Quantification of six bioactive compounds in Zhenqi Fuzheng preparation by high-performance liquid chromatography coupled with diode array detector and evaporative light scattering detector

A simple and accurate high-performance liquid chromatography（HPLC）coupled with diode array detector（DAD）and evaporative light scattering detector（ELSD）was established for the determination of six bioactive compounds in Zhenqi Fuzheng preparation（ZFP）.The monitoring wavelengths were 254,275 and 328 nm.Under the optimum conditions,good separation was achieved,and the assay was fully validated in respect of precision,repeatability and accuracy.The proposed method was successfully applied to quantify the six ingredients in 31 batches of ZFP samples and evaluate the variation by hierarchical cluster analysis（HCA）,which demonstrated significant variations on the content of these compounds in the samples from different manufacturers with different preparation procedures.The developed HPLC method can be used as a valid analytical method to evaluate the intrinsic quality of this preparation.

Determination of AF and AFG in Red Ginseng by High Performance Liquid Chromatography with Evaporative Light Scattering Detector (HPLC-ELSD)

[Objective]The paper was to establish a method for determining AF and AFG in red ginseng.[Method]A new simple,rapid and sensitive method for simultaneous determination of two amadori compounds,arginyl-fructose(AF)and arginyl-fructosyl-glucose(AFG),in extracts of three kinds of ginseng preparations was developed and validated using high performance liquid chromatography with evaporative light scattering detector(HPLC-ELSD).Two target analytes were efficiently separated by Prevail CTM18 column(4.6 mm×250 mm,5μm)at the flow rate of 0.8 mL/min within 15 min of single chromatographic run.[Result]Under optimized conditions,the detection limits were 0.015 and 0.02 mg/mL for AF and AFG,respectively.Calibration curves of peak area for two analytes were linear over three orders of magnitude with the correlation coefficients greater than 0.999.The average recoveries,precision,reproducibility and stability for two analytes(AF and AFG)were 99.5% and 100.9%,0.43% and 0.47%,0.46% and 0.43%,0.41% and 0.49%,respectively.[Conclusion]This method was successfully applied for quantifying AF and AFG in red ginseng and the method was efficient,sensitive and accurate.

高效液相色谱-蒸发光散射法测定油莎豆块茎发育过程中的水溶性糖

基于高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)建立油莎豆块茎发育过程中水溶性糖(果糖、葡萄糖、蔗糖)含量的检测方法。以乙腈∶水(体积比75∶25)为流动相,流速为1.0 mL/min,并将蒸发光散射检测器条件优化为氮气压力206.8 kPa、漂移管温度65℃。结果表明:3种水溶性糖在0.10~20.0 mg/mL质量浓度范围内线性关系良好(r>0.999),检出限为0.04~0.10 g/100 g,回收率为96.0%~100.2%,相对标准偏差(RSD)为1.00%~7.32%(n=6)。在油莎豆块茎发育过程中,其果糖含量为0.376~0.692 g/100 g,葡萄糖含量为0.366~0.787 g/100 g,两者呈显著正相关(P<0.01);蔗糖含量为5.49~24.2 g/100 g,呈先降低后总体升高的趋势。所建方法灵敏度高、重现性好,适用于油莎豆块茎发育过程中水溶性糖的测定。

HPLC-ELSD同时测定腺梗豨莶草中6个二萜成分的含量

为了研究腺梗豨莶草中6个二萜成分(对映海松烯型二萜:奇任醇、Hythiemoside B和豨莶精醇;对映贝壳杉烷型二萜:对映-17,18-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸、对映-16β,17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸和对映-16α氢-贝壳杉烷-17,19-二羧酸)的含量,本试验建立了高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定二萜类化合物含量。样品粉碎过筛加甲醇和乙酸乙酯回流提取,蒸发减压除去溶剂,甲醇溶解,0.45μm滤膜滤过,取续滤液进行测定。色谱条件:色谱柱为Waters Symmetry Shield^(TM)RP18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.3%甲酸水溶液-乙腈(v/v),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min。蒸发光散射检测器漂移管温度为103℃,雾化气流速为3.0 L/min。应用该方法测定腺梗豨莶草样品不同部位中6个二萜类化合物的含量,同时比较叶、枝、茎中对映海松烯型二萜、对映贝壳杉型二萜和总二萜含量的差异。结果显示,6个二萜成分在其线性范围内线性关系良好(r≥0.9992);日内和日间精密度相对标准偏差(RSD)均小于3.5%;回收率介于96.5%~101.5%,RSD均小于2.3%;腺梗豨莶草不同部位(叶、枝、茎)的二萜类化合物含量差异较大。结果表明,本试验所建立的HPLC-ELSD方法简便、准确、重复性好,为腺梗豨莶草药材全面的质量评价和临床应用中最佳药用部位的选择提供了参考。

