人牙髓细胞与PLGA微球材料复合构建后的形态学观察

目的:观察不同浓度的人牙髓细胞(HDPCs)在可注射聚乳酸/羟基乙酸(PLGA)微球支架上的黏附生长,通过形态学观察进一步探讨PLGA微球作为组织工程支架材料用于牙髓组织再生的可行性。方法:取第4代HDPCs以3种不同浓度(2×10^(5)细胞/ml、1×10^(5)细胞/ml、5×10^(4)细胞/ml)接种于PLGA微球,在不同的时间点应用倒置显微镜下观察细胞与材料复合生长的情况,体外培养8周后,终止培养,常规固定、石蜡包埋,组织学切片,分别应用免疫组织化学染色检测牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白(DMP-1)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)三种蛋白表达情况,并对阳性率进行统计。同时应用扫描电镜观察超微结构。结果:通过显微镜特异性观察细胞在材料表面的黏附状况,结果显示随着时间的推移细胞的生长状况整体较为良好。免疫组化结果显示牙髓组织与HDPCs-微球复合体三种蛋白表达均为阳性,将细胞最高浓度组三种蛋白的阳性率进行统计学分析,结果显示无统计学差异(P>0.05)。在培养8周之后通过显微镜观察细胞和微球之间的融合度较高,但微球局部有凹陷。通过形态学观察细胞与PLGA微球材料复合生长良好,结合前期定量检测结果显示PLGA微球有利于牙髓细胞黏附生长。结论:支架材料PLGA微球能够应用在组织工程化牙髓—牙本质复合体的构建,但下一步需要对微球材料进行改性,希望能够更加全面的将其应用于组织工程牙髓—牙本质复合体的构建之中,这也在临床中有极其重要的应用价值和实践意义。

大鼠切牙牙髓复合体的透射电镜研究

用透射电镜观察了大鼠切牙牙髓复合体的超微结构。前牙本质和牙本质的胶原原纤维分粗、细两种：从前牙本质至牙本质；从牙本质小管周围至其远方，纤维由细变粗、由稀至密。胶原原纤维聚集成束，呈纵行、横行和矢状相互交织。前牙本质和牙本质内有许多牙本质小管，内衬鞘样界膜。成牙本质细胞呈长梨形或长纺锤形，核位于基底部，线粒体、粗面内质网、高尔基复合体等位于胞浆的核上区。该细胞突起伸入整个牙本质小管内，含有微丝、微管和小泡等。相邻成牙本质细胞间的牙本质侧有连接复合体相连，其他区域则为桥粒。

牙髓牙本质复合体纤维粘连蛋白的免疫组织化学研究与定量分析

目的 研究纤维粘连蛋白在牙髓牙本质复合体内的表达 ,探讨其分布与功能间的关系。 方法 免疫组织化学染色与图像定量分析。结果 纤维粘连蛋白免疫反应 (- IR)普遍存在于牙髓、前期牙本质和成熟牙本质的牙本质小管与成牙本质细胞突起 ,以成牙本质细胞层 ,牙髓血管与神经周围最为丰富。冠髓和冠部牙本质纤维粘连蛋白的积分光密度分别为 :0 .49± 0 .33,0 .5 0± 0 .2 9;线密度分别为 :38.44± 2 0 .7,19.34± 18.72 ;体密度分别为 :2 4.5 6± 10 .8,44 .5 2± 2 8.5。 结论 纤维粘连蛋白 - IR不仅见于牙髓与前期牙本质 ,而且也见于成熟牙本质的牙本质小管与成牙质细胞突起 ,它对维持牙髓牙本质复合体各结构的正常位置 。

大鼠牙髓干细胞的培养和鉴定

目的 :分离培养大鼠牙髓干细胞并对其进行生物学鉴定。方法 :采用单细胞克隆的方法进行大鼠牙髓干细胞的分离培养 ,并将达到一定数量级的牙髓干细胞与HA -TCP支架材料进行复合 ,移植入裸鼠背部皮下 ,8周后取材进行组织学鉴定。取鉴定成功的细胞株复苏进行细胞生物学特性研究 ,同时进行成牙本质细胞诱导并进行DSP、DMP1免疫组织化学染色。结果 :单细胞来源的细胞克隆 (RDPSC2B2 )移植物组织切片可见牙本质牙髓复合体样结构。复苏细胞形态为梭形 ,细胞密集时形态多样 ,为卵圆形或多角形 ,细胞群体倍增时间为 5 8.3h ,克隆形成率为 1.33% ,免疫组化染色DSP、DMP1均为阴性 ,经矿化液诱导后部分细胞胞浆DSP及DMP1出现阳性染色。结论

