脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)降解菌Devosia sp.A8和Paracoccus yeei A9的生理生化及生长特性

由菌株A8和A9组成的人工混菌能够有效地降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)毒素。为了对双菌降解系统进行深入了解,对这2株菌进行严格的生理生化试验,并通过单因素设计,探究不同培养条件(时间、培养基、温度、pH、NaCl质量浓度、抗生素及摇床转速)对其生长状况的影响。通过生理生化试验,进一步确认了菌株A8和A9分别为Devosia sp.和Paracoccus yeei。生长特性研究结果表明:Devosia sp.A8最适宜生长的培养基为多价蛋白胨-酵母粉(PY)培养基,最适pH为8.0,最适培养温度为30℃,最适NaCl质量浓度为5 g/L;而P.yeei A9的最适培养基则为超优肉汤(SOC)培养基,最适pH为7.0~8.0,最适培养温度为35℃,最适NaCl质量浓度为2 g/L。Devosia sp.A8和P.yeei A9的培养条件较为温和,为以后大规模发酵生产以开发DON降解菌剂或酶制剂提供了有利条件。

基于各向异性导电膜的射频SP8T开关无损测试

为了解决射频器件无损测试的难点,基于各向异性导电膜Z轴(ACF-Z)连接结构,设计并实现了射频器件无损测试技术。针对表面贴装式GaAs金属半导体场效应晶体管(MESFET)单刀八掷(SP8T)开关,该测试技术使用ACF-Z轴连接结构实现器件与测试板的无损连接,通过矢量网络分析仪对GaAs MESFET SP8T开关性能进行测试,最多可同时测试SP8T开关的8个通道。测试结果显示,1~8 GHz内,器件的插入损耗为-15~-35 dB,回波损耗为-15~-35 dB,测试过程中未对器件造成损伤。

阻断SP/NK1R信号轴可抑制小鼠黑色素瘤增殖

目的:探讨阻断SP/NK1R信号轴对小鼠黑色素瘤生长的影响及可能作用途径。方法:建立瞬时接种B16F10细胞形成原位黑色素瘤的小鼠模型,腹腔注射给予NK1R拮抗剂阿瑞匹坦(5 mg/kg)进行干预。给药5次后取小鼠胸腺、脾脏和皮肤黑色素瘤组织,计算各组小鼠体重变化、肿瘤增长变化、胸腺指数和脾脏指数;采用免疫荧光染色考察黑色素瘤组织中细胞增殖和凋亡情况;并观察肿瘤组织中浸润效应CD8 T细胞的表达情况。结果:给予阿瑞匹坦拮抗NK1R对各组小鼠体重没有明显影响,但能显著抑制原位黑色素瘤的增殖;阻断SP/NK1R信号轴能够引起小鼠胸腺指数显著升高,但对脾脏指数没有明显影响;免疫荧光染色结果显示给予阿瑞匹坦能够显著抑制黑色素瘤细胞在体内的增殖,并显著促进其凋亡;同时,拮抗NK1R能够显著增加肿瘤浸润效应CD8 T细胞的数目。结论:阻断SP/NK1R信号轴可以显著抑制小鼠中黑色素瘤细胞的增殖,并促进肿瘤细胞凋亡,这一作用可能是通过促进CD8 T细胞浸润,增强抗肿瘤免疫来实现的。

呕吐毒素脱毒菌Devosia sp.发酵培养基优化

德沃斯氏菌(Devosia sp.)是一种可以高效脱除谷物及饲料中呕吐毒素的新型微生物菌株,其转化产物是目前研究较为安全的呕吐毒素转化产物。本研究以碳、氮源单因素实验为基础,选用8个因素进行部分因子试验(FFD),筛选出酵母浸粉、酵母膏和蔗糖3个最显著影响因素;对3个最显著影响因素进行最陡爬坡实验获得其最优点区域;再通过中心组合实验设计(CCD)进行响应面分析得到了Devosia sp.的最适发酵培养基组成为:酵母浸粉10.00 g/L,酵母膏6.49 g/L,蔗糖8.40 g/L,硫酸铵2 g/L,磷酸二氢钾2 g/L,硫酸镁0.7 g/L,氯化钙0.02 g/L和硫酸亚铁0.02 g/L。使用该培养基进行发酵验证试验,培养40 h的OD_(600)达到21.66,与预测值(21.62)基本相符。综上,该回归模型对Devosia sp.发酵培养基的优化是可行的,且优化后较原始培养基生物量(OD_(600))提高了89.1%,降低了生产成本,为呕吐毒素脱毒菌株的工业生产奠定了基础。