九蒸九制对鸡头黄精理化性质及抗氧化性的影响

为了探究蒸制处理对鸡头黄精有效成分及代谢物种类和含量影响,采用低场核磁、苯酚-浓硫酸法、高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)和液相色谱-质谱技术(LC-MS)等对其中的水分分布、多糖含量、单糖组成和代谢产物等进行分析。结果表明,多次蒸制后,鸡头黄精结合水的含量、多糖含量逐渐降低,水提液pH值逐渐降低呈弱酸性达到4.07,还原糖、总酚、黄酮含量逐渐升高分别达到28.69%、10.02 mg/g和0.69%,抗氧化性逐渐增强,ABTS抗氧化能力在7制达到最高为0.73 mmol/L,较1制增加0.35 mmol/L,DPPH自由基清除率和FRAP值在8制达到最高分别为81.95%,1.97 mmol/L,较1制分别增加50.92%,1.72 mmol/L;同时蔗糖逐渐水解从18.53mg/g到7.62mg/g,葡萄糖和果糖含量提高,分别由1制0.00和11.30mg/g,达到9制17.25和230.89 mg/g。选取一制与九制黄精进行代谢物差异分析,在正离子模式下共检测到1310种代谢物,差异代谢物有176种(按其特性分为38类),在负离子模式下共检测到1841种代谢物,差异代谢物有148种(按其特性分为26类)。黄精经蒸制后有效成分差异性显著,对鸡头黄精炮制加工提供科学依据。

高效液相-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定红参中的精氨酸单糖苷(AF)及精氨酸双糖苷(AFG)含量

目的建立一种同时测定人参加工品中精氨酸单糖苷(AF)和精氨酸双糖苷(AFG)含量的方法。[方法]用PrevailTMC18column(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱进行检测。流动相A:色谱乙腈,流动相B:5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟醋酸溶液。色谱条件为[0%A(0 min);0%A(5 min);15%A(8 min);35%A(25 min)];流速0.8 mL/min;漂移管温度为115℃;气体流量3.2 L/min。[结果]AF和AFG的检测限分别为0.015和0.010 mg/mL;线性关系相关系数分别为,AF:0.9997,AFG:0.9999,表明线性关系良好。AF和AFG检测的精密度,重复性,稳定性以及回收率的相对标准偏差分别为0.43%&0.37%,0.43%&0.55%,0.43%&0.49%,0.45%&0.15%。AF和AFG检测的回收率分别为99.5%&100%,表明方法稳定。经检测,高丽红参,中国红参和生晒参中AF含量分别为0.74%,0.91%和1.14%,AFG含量分别为6.69%,5.12%和0.85%。[结论]这种方法成功用于高丽红参,中国红参及生晒参中AF及AFG的检测;且红参中AF和AFG含量明显高于生晒参。该方法测定结果可靠,缩短了测定时间,较少杂质干扰。但因为本研究考察氨基酸种类较少,当衍生物种类较多时,仍需进一步考察其分离度。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定化妆品中二硬脂基二甲基氯化铵

建立了测定多种化妆品中二硬脂基二甲基氯化铵(DSDMAC)含量的高效液相色谱-蒸发光散射分析方法。样品经乙腈水溶液(体积比2∶1)超声分散后,加入氯化钠进行振荡提取,取上层有机相分析。采用AcclaimTM Surfactant柱(150 mm×4.6 mm,5µm)分离,以乙腈和100 mmol/L乙酸铵水溶液(pH 5.5)为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果表明,该类化合物可在18 min内实现有效分离,在10~200 mg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r^(2))为0.9994,检出限(LOD,S/N=3)和定量下限(LOQ,S/N=10)分别为3.27 mg/kg和9.96 mg/kg。在100、500、1000 mg/kg加标水平下,卸妆油等10种典型空白样品的平均回收率为82.5%~101%,相对标准偏差(RSD,n=6)均不大于6.3%。采用该方法对133个市售样品进行检测,1个乳液样品中DSDMAC的测定值超出法规要求。该方法精密度好,准确度高,适用于各种化妆品中DSDMAC的测定,可为化妆品的质量安全监测提供技术支持。

