基于JAK2/STAT3信号通路探讨黄芪-山茱萸对高糖诱导足细胞损伤的保护作用

目的:探究黄芪-山茱萸对高糖诱导肾足细胞损伤的保护作用及机制。方法:CCK8法检测黄芪-山茱萸(0、175、350、700、1400、2800 mg/L)对足细胞(MPC-5)活性的影响。30 mmol/L葡萄糖诱导MPC-5细胞损伤,350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸进行干预;ELISA测定MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平,流式细胞术测定细胞凋亡,免疫荧光染色测定MPC-5肾病蛋白(nephrin)、足细胞素(podocin)表达,qRT-PCR测定MPC-5细胞nephrin、podocin、结蛋白(desmin)、Wilm瘤基因1(WT-1)基因表达,Western blot测定细胞Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路磷酸化表达。结果:2800 mg/L黄芪-山茱萸可显著抑制MPC-5细胞活性(P<0.01)。MPC-5细胞经高糖诱导后,IL-6、IL-1β水平升高,凋亡增加,nephrin、podocin、WT-1表达降低,desmin表达升高,JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达增加(P<0.01)。350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸可抑制高糖诱导MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平升高和凋亡,增强nephrin、podocin、WT-1表达,降低desmin表达,抑制JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达(P<0.05)。结论:黄芪-山茱萸可减轻高糖诱导足细胞炎症和凋亡损伤,其机制与抑制JAK2/STAT3通路磷酸化有关。

肾康丸对早期糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的观察肾康丸对糖尿病肾病(DN)大鼠肾小球足细胞形态及desmin、podocin表达的影响,探讨肾康丸对DN的肾保护作用机制。方法应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为4组:DN模型对照组、肾康丸组、厄贝沙坦组、肾康丸和厄贝沙坦合用组;另设正常对照组。各组分别干预8周后,观察24h尿蛋白定量变化,利用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组化技术观察足细胞desmin、podocin表达变化。结果应用肾康丸、厄贝沙坦干预后,DN大鼠24h尿蛋白定量明显减少,肾脏病理改变显著减轻,足细胞desmin表达明显减少、podocin表达明显增加。结论通过上调足细胞podocin的表达,使podocin的合成增加,从而减轻足细胞的损伤、维护足细胞结构和功能的完整性,可能是肾康丸对DN的肾保护作用机制之一。

雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的作用

目的观察哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)信号抑制剂雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞的作用。方法 SD大鼠经链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病模型。建模成功后,将糖尿病SD大鼠随机分为雷帕霉素治疗组(建模后第12周开始用雷帕霉素治疗4周,n=6)、糖尿病肾病组(建模后第12周开始用等量生理盐水灌胃4周,n=6),以未建模SD大鼠作为正常对照组(n=6)。BCA法检测各组大鼠24 h尿总蛋白水平;光学显微镜下观察大鼠肾脏组织学改变,透射电子显微镜观察足细胞足突形态并测量足突宽度;采用免疫荧光染色激光共聚焦显微镜及Western blotting法检测足细胞损伤标志蛋白desmin和足细胞标志蛋白podocin的表达。结果与糖尿病肾病组比较,雷帕霉素治疗组大鼠24 h尿总蛋白排泄量显著减少(P<0.05);肾小球系膜基质积聚缓解,炎症细胞浸润轻微,肾小球体积小且足细胞宽度窄(P<0.05);足细胞desmin表达减少,podocin表达增加。结论雷帕霉素可减轻糖尿病肾病大鼠的蛋白尿症状,这可能与雷帕霉素对足细胞的保护作用有关。

环磷酰胺对糖尿病肾病大鼠蛋白尿的影响及其作用机制

目的:研究环磷酰胺(CTX)能否减轻2型糖尿病肾病大鼠蛋白尿及其作用机制。方法:采用高糖高脂饮食+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法成功建立2型糖尿病肾病(DKD)大鼠模型。将其分为DKD组和CTX组,CTX组药物干预4周后对大鼠肾脏组织进行常规病理染色及电镜观察以及生化指标、足细胞标志性蛋白和炎症指标检测。结果:(1)2型糖尿病肾病的大鼠模型成模率82.35%;(2)与对照组相比,DKD组大鼠尿蛋白持续增多,Podocin减少,Desmin增多,CTX组居中,三组对比P<0.01;(3)糖尿病肾病早期的大鼠即能观察到肾小管间质炎症及纤维化因子异常。DKD组及CTX组的TGF-β1、CTGF、MCP-1均高于对照组(DKD组P<0.01;CTX组P<0.05),DKD组最高,与CTX组相比P<0.05。结论:环磷酰胺能够降低2型糖尿病肾病大鼠的尿蛋白,延缓肾脏病进展,并推测这与其稳定足细胞支架蛋白Podocin,减少足细胞转分化有关。

从自噬机制探讨加味黄芪赤风汤含药血清对阿霉素诱导的肾小球足细胞损伤的保护作用

目的研究加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞自噬及足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及desmin表达的影响。方法采用体外培养小鼠肾小球足细胞、以阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的方法制作足细胞损伤模型。随机分为空白组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组)。采用Western blot法检测各组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、desmin和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平,透射电镜下观察各组足细胞自噬超微结构变化。结果 (1)与空白组比较,模型组nephrin、podocin表达明显下降(P<0.01),desmin表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin表达明显升高(P均<0.01),desmin表达明显下降(P均<0.01),中药低剂量组无明显改善(P>0.05)。(2)模型组较空白组自噬小体数量明显增多,体积增大,细胞器减少;中药高、中剂量组及替米沙坦组较模型组自噬超微结构均有不同程度改善,而中药低剂量组无明显改变。(3)与空白组比较,模型组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显上升(P<0.01);与模型组比较,中药高、中剂量及替米沙坦组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显下降(P<0.01),中药低剂量组无明显下降(P>0.05)。结论加味黄芪赤风汤对ADR诱导的足细胞损伤具有保护作用,调节足细胞自噬活性可能是其足细胞保护作用的内在机制之一。