2~6GHz高性能开关滤波器组MMIC

基于0.25μm GaAs E/D赝配高电子迁移率晶体管(PHEMT)工艺,设计了一款2~6 GHz开关滤波器组单片微波集成电路(MMIC)芯片。片上集成了8路带通滤波器、输入、输出单刀八掷(SP8T)开关、3-8译码器和驱动器。通过输入、输出SP8T开关进行通道选择,采用三串两并结构,提高了通道间隔离度。带通滤波器组采用多级LC谐振器实现,最小、最大相对带宽分别为18%和100%,可用于宽带及窄带滤波器设计,具有通带插入损耗小,阻带抑制度高等优点。末级级联低通滤波器,实现远端寄生通带抑制大于35 dBc。在片探针测试结果显示,该开关滤波器组芯片在2~6 GHz频率范围内,每个带通滤波器的插入损耗均小于8.5 dB,阻带衰减为40 dB。该芯片具有通道多、功能复杂、集成度高的特点,可应用于宽带雷达系统进行频率预选。

呕吐毒素降解德沃斯氏菌株高活性菌剂制备的研究

试验旨在制备呕吐毒素(DON)降解德沃氏菌株的高活性菌剂。试验以高效降解DON的德沃斯氏菌株(Devosia sp.)D-8为对象,采用鼓风干燥法制备一种高活菌数、低成本的固态菌剂,使用单因素和正交试验优化制备工艺。结果显示,德沃斯氏菌D-8发酵培养21 h后发酵液浓缩10.0倍,与粒径40~80目玉米粉载体充分混匀,40℃鼓风干燥制得水分含量为10%、活菌数达(12.38±0.11)lgCFU/g的固态菌剂。利用场发射扫描电镜观测表面微观结构明确了该菌与载体依附状态。储藏试验结果表明,4℃真空储藏30 d内可保持较高的活菌数。研究表明,试验制备的DON降解菌剂具有活菌数高、生产过程简便和成本低等优点,可为处理DON污染饲料提供参考。

BP神经网络耦合遗传算法优化呕吐毒素降解菌发酵培养基

为了获得一株可高效降解呕吐毒素(DON)的德沃斯氏菌(Devosia sp.)D-8的最佳发酵培养基。采用单因素试验和部分因子试验确定了发酵培养基的主要组分及浓度范围,并根据其进行正交试验设计,以正交试验及结果作为数据样本建立BP神经网络模型,并通过遗传算法(Genetic algorithm,GA)对该模型进行优化并全局寻优。结果表明:确定了最佳培养基配比:糖蜜30 g/L,酵母浸粉20 g/L,KH_(2)PO_(4)4.4 g/L,Na_(2)HPO_(4)·12H_(2)O 7 g/L;利用该培养基发酵验证,D-8菌的生物量(OD_(600 nm))为14.68,与模型预测值相差1.01%,是优化前生物量的6.87倍,较正交试验后生物量显著提高了6.55%(P<0.05)。BP网络模型可较好地应用于DON降解菌的发酵培养基优化,培养基配方为该菌后续工业化发酵生产及应用提供了数据支撑。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定

【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的DON毒素降解率达到75.47%。【结论】选出的DON高效降解菌株徳沃斯氏菌,不但对液体培养基中的DON毒素具有很好的降解作用,对饲料中DON毒素也有很好的降解效果。这为真菌毒素的生物脱毒处理提供了可行的方法。