HPLC-ELSD法同时测定电子烟烟液中的10种甜味剂

建立了高效液相色谱仪-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时检测电子烟烟液中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、新甲基橙皮苷二氢查尔酮(NHDC)、爱德万甜、罗汉果苷V、纽甜的方法。样品中的甜味剂经50%甲醇水提取后,采用C_(18)色谱柱分离,以甲醇-0.1%甲酸水(pH=4.5)为流动相进行梯度洗脱,蒸发光散射检测器进行检测。结果表明,10种甜味剂分离度良好,在5~250 mg/L建立二次曲线,R^(2)均大于0.998,方法回收率为90.0%~110.0%,RSD为0.774%~7.65%。检测方法简单、准确、灵敏、实用性强,适用于电子烟烟液中10种甜味剂的同时检测,提高了实验室的检测效率。

知母标准汤剂的质量评价方法及指标成分的量值传递规律探索

目的:建立知母标准汤剂的质量评价方法,明确10批知母标准汤剂中指标成分的含量及转移率范围,探索从饮片到标准汤剂,指标成分的量值传递规律。方法:制备10批知母标准汤剂,采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器法(UPLC-PDA)对指标成分芒果苷进行含量测定,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0~3 min,10%~13%B;3~6 min,13%~14%B;6~7 min,14%~90%B),检测波长为258 nm;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)对知母皂苷BⅡ进行含量测定,以乙腈-水(25∶75)为流动相进行等度洗脱,载气流速为2.8 L·min^(–1),漂移管温度为104℃。结果:建立的指标成分含量测定方法的方法学验证均良好,能用于知母标准汤剂中2个指标性成分的定量检测。10批知母标准汤剂中芒果苷、知母皂苷BⅡ的质量分数分别为0.88%~1.12%和0.88%~2.53%,芒果苷含量位于其均值的±30%范围内;转移率分别为45.83%~57.27%和26.94%~43.49%,均在其均值的±30%范围内。结论:建立了知母标准汤剂的质量评价方法,指标成分芒果苷和知母皂苷BⅡ在不同批次的知母饮片与标准汤剂间的转移率一致性较好,表明这2个指标成分在标准汤剂的制备过程中转移情况稳定,为源于知母水煎液的制剂的质量控制方法的制定提供参考。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定固态食品中6种稀有糖

稀有糖在固态食品中的应用量与日俱增,引发了掺假、过量添加等食品安全问题,因此建立固态食品中稀有糖(阿洛酮糖、塔格糖、海藻糖、异麦芽酮糖、赤藓糖醇和甘露糖醇)的检测方法十分重要。本文基于高效液相色谱-蒸发光散射检测器,建立了一种同时检测固态食品中6种稀有糖的分析方法。选用Zorbax Original NH_(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,流动相为乙腈-水(80∶20,v/v),流速梯度洗脱。蒸发光散射检测系统的漂移管温度设置为50℃,雾化器载气为高纯氮,载气流速为1.0 mL/min,压力为275.79 kPa,增益值为3。样品经25 mL水提取,振荡涡旋10 min,分别加入200μL的乙酸锌溶液和200μL的亚铁氰化钾溶液净化,4500 r/min离心10 min,取上清液1 mL,过0.22μm水相滤膜,待上机分析。6种稀有糖在各自范围内线性关系良好,决定系数(R^(2))均>0.9985,方法的检出限为0.02~0.60 g/100 g。以空白固态食品样品为基质,在3种加标水平下,6种稀有糖的回收率为92.6%~103.2%,相对标准偏差为0.7%~4.4%。将该方法用于分析实际固态食品样品中6种稀有糖的含量,结果显示,实际成分和食品标签所示基本一致。本研究建立的方法前处理操作简单,重复性好,方法快速、灵敏、准确,可应用于日常监测固态食品中6种稀有糖的含量,同时为稀有糖的检测提供了一种具有广阔前景的技术手段。

HPLC-ELSD法测定积雪草中积雪草苷及羟基积雪草苷的含量

积雪草提取物通常被用作化妆品原料,有美白、抗氧化等功效,发挥此功效的主要物质有积雪草苷、羟基积雪草苷。采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)技术,建立了测定积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量的方法。选用Unitary C18色谱柱(4.6×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,柱温为30℃,采用Agilent 1260 InfinityⅡ蒸发光散射检测器(漂移管温度70℃,载气流速1.6 L/min)。研究表明,积雪草苷和羟基积雪草苷质量浓度分别在100~702 mg/L,105~738 mg/L范围内,峰面积与质量浓度线性关系良好,相关系数分别为0.9996和0.9997。积雪草苷和羟基积雪草苷平均加样回收率分别为101.20%,98.30%。相对标准偏差(RSD)均在3%以内。方法简单,准确度高,分离效果好,干扰少,可用于积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量测定。

