粉尘螨主要变应原基因Der f1和Der f3改组的研究

目的:探索粉尘螨变应原基因Der f1和Der f3改组条件,以期获得粉尘螨变应原融合突变基因。方法:RT-PCR方法扩增粉尘螨变应原Der f 1和Der f3基因,用DnaseⅠ分别酶解Der f 1和Der f3基因10、15、20、25、30 min;酶解相同时间的Der f1和Der f3基因片段两两混合,采用DNAshuffling技术对粉尘螨变应原Der f1和Der f3基因进行重组,琼脂糖凝胶电泳检测重组子。结果:以Der f 2 F和Der f2 R为引物在酶切10、15、20、25、30min均可扩增出清晰条带;以Der f1 F和Der f1 R、Der f1 F和Der f2 R、Der f2 F和Der f1 R为引物在酶切10、15、20、25、30min的模板中均无条带出现;而其他引物组合则在不同酶切时间的模板中均出现条带。结论:通过多种条件的组合,可获得多个粉尘螨变应原基因Der f1和Der f3间的融合基因,为大规模制备高效、低价的哮喘疫苗奠定了基础。

粉尘螨主要变应原基因Der f2和Der f3基因改组的优化

目的优化粉尘螨变应原Derf2和Derf3基因改组条件,以期获得粉尘螨变应原融合突变基因。方法 RT-PCR方法扩增粉尘螨变应原Derf2和Derf3基因,用DnaseⅠ分别酶解Derf2和Derf3基因10、15、20、25、30min;酶解相同时间的Derf2和Derf3基因两两混合,采用DNA shuffling技术对粉尘螨变应原Derf2和Derf3基因进行重组,电泳检测重组子。结果以Derf1F和Derf1 R、Derf2 F和Derf2 R为引物分别在酶切10min、15min、20min、25min均可扩增出清晰条带;以Derf2 F和Der f3 R为引物在酶切10min、15min和30min的模板中亦出现PCR片段。结论通过多种条件的组合,可获得多个粉尘螨变应原Derf2和Derf3基因间的融合基因,为大规模制备高效,低价的哮喘疫苗奠定基础。