降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶的酶学特性

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)降解菌Devosia sp.DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性,掌握DDS-1降解3-AC-DON到3-酮基-DON特性,为该酶的开发应用奠定理论基础。【方法】LG培养基培养DON毒素降解菌Devosia sp.DDS-1后,用PBS离心洗涤菌体后采用超声波破碎,用硫酸铵沉淀菌体破碎液获得粗酶液;然后在不同的酶反应体系中检测3-AC-DON氧化酶的酶活性。【结果】降解菌DDS-1产生3-AC-DON氧化酶的最适条件为:pH 7.0、25℃、培养36 h;该酶酶反应的最适温度为35℃,最适反应pH为7.0;该酶在20—40℃,pH 5.0—9.0的范围内能保持80%以上的酶活性;大多数金属离子在浓度为0.2—2 mmol.L-1对3-AC-DON氧化酶有促进作用;乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶活性有抑制作用;酶的定域试验结果显示该酶为胞内酶;DDS-1产生的粗酶液能很好地降解小麦中的DON、3-AC-DON毒素。【结论】Devosia sp.DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶的酶学特性研究表明,DDS-1产生的3-AC-DON氧化酶具有较好的温度和酸碱稳定性,该酶反应需要金属离子作为辅因子。

从肺肠病理模型CCK8、CGRP、SP、VIP表达探讨“肺与大肠相表里”

目的通过肠病(便秘)、肺肠合病(过敏性哮喘合并便秘)模型大鼠五脏即心、肝、脾、肺、肾组织中CCK8、CGRP、SP、VIP表达探讨"肺与大肠相表里"理论。方法制备肠病和肺肠合病大鼠模型,免疫组织化学法观察五脏组织中CCK8、CGRP、SP、VIP的表达。结果虽然CCK8、CGRP、SP、VIP染色在五脏中均有一定程度的改变,但经统计发现,与空白对照组比较,肠病组大鼠肺组织中CCK8、VIP有差异(P<0.01),CGRP、SP有差异(P<0.05);与空白对照组比较,肺肠合病组大鼠肺组织中CCK8、CGRP、SP、VIP均有差异(P<0.01);与肠病组比较,肺肠合病组大鼠肺组织CCK8、CGRP、VIP均有差异(P<0.01),SP有差异(P<0.05);而心、肝、脾、肾各组之间比较CCK8、CGRP、SP、VIP表达无差异(P>0.05)。结论提示在肠病和肺肠合病情况下五脏中大肠与肺之间存在一定的联系,但与其它四脏并无直接联系,说明肺与大肠之间存在互相影响的特异性。

Achaetomium sp.Xz8甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达及其酶学性质分析

甘露聚糖酶作为最主要的半纤维素酶类现已被广泛地应用在饲料、造纸、洗涤剂、食品及石油开采等领域。本研究从高温真菌Achaetomium sp.Xz8菌株中利用兼并引物和Thermal asymmetric interlaced PCR（Tail-PCR）的方法克隆获得一个新的糖苷水解酶5家族的甘露聚糖酶基因（man5Xz8）。基因全长1 239bp,序列分析发现其编码412个氨基酸和1个终止密码子,预测的信号肽序列为N端的20个氨基酸。将成熟蛋白序列克隆到毕赤酵母分泌型表达载体p PIC9中,利用甲醇诱导重组酵母菌表达目的蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白分子量约55.0 k Da。对其酶学性质进行测定,Man5Xz8的最适p H值为5.0,在p H值9.0可以保持40%以上的酶活性,在p H值5.0~9.0具有良好的p H稳定性。最适作用温度为50℃,并对SDS具有较高的耐受性。以角豆胶为底物,Man5Xz8的比活、Km及Vmax值分别为101.6 U·mg-1、4.4 mg·m L-1、128.2μmol·min-1·mg-1。因此,Man5Xz8为后期研究甘露聚糖酶的工业应用和酸碱催化机制提供了良好的材料。