釉质龋牙髓损伤反应的观察

目的观察釉质龋阶段牙髓的组织病理学改变,并探讨牙髓损伤与龋损活动性的关系。方法选用拔出的患釉质龋的第三磨牙22颗(其中急性龋12颗,慢性龋10颗),无龋第三磨牙10颗作为对照,脱钙、切片、常规染色。光镜下观察釉质龋损下牙髓的组织病理改变。用多功能图象分析仪测量此区内成牙本质细胞的浆核面积之比(简称浆核比)、数目及前期牙本质的面积,血管数目与横截面积,炎症细胞数目。结果慢性的釉质龋未见明显的病理改变。急性釉质龋牙髓的病理变化有:前期牙本质变窄,成牙本质细胞排列紊乱,细胞体积缩小,胞核向前期牙本质区移位;少细胞层见少量成纤维细胞与炎症细胞侵入;多细胞层可见血管轻度扩张,成纤维细胞增殖。少量炎症细胞主要为淋巴细胞和单核细胞。结论釉质龋时牙髓可以出现成牙本质细胞的损伤性变化,而这种变化与龋损活动性相关。

成体干细胞在组织工程化牙本质牙髓复合体中的应用研究与展望

牙髓干细胞(dentalpucpstemcells,DPSCs)是一种成体干细胞。有关成体干细胞的研究进展,尤其是骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalstemcells,BMSSCs)的研究,为牙髓干细胞的研究提供了可以借鉴的思路和方法。DPSCs也有相对特异的识别途径和特点,其中重要的特征之一是一定条件下能形成牙本质牙髓复合体。这将为其应用于组织工程中重建牙本质牙髓复合体,展示了巨大的优越性和可行性,也为其在牙髓生理、病理、牙髓病的生物治疗方面的研究提供了重要的应用价值。

人前磨牙牙髓牙本质复合体层粘连蛋白的免疫组织化学研究

目的 研究层粘连蛋白在牙髓牙本质复合体内的表达 ,探讨其分布与功能的关系。 方法 收集不同年龄新鲜健康人前磨牙 6 0颗 ,固定 ,脱钙 ,石蜡包埋 ,层粘连蛋白免疫组织化学染色。 结果 层粘连蛋白免疫反应性 ( IR)普遍存在于牙髓、前期牙本质和成熟牙本质小管与成牙本质细胞突起之间 ,以牙髓的神经与血管周围最为丰富 ,冠髓较根髓密集。 结论 层粘连蛋白 IR不仅见于牙髓与前期牙本质 ,而且也见于成熟牙本质 ,它对支持、固定牙髓牙本质复合体各结构的正常位置。

人前磨牙牙髓牙本质复合体Ⅰ型和Ⅲ型胶原的来源及分布

目的 探讨牙髓牙本质复合体Ⅰ型和Ⅲ型胶原的来源与分布。 方法 收集人前磨牙 ,固定、脱钙、石蜡包埋、切片、用SABC法进行免疫组织化学染色 ,显示Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白。 结果 Ⅰ型胶原在牙髓内十分丰富 ,聚集成束 ,根髓中致密 ,以粗纤维束沿神经血管纵行分布 ;冠髓中纤维束较细、大量分支、变细 ,随意分布 ,交织成疏松的纤维网。从根尖至牙冠 ,从牙髓中央至周边 ,纤维束由粗变细 ,沿途分支 ,大部分终止于牙髓基质 ,少部分经成牙本质细胞间进入前期牙本质。此外成牙本质细胞、成纤维细胞与血管内皮细胞亦见Ⅰ型胶原蛋白表达。前期牙本质Ⅰ型胶原染色深 ,与牙髓基质和成牙本质细胞突起内者相延续 ,成熟牙本质近髓 1 3可见Ⅰ型胶原阳性免疫反应物。Ⅲ型胶原在牙髓牙本质复合体的表达基本与Ⅰ型胶原类似 ,仅数量和密度略少。 结论 牙髓牙本质复合体内的Ⅰ型和Ⅲ型胶原可能由成牙本质细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞产生 ;不仅牙髓内存在Ⅰ型和Ⅲ型胶原 ,而且前期牙本质也有Ⅰ型和Ⅲ型胶原。

