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题名屋尘螨Derp23的克隆表达、纯化及过敏原性鉴定
被引量:1
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作者
周绚琳
袁如意
季树宇
杨礼腾
刘志刚
刘晓宇
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机构
深圳大学过敏反应与免疫学研究所
深圳大学第三附属医院变态反应科
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出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第8期939-942,946,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(No.31729002、U1801286、81971514)
广州市科学研究计划重点项目(No.201804020043)
+3 种基金
深圳市孔雀计划团队项目(No.KQTD20170331145453160)
深圳市科技计划国际科技合作项目(No.GJHZ2018041819053)
南山区"领航团队"支持计划项目(No.LHTD20180007)
呼吸疾病国家重点实验室开放课题项目(No.SKLRD-OP-201909)。
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文摘
目的克隆屋尘螨Der p23基因,表达和纯化目的蛋白并进行过敏原性分析。方法提取屋尘螨总RNA,对Der p23基因进行RT-PCR(逆转录酶聚合酶链反应)扩增,经限制性内切酶双酶切,酶切产物与表达载体pET-32a(+)重组,转化入感受态大肠埃希菌溶液中。挑取阳性单克隆菌落进行扩大培养,提取目的蛋白并进行Ni2+柱亲和层析纯化,通过Western blot检测其过敏原性。通过BLAST、MEGA、SWISS-MODEL分析重组蛋白Der p23的同源性和三级结构。结果 Der p23基因片段大小约为282bp。大量表达后,SDS-PAGE电泳显示,纯化的重组蛋白Der p23的分子质量单位约为32ku,且以包涵体的形式存在于沉淀物中。Western blot显示该重组蛋白可与尘螨过敏患者血清发生反应,表明其具有过敏原性。BLAST和MEGA分析,Der p23与Der f23的氨基酸序列同源性为77%。Der p23蛋白二级结构主要有β折叠和转角结构,从中预测出5个抗原表位。结论克隆表达和纯化获得了具有过敏原性的Der p23蛋白,为尘螨过敏疫苗和诊断试剂的研制奠定了理论基础。
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关键词
屋尘螨
der
p23基因
表达
纯化
过敏原性
生物信息学
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Keywords
house dust mite
der p23 gene
expression
purification
allergenicity
bioinformatics
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分类号
R384.4
[医药卫生—医学寄生虫学]
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