艾灸地机穴治疗原发性痛经的腹部红外热像特征研究

目的研究艾灸地机穴治疗原发性痛经的作用机理。方法将76例原发性痛经患者随机分为治疗组37例和对照组39例。治疗组采用艾灸地机穴治疗,对照组不予以治疗,观察两组患者治疗前后视觉模拟评分(VAS),并且应用红外热像仪观测记录治疗组治疗前后任脉小腹区红外热像特征。结果治疗组治疗后VAS评分与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗前后小腹部温度变化比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论艾灸地机穴是一种治疗原发性痛经的有效方法。

隔药灸脐法治疗原发性痛经临床研究

目的观察隔药灸脐与针刺三阴交穴对原发性痛经患者症状的影响,比较其疗效差异。方法将60例原发性痛经患者随机分为灸脐组和针刺组,每组30例。观察治疗3个月经周期后COX痛经症状评分量表(the Cox Menstrual Symptom Scale)的变化,并比较两组之间的差异。结果灸脐组与针刺组治疗前后COX痛经症状评分比较差异均有统计学意义(P<0.05),且灸脐组疗效优于针刺组(P<0.05)。结论隔药灸脐法治疗原发性痛经疗效较好。

肺泡表面活性蛋白D、血管性血友病因子及白介素8对脓毒症诱发急性呼吸窘迫综合征的预测和预后意义

目的从D二聚体(D-dimmer)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)、血小板(Platelet,PLT)、氨基末端B型钠尿肽前体(N terminal-pro brain natriuretic peptide,NT-Pro BNP)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、白介素8(interleukin-8,IL-8)、肺泡表面活性蛋白D(Surfactant Protein D,SP-D)中筛选对脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)具有预测价值的生物标志物。方法对48例脓毒症合并ARDS的患者和同期40例脓毒症患者进行前瞻性对照研究;在进入ICU 24 h内抽取静脉血标本,定量检测7种生物标志物的浓度/活性水平;构建脓毒症并发ARDS的风险预测模型和死亡预测模型,用Logistic回归筛选具有预测价值的生物标志物和临床指标。结果 SP-D、v WF、IL-8预测脓毒症合并ARDS的ROC曲线下面积分别为0.758(P<0.01)、0.783(P<0.01)、0.747(P<0.01);三者联合时为0.847(P<0.001);IL-8、年龄≥60岁、APACHEⅡ积分≥20对脓毒症合并ARDS具有死亡预测价值,OR值分别为12.138(ln IL-8)(P=0.022)、6.157(P=0.040)、7.415(P=0.014)。结论SP-D、v WF、IL-8对脓毒症合并ARDS具有早期预测价值,三者联合可以提高预测准确度;IL-8对脓毒症合并ARDS具有死亡预测价值,建议在临床实践中结合APACHE II评分、年龄综合评估。

