影响DpCPV杀虫剂高产条件的研究

DpCPV杀虫剂的产量不仅受到气候、环境等因素的影响,而且严重受到生产工艺技术水平的制约.针对DpCPV杀虫剂生产过程中工艺技术问题,我们对马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株在室内、室外和林间大量增殖中的集虫虫质、接种浓度、频率、收获时间等及其相互间的关系进行了详细研究,得出在DpCPV杀虫剂生产过程中接种1×107CPB/mL病毒浓度为宜,接种虫龄以4～5龄虫为宜,收获病毒时间13～14d为宜.其室外单虫病毒产量平均可达到7.5×108CPB,比国内报道要高.研究结果对DpCPV杀虫剂的高产增殖有很强的指导意义.

直升机超低量喷洒DpCPV复合剂对马尾松毛虫防治效果及持效性研究

应用直升机超低量喷洒DpCPV复合剂对第一代马尾松毛虫进行大面积防治试验,同时对其防治效果进行跟踪调查。结果表明:直升机H125和R44两种机型对DpCPV复合剂喷洒效果良好,第一代马尾松毛虫平均校正虫口减退率为87.51%;同时DpCPV对马尾松毛虫具有持续防控效果,一次防治至少可控制3—4年不成灾。研究结果为今后大规模利用DpCPV复合剂进行马尾松毛虫灾害的预防和控制提供科学依据。

单引物法扩增马尾松毛虫CPV基因组第8片段及其序列分析

本文利用T4 RNA连接酶将5’-磷酸、3’-氨基修饰的引物1连接到马尾松毛虫质型多角体病毒第8片段dsRNA的3’-OH端。经逆转录、退火、补齐形成全长双链cDNA。使用单一的互补引物2进行PCR扩增。扩增产物克隆在pMDl8-T载体上。对重组子进行限制性内切酶分析及序列测定,结果表明,克隆片段全长330bp,S’端具有CPV-1型末端保守序列AGTAAA’端具有保守序列GTTAGCC。起始密码子从ATG位于38-40残基,终止密码子TAA位于1208～1210残基。推测S8片段编码390个氨基酸多肽。分子量为44kDa。与舞毒蛾质型多角体病(LdCPV)第8片段相比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为97％和98％。与家蚕质型多角体病毒(BmCPV)第8片段相比较,核苷酸和氨基酸的同源性分别为83％和85％。与人的呼肠孤病毒第8片段比较没有明显的同源性。

松毛虫CPV-W1984株的遗传稳定性

自 1 98 3年起应用松毛虫 CPV-W1 984在云南、四川、河南、广西等地防治文山松毛虫、德昌松毛虫、马尾松毛虫等主要害虫防治面积累计达 6.7万 hm2 ,效果显著。为了研究该病毒株在不同自然条件下不同的宿主松毛虫体内连续增殖后的遗传稳定性 ,作者电镜观察了三种病毒样品 ,其多角体形态大小一致 ,3 %和 5 % PAGE分析各样品的基因组RNA,结果表明该毒株在野外长期使用过程中 ,除保持稳定的毒力外 。

马尾松毛虫CPV基因组S7的序列分析及部分序列的原核表达

马尾松毛虫质多角体病毒(湖南株)基因组S7节段(AY180908)cDNA克隆及序列分析结果表明:S7由1501个碱基组成,编码由448个氨基酸组成的分子量为49.8 kDa的多肽P50。5′末端和3′末端具有5′-AGTAA-3′和5′-GTTAGCC-3′末端保守序列。该基因组与舞毒蛾质多角体病毒1型和家蚕质多角体病毒1型S7节段有很高的同源性,核苷酸序列同源性分别为97.2％和87.0％,氨基酸序列同源性分别为98.7％和92.8％。P50多肽与人型支原体的DnaK样蛋白在C-末端有相似性。本文报道了编码P50C259的cDNA序列的克隆并作了原核表达,当用1.0 mmol/L IPTG诱导2h,分子量约为37.3 kDa的融合蛋白在大肠杆菌BL21中得到大量表达。