应用SGBG/PHBV复合材料构建牙本质牙髓复合体样结构的初步研究

目的初步研究溶胶-凝胶生物活性玻璃(SGBG)/聚羟基烷酸酯(PHBV)与猪牙乳头细胞的生物相容性,为构建牙本质牙髓复合体样结构的组织工程支架材料提供选择依据。方法通过体外细胞培养实验和扫描电镜观察细胞在材料表面生长增殖的情况。结果细胞在SGBG/PHBV三维支架上贴附及生长良好。结论 SGBG/PHBV作为支架材料有望应用于牙本质牙髓复合体样结构的组织工程修复。

人前磨牙牙髓牙本质复合体中CGRP阳性神经纤维的研究

目的 :研究CGRP在牙髓牙本质复合体中的表达 ,探讨牙痛、牙过敏机理。方法 :收集人前磨牙 ,石蜡包埋切片 ,免疫组化 ,图象定量分析。结果 :CGRP阳性神经纤维分布于牙髓、前期牙本质 ,但不到达成熟牙本质 ,部分分支围绕血管 ,部分分支终止于牙髓基质 ,或成牙本质细胞层 ,或前期牙本质。CGRP阳性神经纤维在冠髓的积分光密度为 12 .39± 1.6 6 ,体密度为 0 .0 182± 0 .0 10 6 ,线密度为 0 .0 0 46± 0 .0 0 2 6 ,在冠部前期牙本质的积分光密度为13 .0 7± 1.74,线段长度为 (19.42± 8.43)mm。结论 :CGRP阳性神经纤维分布于牙髓、前期牙本质 ,未达成熟牙本质 ,牙外因素引起的牙痛可能与间接刺激神经有关 ,牙内因素引起的牙痛可能与直接刺激神经有关。

人前磨牙牙髓牙本质复合体的增龄变化

目的 :研究人前磨牙牙髓牙本质复合体的增龄性变化 ,探讨牙衰老和老年牙病的形态学基础。方法 :收集健康人前磨牙 ,按年龄分组 ,然后脱钙 ,石蜡包埋 ,切片 ,HE染色 ,光镜观察与图像定量分析。结果 :随年龄增加 ,牙髓牙本质复合体钙盐大量沉积 ,牙髓体积缩小 ,牙髓内细胞、血管、牙本质小管和牙髓体密度减少 ;牙髓内结缔组织纤维与细胞外基质体密度增加 ,各年龄组间具有显著性差异。结论 :随年龄增加 ,牙髓牙本质复合体的生物活性成分减少 ,非生物活性成分增加。

基于牙本质-牙髓复合体增龄性变化推断年龄的研究进展

年龄推断是法医学实践中的热点问题,同时也是难点问题。牙齿是人体最坚硬的器官,在体外保存时间较长。随着年龄增长,继发性牙本质逐渐生成,髓腔体积不断减小,法医牙科学家提出通过牙本质-牙髓复合体的增龄性变化来推断年龄。近年来该方法在法医学年龄推断中得到了广泛应用。随着影像学技术的发展,法医牙科学家提出了多种方法评估牙本质-牙髓复合体增龄性变化从而推断年龄,不同测量方法各有优缺点,这要求法医工作者需根据实际情况对多种方法综合运用,提高年龄推断的准确性。本文对国内外利用牙本质-牙髓复合体进行年龄推断的研究现状进行综述,以期对相关领域研究提供参考。

