基于Nrf2-Keap1通路探讨小槐花不同提取物对CCl_(4)所致肝损伤的保护机制

目的探讨小槐花不同提取物对CCl_(4)所致肝损伤的保护机制。方法采用0.5%CCl_(4)花生油溶液构建小鼠肝损伤模型。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察肝脏病变;试剂盒检测丙氨酸转氨酶(alanine amin-otransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测肝脏组织中核因子促红细胞生成素2相关因子2(nuclear factor erythropoietin-2-related factor 2,Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like epichlorohydrin related protein-1,Keap1)、血红素加氧酶1(heme oxyge-nase 1,HO-1)蛋白的相对表达量。结果与模型组相比,小槐花水提物与醇提物中、高剂量组能显著降低肝重指数以及血清中ALT、AST水平(P<0.05,P<0.01)。小槐花水提物与醇提物中、高剂量组小鼠肝组织匀浆MDA、TNF-α、IL-6、ROS含量显著降低(P<0.05,P<0.01),SOD、CAT酶活性显著升高(P<0.05,P<0.01),GSH含量显著升高(P<0.05,P<0.01)。其中小槐花水提物作用效果优于醇提物。小槐花水提物高剂量组显著上调Nrf2、HO-1,下调Keap1蛋白的表达(P<0.05)。结论小槐花不同提取物对CCl_(4)肝损伤小鼠具有保护作用,水提物保肝效果优于醇提物,作用机制与激活Nrf2-Keap1通路,减轻氧化应激反应有关。

民族药小槐花质量标志物候选成分的研究

目的:开展对豆科山蚂蝗属药用植物小槐花(Desmodium caudatum(Thunb.)DC.)叶的化学成分研究,为小槐花质量标准体系的建立提供物质基础。方法:将小槐花叶经70%乙醇提取后,综合运用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱等方法分离和纯化小槐花叶的化学成分,根据所得单体理化性质及波谱数据鉴定各化合物结构。结果:从小槐花叶中分离鉴定了13个化合物:清缸酒酚(1)、柠檬酚(2)、8-异戊烯基山柰酚(3)、二氢山柰酚(4)、neophellamuretin(5)、异柠檬酚(6)、槲皮素(7)、山柰酚(8)、牡荆素(9)、当药黄素(10)、大豆皂醇B(11)、黄槿酮A(12)、黄槿酮D (13),其中化合物7、8、12和13为小槐花中各药用部位均含有的成分。结论:化合物7、8、12和13可作为小槐花的候选质控成分。

响应面法优化小槐花总黄酮提取工艺及抗氧化活性

采用响应面设计优化小槐花[Desmodium caudatum(Thunb.)DC.]的总黄酮提取工艺,在单因素试验结果的基础上,以提取温度、乙醇体积分数、料液比3个因素为影响因子,采用Box-Benhken响应面法优化提取工艺参数,并计算其DPPH自由基清除率和还原能力等抗氧化活性。结果表明,小槐花总黄酮最佳提取工艺的条件为提取温度60℃、乙醇体积分数40%、料液比1∶45(g∶mL)、超声时间108 min,该条件下小槐花的总黄酮含量为31.990 mg/g,与预测值31.254 mg/g相近,RSD为1.64%。在测定的质量浓度中,小槐花总黄酮对DPPH自由基有较好的清除能力,其还原能力随总黄酮浓度的增大而增强。该方法可靠适用,响应面法优化提取工艺参数可用于小槐花总黄酮的提取和体外抗氧化活性测定。

壮瑶药小槐花化学成分研究

目的：研究壮瑶药小槐花的化学成分。方法：采用硅胶柱层析及Sephadex LH-20柱色谱、重结晶等方法分离和纯化小槐花的化学成分,综合运用红外光谱、质谱、核磁共振等技术和理化性质鉴定化合物结构。结果：从中分离鉴定了12个化合物,分别为：三十二烷酸（1）、三十四烷酸（2）、豆甾醇（3）、桦木醇（4）、柠檬酚（5）、异柠檬酚（6）、山柰酚（7）、原儿茶酸（8）、槐果碱（9）、苦参碱（10）、N,N-二甲基色胺（11）、5-羟基-N,N-二甲基色胺（12）。结论：其中,化合物1、2、4、8~12为首次从该植物中分离得到。

小槐花中的脂溶性成分分析

采用硅胶柱层析、甲酯化和气相色谱-质谱-计算机联用技术对小槐花的脂溶性成分进行分析和鉴定。结果分离出45个组分,确认了其中的29个成分。这些成分主要为脂肪酸类化合物,其中以十六烷酸、十八碳烯酸、十八碳二烯酸含量最高,含量分别为28.90%、26.49%、17.95%。这些成分均为首次在该植物中鉴定出。

壮、瑶药小槐花中异柠檬酚的分离鉴定及含量测定研究

采用硅胶色谱柱分离纯化的方法从小槐花药材中分离得到一种黄酮类化合物，根据理化性质及光谱数据鉴定其为异柠檬酚。采用HPLC法对异柠檬酚的含量进行测定，HPLC分析条件如下：色谱柱为Agilent ZOR-BAXSB-C18（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-0．2％磷酸水溶液（70：30），流速为1．0mL／min，检测波长为270nm，柱温为35℃。实验结果表明异柠檬酚在0．011-0．242μg范围与其峰面积呈良好的线性关系；平均回收率为99．76％，RSD为1．42％（n=6），不同采集地的小槐花药材中异柠檬酚的含量存在一定差异。