钙型糖柱—高效液相色谱—蒸发光散射检测器法测定牛乳中的乳糖

目的:实现牛乳中乳糖含量快速检测。方法:建立基于钙型糖柱和高效液相色谱测定牛乳中乳糖的新方法。牛乳通过0.2 g/mL三氯乙酸溶液沉淀蛋白质,所得滤液稀释100倍并过滤膜后进入高效液相色谱系统,经过钙型糖柱分离,蒸发光散射检测器进行检测。结果:乳糖在线性范围(20~100 mg/L)内,色谱峰面积和质量浓度之间具有较好的相关性,R 2为0.9998。乳糖加标水平为15,40,80 mg/g时,回收率为90.96%~98.23%,检出限为3.6μg/g,定量限为12μg/g,在6 min内实现乳糖浓度的测定。并且用该方法测定11种市售乳样品,测得结果与国标(GB 5009.8—2016)法基本一致。结论:该方法的精密度、重复性、加标回收率均符合有关规定,检测结果准确且耗时短,适用于快速检测牛乳中的乳糖含量。

HPLC-ELSD法测定梅子提取物中糖和糖醇的含量

建立了一种高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)同时测定梅子提取物中果糖、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖的方法。分离采用Grace Prevail Carbohydrate ES色谱柱,柱温为30℃;流动相为乙腈-水,流速为1.00 mL/min;检测使用蒸发光散射检测器,漂移管温度为60℃,氮气流速为2.50 L/min。结果表明,果糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖分别在34.69~2 220.00、16.22~1 038.00、38.66~2 474.00、24.53~1 570.00、22.91~1 466.00、6.09~390.00、14.69~940.00μg/mL范围内线性关系良好,精密度良好,重复性的相对标准偏差(RSD)为1.00%~4.09%,各目标物的回收率为85.5%~110.1%,精密度为0.3%~4.6%(n=6)。本方法在30 min内实现了糖和糖醇的分离,灵敏度和重复性检测较好,有效避免了溶剂及温度的影响,测量结果较准确且操作方便,可用于批量检测梅子提取物中糖和糖醇的含量。

高效液相色谱测定焙烤食品中6种甜味剂

建立了高效液相色谱测定烘烤食品中6种甜味剂的分析方法。样品用5%甲醇水溶液提取离心,采用二极管检测器测定安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜、纽甜、甜菊糖苷,蒸发光检测器测定三氯蔗糖。除三氯蔗糖外,其他5种甜味剂在1~50μg/mL的浓度范围内呈线性关系,三氯蔗糖在10~500μg/mL范围内呈幂函数关系;6种甜味剂相关系数均大于0.999;平均回收率为80.3%~99.8%,相对标准偏差为0.6%~5.8%。该方法前处理简单,准确度高,重现性好,适用于焙烤食品中6种甜味剂的测定。

快速滤过型净化结合液相色谱-蒸发光散射法检测茶叶中5种糖类成分

采用聚酰胺粉作为净化吸附剂材料,基于快速滤过型净化(multi-plug filtration cleanup,m-PFC)前处理方法,开发适用于茶叶样品的专用前处理净化小柱,结合高效液相色谱-蒸发光散射法建立同时检测茶叶中5种糖类成分的分析方法。茶叶样品加水振荡提取,加入二氯甲烷反萃杂质,取上层溶液经m-PFC柱净化,高效液相色谱法测定,外标法定量。结果表明:鼠李糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖5种成分在各自相应线性范围内,峰面积对数与其质量浓度对数线性关系良好,相关系数大于0.99,检出限为0.04~0.1 g/100 g,定量限为0.10~0.20 g/100 g。低、中、高三水平的平均添加回收率为91.0%~103%,相对标准偏差为1.0%~4.6%。本方法操作简便,净化效果好,适合茶叶中5种糖类成分的定量检测。