牙髓干细胞修复再生同质异体大鼠牙髓牙本质复合体的研究

目的:观察第3代同质异体牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSCs)定植于冠髓被摘除的大鼠髓腔后,再生修复牙髓牙本质复合体的能力。方法:18只SD大鼠随机分为实验组和对照组,两组均全麻下摘除大鼠上颌双侧第一磨牙冠髓,实验组同期髓腔定植体外培养的同质异体大鼠牙髓干细胞,对照组冠髓摘除后不进行任何处理,术后均使用光固化树脂充填封闭髓腔。两组动物均于术后2、4、6周处死,取其上颌骨进行大体观察,X线观察,组织学观察,牙本质的厚度测量。结果:实验组4周时,肉眼可见牙髓充血减少;6周时,X线显示牙本质厚度增加,根尖孔闭合;6周时,光镜下显示明显新生牙本质形成,成牙本质细胞栅栏状排列;牙本质厚度测量结果显示,实验组牙本质厚度2周时增厚,4周增厚更明显,持续至6周,优于对照组(P<0.05)。结论:牙髓干细胞髓腔内定植,可以促进牙髓牙本质复合体修复再生,具有潜在的临床应用价值。

人根尖乳头干细胞生成牙髓牙本质复合体的实验研究

目的应用组织工程方法，探讨人根尖乳头干细胞（SCAP）进行牙髓牙本质复合体再生的可能性。方法从牙根未发育完全的健康阻生智齿中分离牙乳头，用组织贴块法培养SCAP。细胞分别在成骨诱导液中培养3周及普通培养基中培养60d后，用茜素红检测钙结节形成情况，免疫荧光法和RT-PC检测成骨细胞标志物碱性磷酸酶（ALP）、骨涎蛋白（BSP）、骨钙素（0c）和牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。选取5～6周雌性裸鼠6只，将SCAP与羟磷灰石膦酸三钙（H～TcP）复合培养作为实验组，仅有HA／TCP作为对照组，分别植入同一只裸鼠背部皮下，左右侧各1个。8N后移植物行HE染色和免疫组化染色观察新生组织情况。结果SCAP在体外经成骨诱导3周及普通培养基培养60d后，茜素红染色阳性，且表达成骨细胞标志物ALP、BSP、OC和DSP。实验组移植物8N后可见牙髓牙本质样结构形成，且紧靠牙本质样结构内侧的细胞DSP阳性表达，而对照组未见任何硬组织形成。结论SCAP可应用于组织工程，进行牙髓牙本质复合体再生。

冠修复材料导热性对基牙牙髓健康影响的研究

目的研究金合金、金合金烤瓷、氧化锆全瓷等修复材料的导热性对牙髓健康的影响。方法 (1)实验室测量金合金、金合金烤瓷、氧化锆全瓷、自体牙、树脂粘接剂的导热系数;(2)随访金合金烤瓷冠、金合金铸造冠(颊侧烤瓷)和氧化锆全瓷冠修复的158颗活髓牙2年;对比158颗自体邻牙,统计出现牙髓炎、根尖周炎的牙数,并与几种材料的导热系数对照。结果树脂粘接后,86%金合金导热系数37.89 W/(m·K),21颗活髓基牙出现3例牙髓炎; 86%金合金烤瓷导热系数0.85 W/(m·K),58颗活髓基牙出现1例牙髓炎;氧化锆全瓷导热系数0.82 W/(m·K),79颗活髓基牙无牙髓炎、根尖周炎发生;天然牙导热系数0.66 W/(m·K),158颗活髓基牙无牙髓炎、根尖周炎发生; 86%金合金铸造冠修复的基牙牙髓炎、根尖周炎阳性率远远高于其他几种低导热系数冠修复材料基牙(P<0.01)。结论冠修复材料的自身导热性能够影响基牙牙髓健康,如过高会对基牙牙髓健康不利。建议把导热系数最接近天然牙的氧化锆全瓷+树脂粘接剂组合作为冠修复材料的首选。

牙髓切断术与冠髓再生的研究进展

冠髓再生是一种以干细胞和支架结构代替盖髓剂,并将其置于牙髓切断术后的健康根髓组织断面上,最终使牙冠部分的牙髓⁃牙本质复合体得以再生的方法。本文以牙髓切断术为背景,就冠髓再生的意义、生理学基础及其应用与挑战作一综述,以期为牙髓再生相关研究提供新思路。文献复习结果表明,将传统的牙髓切断术与干细胞生物学和组织工程学相结合,利用健康根髓的组织修复潜能进行冠髓再生,能有效地促进牙本质和部分牙髓再生。近年随着牙髓再生相关研究的深入,其面临的诸多挑战也逐渐显露,不仅需要筛选出能够安全有效地促进牙髓干细胞增殖分化的处理方式,还要继续探索适用于髓室结构、功能多元化的支架材料。