小槐花的化学成分及质量控制方法研究进展

对小槐花的化学成分及质量控制方法的研究进展进行综述,发现其中黄酮类、生物碱类和挥发油类等为主要活性物质,但其质量控制方法不多,也不完善,主要为传统的性状鉴别和显微鉴别,无法客观评价小槐花的质量。本文可为进一步完善小槐花的质量评价体系提供参考依据。

壮瑶药小槐花挥发油成分气相色谱-质谱联用分析

目的:研究壮瑶药小槐花中挥发油成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取小槐花的挥发油成分,用气相色谱-质谱联用技术进行测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定并用色谱峰面积归一化法获得各化合物的相对含量。结果:从小槐花中鉴定出46个成分,占挥发油总量的89. 50%,相对含量较高的挥发油成分有薄荷脑(12. 06%)、邻苯二甲酸二异丁酯(8. 15%)、己酸丁酯(5. 66%)、棕榈酸(24. 40%)、亚油酸(5. 17%)。结论:该方法结果准确可靠,为合理利用小槐花植物资源及其深度研究开发提供实验依据。

基于UPLC-MS/MS法结合BP神经网络模型在小槐花产地溯源中的应用

目的:建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定小槐花中9个成分(烟酸、山柰酚、当药黄素、槲皮素、木犀草素、芦丁、牡荆素、斯皮诺素、水杨酸)的含量并构建BP(back propagation)神经网络模型对不同产地的小槐花进行产地预测。方法:采用安捷伦ZORBAX SB-C_(18)(50 mm×3.0 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%乙酸(含0.02 mol·L^(-1)乙酸铵)水溶液(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3 mL·min^(-1)。质谱采用ESI正负离子检测模式,多反应监测模式(MRM)的扫描模式。测得各成分含量进行相关性分析,并构建BP神经网络模型用于进行不同产地的小槐花药材的溯源。结果:小槐花中烟酸、山柰酚、当药黄素、槲皮素、木犀草素、芦丁、牡荆素、斯皮诺素、水杨酸9个成分质量浓度分别在0.3888~38.88、10.07~1006.6、34.22~34221.6、3.944~394.4、2.124~212.4、4.344~434.4、46.50~4650.1、1.649~164.9、4.880~488.0 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(r>0.9951),平均加样回收率96.9%~103.9%,RSD均<1.9%。40批小槐花中烟酸、山柰酚、当药黄素、槲皮素、木犀草素、芦丁、牡荆素、斯皮诺素、水杨酸9个成分的含量分别为1.657~7.407、15.801~64.488、1068.348~4270.780、10.608~123.228、3.897~16.802、1.269~97.834、405.285~1955.796、13.614~36.124、4.417~87.509μg·g^(-1)。通过相关性分析可知,当药黄素、芦丁、斯皮诺素、木犀草素4个成分相互呈高度线性正相关,表明小槐花中这4个成分具有一定互相协同的作用。构建BP神经网络模型用于预测不同产地的小槐花样品,检验集的正确率达到92.3%。结论:试验建立的方法简便、灵敏、高效,可用于小槐花成分的快速测定,结合BP神经网络模型对产地进行预测在小槐花产地的溯源中有一定作用。

基于Wnt/β-catenin和AMPK信号通路探讨小槐花黄酮抑制结肠癌细胞增殖和转移作用

目的 研究小槐花Desmodium caudatum抑制肿瘤细胞增殖和转移的作用,并探讨其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的调控作用。方法 采用不同条件制备8种小槐花提取物,MTT法检测小槐花提取物1~8对HCT-116、SW480细胞增殖的影响;结晶紫染色检测小槐花提取物2、3对结肠癌HCT-116、SW480细胞集落形成的影响;划痕实验检测小槐花提取物2、3对HCT-116、SW480细胞迁移的影响;从活性较高的提取物2中提取分离出5个黄酮类化合物(1~5),MTT法检测化合物1~5对HCT-116、SW480、HepG2、RAW264.7、LX-2细胞增殖的影响;结晶紫染色检测化合物1(8-异戊烯基槲皮素,0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol·L^(-1))对HCT-116和SW480细胞集落形成的影响,划痕实验检测8-异戊烯基槲皮素对HCT-116和SW480细胞转移的影响。Western blotting实验检测8-异戊烯基槲皮素对HCT-116和SW480细胞中AMPK和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响;荧光素酶报告基因检测实验观察8-异戊烯基槲皮素对β-catenin与T细胞因子(TCF)结合能力的影响。结果 与对照组比较,小槐花根茎提取物2和3以及8-异戊烯基槲皮素能显著抑制结肠癌细胞的增殖和迁移(P<0.05、0.01、0.001)。与对照组比较,8-异戊烯基槲皮素能够显著上调p-AMPK蛋白的表达(P<0.05、0.001),显著下调AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A (CPT-1A)和脂肪酸合成酶(FAS)蛋白的表达(P<0.05、 0.01、 0.001),表明其能够促进癌细胞AMPK信号通路的激活。与对照组比较,8-异戊烯基槲皮素显著下调β-catenin以及其下游糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、核内原癌基因(c-Myc)和G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)的蛋白表达(P<0.05、0.01、0.001),同时显著降低TCF报告基因结合位点(野生型)和荧光素酶开放阅读框TOPflash(pGL3-OT)活性(P<0.05、0.01),但不影响FOPflash(含突变位点)活性,表明其抑制β-catenin的表达和β-catenin/TCF复合物的结合。结论 小槐花黄酮8-异戊烯基槲皮素通过调控Wnt/β-catenin和AMPK信号通路抑制结肠癌细胞增殖和转移。