文山松毛虫质型多角体病毒在Sf21细胞中离体增殖试验

研究了文山松毛虫质型多角体病毒 (DpCPV W )在Sf2 1细胞中的离体增殖行为 ,并进行了空斑试验 ,结果显示DpCPV W毒株能够在Sf2 1细胞中增殖 ,也能在Sf2 1细胞上形成空斑 ,并能产生形态正常的病毒多角体。在DpCPV W中加入基因工程增效蛋白 ,能显著增加病毒粒子对离体细胞的感染率 ,增幅达 145 %。生物测定表明 ,离体增殖的病毒多角体与虫体增殖的多角体的毒力相当。因此 ,Sf2 1细胞可以作为文山松毛虫CPV增殖行为研究的离体细胞系统 。

马尾松毛虫质型多角体病毒对棉铃虫生长发育的影响

为了弄清马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV)对棉铃虫生长发育的影响,利用带毒饲料饲喂棉铃虫幼虫的方法进行了试验观察,结果表明:马尾松毛虫质型多角体病毒对棉铃虫幼虫具有一定的侵染性;棉铃虫幼虫的死亡率随病毒浓度的升高而增大;蛹重和羽化率随病毒浓度的升高而减小;幼虫历期受到的影响不显著。利用马尾松毛虫质型多角体病毒防治棉铃虫具有较好的开发运用前景。

松毛虫质型多角体病毒林间增殖与提取技术初报

在林间喷施不同浓度的松毛虫质型多角体病毒(CPV)2.8×107PIB/ml、2.8×106PIB/ml、2.8×105PIB/ml15天后,调查结果表明:三种浓度的CPV感染马尾松毛虫后中肠发白率分别达到72.2%、69.2%、20.2%。林间给马尾松毛虫自然种群喷施2.8×106PIB/mlCPV增殖病毒,经济有效。开展了大规模CPV提取试验,提取的CPV制剂多角体达25.2×108PIB/g,病毒提取率6.8%。进行了CPV保存试验,试验表明低温有利于CPV保存。

甜菜夜蛾增殖马尾松毛虫质型多角体病毒防治应用研究

【目的】研究替代寄主甜菜夜蛾Spodopteraexigua增殖的Se-DpCPV及其复合剂对马尾松毛虫Dendrolimus punctatus的防治效果,为进一步研究马尾松毛虫林间大规模防治提供依据。【方法】在室内利用接种不同浓度病毒的松针饲喂马尾松毛虫幼虫,比较替代寄主增殖的Se-DpCPV和野生型Dp CPV毒力能力以及Se-DpCPV对不同龄期马尾松毛虫幼虫毒力水平;同时,在林间利用固定翼植保无人机喷洒不同浓度Dp CPV及其复合剂,测定各组对第1代马尾松毛虫幼虫的防治效果。【结果】甜菜夜蛾增殖的Se-DpCPV和野生型Dp CPV对马尾松毛虫幼虫具有同样的感染致病能力,对马尾松毛虫3龄幼虫半数致死浓度LC50分别为4.73×103PIB/m L和3.36×103PIB/m L,二者毒力差异性不显著(P=0.107>0.05)。Se-DpCPV对马尾松毛虫2-5龄各龄幼虫半数致死浓度LC50分别为2.03×103、4.73×103、1.05×104、3.85×104 PIB/mL。当Se-DpCPV林间用量分别为375亿、750亿和1500亿PIB/hm2时,Se-DpCPV+3.2%阿维菌素复合剂防治组马尾松毛虫校正死亡率为86.05%、90.70%和94.19%,对马尾松毛虫的林间防治效果显著高于Se-DpCPV+25%灭幼脲复合剂(66.28%、72.09%和79.07%)和Se-DpCPV(59.30%、63.95%和70.93%)。活虫Dp CPV感染率最低为80.00%,最高可达93.33%。Se-DpCPV与3.2%阿维菌素、25%灭幼脲复配,比单独使用两种药剂防治效果至少分别提高17.45%和33.72%。【结论】在林间马尾松毛虫大暴发时,在马尾松毛虫3龄以下幼虫期,使用Dp CPV+3.2%阿维菌素复合剂(750亿PIB/hm2,7.5 mL/hm2)在短时间内迅速降低虫口基数,同时起到持续控制的效果。