体外评估hDPCs-PRF复合体内hDPCs的迁移行为

目的:在前期成功构建人牙髓细胞(hDPCs)—富血小板纤维蛋白(PRF)复合体基础上,观察hDPCs在复合体中的迁移能力。方法:采用组织块法分离培养hDPCs,制备hDPCs-PRF复合体,培养7 d、14 d、21 d后行苏木精—伊红(HE)染色,观察hDPCs的形态及迁移行为。结果:初期hDPCs-PRF复合体中,白细胞、牙髓细胞主要存在于白膜层中;随着培养时间的延长,白膜层逐渐溶解消失,白细胞及牙髓细胞沿着复合体边缘游走,hDPCs由原来的椭圆形变成长梭形。培养21 d后,显微镜下可见hDPCs-PRF复合体培养基中大量hDPCs的存在,大部分细胞生长状况良好。结论:hDPC-PRF复合体可缓慢降解并同步释放复合体内的牙髓细胞;hDPCs-PRF复合体中释放的牙髓细胞仍具有继续增殖分化的潜力。

猪牙源性间充质与胶原类材料复合移植的实验研究

目的:探讨经体外培养的出生后的猪牙源性间充质细胞成牙能力。方法:将体外培养第4代的猪牙胚细胞接种到胶原凝胶基质中,体外培养3 d后进行裸鼠体内移植,6 W后取材观察。结果:猪牙胚细胞原代培养过程中可见上皮样细胞与成纤维样细胞混杂存在,传代3次后上皮样细胞消失。细胞-胶原基质复合物取材结果显示细胞聚集的区域可见牙本质-牙髓复合体样结构。结论:经体外传代培养后未经体外诱导的牙胚细胞接种到胶原凝胶基质所构建的组织工程牙齿有牙本质-牙髓复合体样结构形成,说明牙胚细胞经体外培养后其所获得的发育信息仍可保持,是研究牙齿发育构建模型及组织工程牙齿的理想的种子细胞。

人前磨牙牙髓牙本质复合体层粘连蛋白受体的免疫组织化学研究

目的 研究层粘连蛋白受体在牙髓牙本质复合体内的表达 ,探讨其分布与功能的关系。方法 收集新鲜健康人前磨牙 60个 ,固定 ,脱钙 ,石蜡包埋 ,层粘连蛋白受体SABC免疫组织化学染色。结果 层粘连蛋白受体免疫反应物 (LNR IR)普遍存在于牙髓牙本质复合体的神经纤维膜、血管内皮细胞、成牙本质细胞及成纤维细胞上 ,以牙髓的神经纤维膜、血管内皮细胞最为丰富。结论 层粘连蛋白受体一般见于牙髓牙本质复合体的各种细胞膜上 ,它与层粘连蛋白一起在支持、固定牙髓牙本质复合体各结构的正常位置。

牙髓组织工程支架材料研究进展

牙髓坏死可导致牙齿脆性增加,易折裂,并阻碍年轻恒牙牙根持续发育。因此牙髓再生治疗具有重要的临床意义。由于牙髓组织具有复杂、多变的解剖结构且包含神经、血管等多种组织成分,牙髓再生面临诸多挑战。回顾近年来应用组织工程方法探索牙髓组织构建与移植的基础研究和临床应用研究文献,重点讨论适宜支架材料的选择与牙髓组织构建方法。文中述及用于构建牙髓组织的支架材料包括海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸,胶原蛋白、明胶、纤维蛋白、丝素蛋白、多肽和自组装多肽、聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物等,简要介绍了其功能特点以及添加生物基质提取物、生长因子等组成的功能修饰或不同功能互补性材料组成的功能改进。结合临床可操作性要求,进一步讨论了由亲水性复合材料或经亲水基团修饰材料制备可注射水凝胶支架材料的组成设计和功能特点,以期为今后牙髓再生研究探索提供一定的借鉴。