液相色谱法和液质联用法应用于酱油中三氯蔗糖测定能力验证的结果与分析

比较不同方法对酱油中三氯蔗糖能力验证样品的检测,并对结果进行分析。样品用水稀释后经HLB固相萃取柱净化富集,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法和超高效液相色谱-串联质谱法检测三氯蔗糖的含量。高效液相色谱-蒸发光散射检测器法进行检测时,采用空白基质提取液配制标准曲线溶液,回收率明显改善。采用超高效液相色谱-串联质谱法进行检测时,首次发现了其铵加和物离子的稳定存在,正离子模式检测比负离子模式响应提高近4倍,两能力验证样品的Z值分别是-1.0、-0.9,评价为满意。2种方法准确、可靠,均可用于酱油中三氯蔗糖含量测定,高效液相色谱-蒸发光散射检测器法在基层实验室普遍适用,超高效液相色谱-串联质谱法更加快速、灵敏、准确,但其检测成本、对人员技术要求更高。

高效液相色谱仪不同检测器测定食品中三氯蔗糖的比较研究

三氯蔗糖是现代食品中广泛使用的甜味剂。高效液相色谱法(LC)是食品中三氯蔗糖测定的常用方法,一般选用蒸发光散射检测器(ELSD)和示差折光检测器(RID)进行测定。本实验对不同样品进行三氯蔗糖加标实验,将ELSD检测器和RID检测器结果进行了系统对比分析,初步证明了ELSD法的检出限更低,在低浓度测定时目标物峰形更好,信噪比更高,响应更灵敏,在较低加标浓度时回收率更高,表明ELSD法更适用于低三氯蔗糖添加的食品检验中。相比之下,RID法的重复性更好,适用于较高三氯蔗糖添加的食品检验中。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定脂质体中神经酰胺NP和AP含量

建立了高效液相色谱-蒸发光散射法检测神经酰胺脂质体中神经酰胺NP和神经酰胺AP两种成分含量的方法。神经酰胺脂质体原料样品经甲醇-异丙醇(体积比7∶3)破乳并超声处理,采用色谱柱Agilent ZORBAX StableBond C8(4.6×150 mm,3.5μm)分离,以纯乙腈为流动相A,含0.1%甲酸的甲醇-异丙醇(体积比7∶3)为流动相B进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温40℃,蒸发器温度90℃,雾化器温度70℃,氮气流速1.0 L/min。结果表明,神经酰胺脂质体中NP和AP的定量限分别为3和6μg/mL,检出限分别为1和2μg/mL,重复性和精密度RSD均小于2%,在NP为50~500μg/mL和AP为25~250μg/mL的质量浓度范围内线性关系良好(R^(2)>0.999),不同质量浓度水平下的回收率为96.2%~105.1%。该方法简便可靠,重现性好,可用于不同脂质体中神经酰胺NP和AP的分离与含量测定。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定肤痒颗粒中薯蓣皂苷元的含量

目的:建立一种准确测定肤痒颗粒中薯蓣皂苷元含量的方法。方法:以白英中薯蓣皂苷元为检测指标,采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定肤痒颗粒中薯蓣皂苷元的含量。色谱柱为Eclipse XDB-C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(95∶5),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为20μL;采用Alltech 3300 ELSD蒸发光散射检测器。肤痒颗粒供试品溶液的制备采用酸水解提取,水浴回流3 h,用石油醚(60~90℃)萃取4次,回收石油醚至干,用甲醇溶解得到供试品溶液进行测定。结果:薯蓣皂苷元在20.82~104.10μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好。平均回收率为92.97%(n=6),RSD=4.8%。测定14个厂家肤痒颗粒中薯蓣皂苷元含量,发现含量相差较大。结论:本方法准确,专属性强,能客观地反映肤痒颗粒中薯蓣皂苷元的含量。不同厂家肤痒颗粒中薯蓣皂苷元含量参差不齐,应加强质量控制。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定虫草头孢菌粉中D-甘露醇

建立了高效液相色谱-蒸发光散射测定虫草头孢菌粉中D-甘露醇的分析方法。样品经过超声波辅助提取后,以Shodex Asahipak NH2P-504E(4.6 mm×250 mm,5μm)为分离柱,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min。蒸发光散射检测器参数:漂移管温度35℃,氮气流速1.60 SLM。在0.100~2.00 g/L范围内D-甘露醇质量浓度的自然对数与峰面积的自然对数呈良好线性。相对标准偏差为5.8%,加标回收率为93.5%~97.5%。该方法基质干扰较小,简单快速,结果准确可靠和灵敏度高,适用于虫草头孢菌粉中D-甘露醇含量的测定。