外源硒对低温胁迫下铁皮石斛幼苗的缓解效应及其抗氧化生理特征变化

以3个不同品系的铁皮石斛幼苗为材料,分别于叶面喷施不同浓度的亚硒酸钠溶液处理,并结合人工控温生长条件下的低温胁迫试验,探讨外源硒对铁皮石斛幼苗耐冷性和恢复生长能力的影响作用及其与有关抗氧化生理指标间的关系。结果表明:(1)耐冷性表现较强的品系其幼苗在低温胁迫下的叶绿素、MDA及脯氨酸含量变化幅度相对小于耐冷性较弱的品系。(2)适量浓度(0.05～0.10mg.L-1)外源硒处理对低温胁迫下铁皮石斛幼苗叶绿素降解具有缓解效应,可降低MDA含量,增加脯氨酸含量,同时显著提高GSH-AsA循环活性,从而提高铁皮石斛幼苗的耐冷性,但过高浓度的外源硒处理(>0.20mg.L-1)则效果相反。(3)低温胁迫解除后,0.10mg.L-1的外源硒处理能引起铁皮石斛‘ZD-1’幼苗中AsA含量显著下降并促进其GSH合成积累,有效提升铁皮石斛幼苗在恢复生长期的综合抗氧化防御能力。

铁皮石斛的种子培养

以铁皮石斛成熟种子为外植体,研究原球茎的诱导、增殖、分化和生根的最佳培养条件。结果表明:1/2 MS基础培养基最适合铁皮石斛的种子培养,45 d时原球茎诱导率达到95%;原球茎增殖的最佳培养基为1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+20%马铃薯提取液,每代增殖16倍,原球茎形态好、变异少;原球茎团于1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.25 mg/L+20%马铃薯提取液的培养基上可诱导丛芽分化,于MS+NAA 0.5 mg/L+20%香蕉汁+活性炭5g/L的培养基上易于诱导不定根的形成,60 d后可形成健壮的完整小植株。

铁皮石斛快速繁殖和离体种质保存的研究

对铁皮石斛种子发芽、原球茎增殖、丛芽分化和壮苗培育进行了试验、观察和分析，研究了培养基、植物激素、光强和添加剂等对其分化和生长的影响。结果显示：种子在1／2MS＋蔗糖2％的培养基上，30d萌发95％以上。原球茎在1／2MS＋椰子汁25％＋蔗糖3％的培养基上，45～60d原球茎增殖速度可达1：10。丛芽分化较适宜的培养基为1／2MS＋BA2mg·L^-1＋NAA0．2mg·L^-1＋IBA0．1mg·L^-1＋蔗糖3％，45～60d芽丛增殖速度为1：4～5。试管苗在MS＋香蕉泥20％＋蔗糖2％培养基上，大约60d苗快速长高，茎粗壮且根系发达。离体保存材料可采用试管丛芽和原球茎两种方式，以保持其遗传多样性。保存方法是：在15℃左右条件下，保存离体材料，继代间隔期为12～18个月；也可以采用室温保存，在1/2MS＋蔗糖1％培养基上，继代间隔期可延长至10～12个月。

铁皮石斛原球茎的增殖培养研究

为探索最适宜铁皮石斛原球茎增殖的固体培养基配方,以获得高质量的组培苗,为工厂化育苗提供技术支撑,在相同的实验室培养条件下,把同一阶段的原球茎接种于不同激素比的4种培养基中,培养周期为60 d,每隔15 d取样检测1次,对不同生长状况的试验结果进行分析研究。结果表明,在基本培养基1/2 MS中加入浓度为1.0 mg/L的6-BA、0.5 mg/L的NAA和浓度为20%的马铃薯提取液进行固体培养,铁皮石斛原球茎的增殖效果好。

铁皮石斛原球茎与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性比较

【目的】比较铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性,为铁皮石斛组织培养物的应用提供依据。【方法】以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)为供试菌,用抑菌圈法测定2种铁皮石斛多糖对目标菌的抗菌活性;分别用羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O-·2)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)法和硫代巴比妥酸法(TBA法)结合分光光度法检测2种铁皮石斛多糖清除·OH、O-·2和DPPH·及抗脂质过氧化的能力,比较2种铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性。【结果】铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均具有显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖的抑菌效果比铁皮石斛原球茎多糖优;2种铁皮石斛多糖对·OH、O-·2和DPPH·均有极显著的清除作用,对小鼠肝组织脂质过氧化均有极显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖比铁皮石斛原球茎多糖效果更好,2种铁皮石斛多糖的抗菌及抗氧化活性与多糖质量均存在剂量效应关系。【结论】与野生铁皮石斛多糖相比,铁皮石斛原球茎多糖在抗菌、抗氧化能力方面虽存在一定差距,但仍具有进一步开发的价值。

几种因素对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响

通过探讨几种不同因素对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响,结果表明,MS、1/2MS、B5、N6和White培养基对原球茎的生长和多糖积累有不同的影响;其中,1/2MS和N6培养基适合原球茎生长和多糖积累。当氮源浓度为30-60mmol/L、NO3^-/NH4^＋分子比为40∶20、30∶30时,有利于原球茎生长和多糖积累。通过二次回归正交组合设计,优化拟合得到激素6-BA和NAA的正交回归模型;寻优定量结果表明,6-BA为1.25mg/L、NAA为0.52mg/L时,原球茎最大干重可达14.68g/L;当6-BA与NAA组合的最佳浓度配比为1.41mg/L、0.36mg/L时,原球茎最高多糖含量为274.2mg/g.DW。在以转速、接种量、pH3因素4水平的L16（43）正交试验中,对原球茎生长影响最大的因子是pH,其次是转速,接种量影响最小;当初始培养液pH为7.0、摇床转速为110r/min、接种量为30g.FW/L时,适合原球茎生长。各因子对原球茎多糖积累的影响程度依次为转速、pH、接种量,当初始培养液pH为5.0、摇床转速为110r/min、接种量为50g.FW/L时,有利于多糖积累。

铁皮石斛与大豆异黄酮提取物协同抗氧化作用评价

目的评价铁皮石斛水提物与大豆异黄酮提取物协同抗氧化作用。方法按照卫生部《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》的相关要求和金氏计算公式评价铁皮石斛水提物与大豆异黄酮提取物的协同抗氧化作用。结果铁皮石斛水提物、大豆异黄酮提取物及二者合用对正常小鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响均无显著差异(P>0.05);但可显著提高小鼠肝组织中SOD活力和降低丙二醛(MDA)含量,联合用药对小鼠肝脏SOD活性增效系数Q值为1.44。结论铁皮石斛水提物与大豆异黄酮提取物具有协同抗氧化作用。