝关节中IL-7的表达水平,ELISA检测不同时间点(0、14、28、42 d)小鼠血清IL-6、IL-10及小鼠右肢膝关节IL-6和IL-10表达水平。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠足爪病变加重,滑膜组织病理变化明显,Th17细胞比例上升,Treg细胞和CD4^(+)CD28^(-)PD-1^(low)OX40^(+)T细胞比例下降,IL-7阳性表达增加,Foxp3阳性表达下降,血清和膝关节中IL-6水平增加,IL-10水平下降(均P<0.0.5)。与模型组相比,低、中、高浓度DSP组小鼠足爪病变减轻,滑膜组织病理变化改善,Th17细胞比例下降,Treg细胞和CD4^(+)CD28^(-)PD-1^(low)OX40^(+)T细胞比例上升,IL-7阳性表达减少,Foxp3阳性表达增多,血清和膝关节中IL-6水平下降,IL-10水平增加(均P<0.0.5),且高浓度DSP作用效果最好。结论DSP对CIA小鼠体内Th17/Treg细胞比例平衡具有调节作用,能抑制炎症反应,减轻病理改变。

索尼娅石斛多糖亚临界水提取工艺优化研究

目的优化索尼娅石斛多糖(DSP)亚临界水提取工艺。方法以DSP提取率为考察指标,选择提取温度、提取压力和液料比为考察因素进行单因素试验,采用Box-Behnken响应面法优选最佳提取工艺。结果优选的提取工艺为提取压力1.4 MPa,提取温度145℃,液料比25∶1(mL/g)。按此工艺制备3批样品的多糖提取率分别为6.03%,6.14%,6.09%。结论优选的DSP亚临界水提取工艺稳定、可靠,可用于DSP的提取。

秋石斛‘三亚阳光’Actin的克隆与表达模式分析

本研究克隆了秋石斛‘三亚阳光’(Dendrobium ‘Sonia Hiasakul’)肌动蛋白基因(DenActin)cDNA全长序列,并进行了DenActin进化地位和表达模式的分析。通过克隆获得的DenActin cDNA序列的全长为1 596 bp,其中开放阅读框为1 134 bp,编码377个氨基酸,同时通过gDNA克隆获得了DenActin 3′端的一段包含一个内含子的403 bp的片段。序列同源性分析发现该基因序列与GenBank中注册的其他植物Actin核苷酸序列的同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性高达97%以上。通过最大似然法构建其系统进化树,分析发现DenActin与黄石斛Actin的亲缘关系最为密切,并与其他兰科植物归为一大类。半定量PCR分析表明,DenActin在幼苗叶片和中苗茎尖、根、叶片以及成熟植株的茎、根、叶片、花柄、1 mm花苞、3 mm花苞、5 mm花苞、9 mm花苞中均稳定表达。秋石斛DenActin的克隆和表达模式分析为秋石斛功能基因的表达分析提供了候选的内参基因,而3′端包含内含子的gDNA片段的克隆为避免实时定量分析中的gDNA污染提供了引物设计的便利。

Dendrobium sonia polysaccharide regulates immunity and restores the dysbiosis of the gut microbiota of the cyclophosphamide-induced immunosuppressed mice

To recognize the potential medicinal value of the Dendrobium sonia, polysaccharide(DSP) was extracted, purified, and investigated for its immunomodulatory activity. In vitro, DSP was shown to enhance the viability(MTT assay) and phagocytosis of macrophages. In cyclophosphamide-induced immunosuppressed mice, DSP increased serum levels of TNF-α, IL-6 and IFN-γ(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), and ameliorated the imbalance of the community of gut microbiota as detected by 16 S ribosomal RNA gene sequencing. These results suggest that DSP might be beneficial for patients under immunosuppressed conditions.

石斛多糖通过抗氧化减轻关节炎小鼠的关节肿胀和炎症反应

目的:探究石斛多糖(Dendrobium sonia polysaccharide,DSP)对关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型小鼠的保护作用及其与氧化应激的关系。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、CIA组、L-DSP组、M-DSP组、H-DSP组。使用低、中、高浓度的DSP处理CIA模型小鼠。HE染色观察各组小鼠后肢组织病理改变,ELISA检测血清TNF-α、PGE_(2)、4-HNE水平,生化检测踝关节组织GSH、GSSG和NADP^(+)/NADPH水平,Western blot检测右肢踝关节组织IDH2蛋白表达水平。结果:相比对照组,CIA组小鼠后肢肿胀明显,滑膜增生、淋巴细胞浸润明显,TNF-α、PGE_(2)、4-HNE、GSSG、NADP^(+)/NADPH水平升高(P<0.05),GSH和IDH2 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);相比CIA组,DSP组小鼠后肢肿胀减轻,滑膜增生、淋巴细胞浸润减少,TNF-α、PGE_(2)、4-HNE、GSSG、NADP^(+)/NADPH水平降低(P<0.05),GSH和IDH2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05),且均呈DSP剂量依赖性。结论:DSP可通过减少氧化应激反应减轻CIA小鼠的关节肿胀程度和炎症反应。