髓样相关蛋白MRP8/14在小鼠肺炎链球菌性脑膜炎脑损伤中的作用

细菌性脑膜炎是各种细菌侵入中枢神经系统引起的脑实质、脑膜或血管的中枢神经系统感染性疾病,而肺炎链球菌(Streptococcus Pneumoniae,SP)是目前细菌性脑膜炎最常见和最主要的致病菌之一.研究SP性脑膜炎脑损伤的发生发展机制可为寻求该疾病新的治疗手段提供初步的实验和理论依据.通过探讨髓样相关蛋白MRP8/14对小鼠脑组织中IgG,Albumin,NSE,caspase3的影响,探讨MRP8/14在小鼠肺炎链球菌性脑膜炎脑损伤中的作用.将48只1. 5~2个月健康雄性BALB/C小鼠随机分为四组:磷酸缓冲盐溶液对照组(PBS组)、MRP8/14蛋白组(MRP8/14组)、肺炎链球菌组(SP组)、肺炎链球菌+MRP8/14蛋白组(SP+MRP8/14组),每组12只;经侧脑室穿刺分别注入PBS、MRP8/14蛋白、SP混悬液、SP+MRP8/14建立动物模型.注射后6,24,48 h对小鼠进行神经行为学评分和体质量的变化率测定;处死小鼠取脑,记录脑组织含水量变化;观察不同时间点小鼠脑组织中Nissl染色阳性细胞及其数量的改变;制备脑组织匀浆,采用ELISA法测定血脑屏障通透性指标IgG,Albumin水平;采用免疫组织化学方法检测脑组织中脑损伤标志物NSE、凋亡相关蛋白caspase3蛋白的表达.结果显示,侧脑室注射6,24,48 h后,SP组小鼠与PBS组相比神经行为学评分明显降低,脑组织含水量明显增加,Nissl染色阳性神经细胞数量减少,IgG和Albumin浓度明显增加,NSE阳性细胞数明显减少,caspase3表达明显升高;SP+MRP8/14组与SP组相比神经行为学评分降低,脑组织含水量增加,Nissl染色阳性神经细胞数量减少,IgG和Albumin浓度增加,NSE阳性细胞数减少,caspase3表达升高趋势更加明显.因此,在小鼠SP性脑膜炎模型中,髓样相关蛋白MRP8/14加剧了SP性脑膜炎小鼠的临床症状、脑水肿、脑组织神经元丢失及脑损伤.

内生镰刀菌漆酶辅助提取槐米中总黄酮的研究

目的研究内生真菌胞外漆酶在槐米总黄酮提取中的应用。方法内生镰刀菌在起始pH7.0的综合马铃薯培养基中,20℃下摇瓶培养6d,具有较高的漆酶活力(36.1U/mL)。槐米干粉投入真菌发酵液中进行酶解处理,比较酶料比、酶解温度、酶解时间和酶解液pH值对槐米总黄酮提取率的影响。结果槐米干粉以酶料比40∶1加入粗酶液中,在pH7.0、20℃下酶解处理1h后,总黄酮提取率可达11.4%,比常规提取法提高了28.7%。结论内生菌漆酶辅助提取法为槐米总黄酮提取的可行新方法。

老年COPD患者血清SP-D、NE、IL-8和α-HBD水平的变化与病情进展的关系

目的:探讨血清四项指标浓度的变化与慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者病情进展的关系和临床价值。方法:血清肺泡表面活性蛋白D(surfactant protein D,SP-D),中性粒细胞弹性蛋白酶(neutronphil elastase,NE)采用酶联免疫法(ELISA)检测,白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)含量则采用放射免疫分析(RIA),α-羟丁酸脱氢酶(alpha-hydroxybutyric dehydrogenase,α-HBDH)测定采用全自动生化分析法(ACA)。结果:临床及测定结果:两组间除性别和平均年龄两项临床记录指标外,余五项指标均存在显著性差异(P<0.05,P<0.01)。血清指标中SP-D水平Ⅰ级组较正常对照组略升高,但无显著性差异(P>0.05),Ⅱ、Ⅲ级组水平则均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.0),患者分级组间比较也存在显著性差异(P<0.05)。IL-8水平则于Ⅰ级组已显著高于正常对照组(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ级组水平则均显著高于正常对照组(P均<0.01),患者分级组间比较也存在显著性差异(P均<0.05)。NE水平的变化统计结果同IL-8。α-HBDH活性的变化Ⅰ、Ⅱ级两组较正常对照组皆无显著统计学差异(P均>0.05),Ⅲ级组水平则显著高于Ⅱ级组和正常对照组(P<0.05,P<0.01)。相关分析结果:血清指标与患者呼吸功能指标FEV1的相关性分析显示,FEV1与SP-D水平Ⅰ级组无显著相关性(r=-0.26,P>0.05),Ⅱ级组呈弱相关(r=-0.36,P=0.05),Ⅲ级组则呈显著负相关(r=-0.76,P<0.05)。FEV1与IL-8水平Ⅰ级组呈显著负相关(r=-0.55,P<0.05),Ⅱ级组呈显著负相关(r=-0.65,P<0.05),Ⅲ级组则呈显著负相关(r=-0.70,P<0.05)。FEV1与NE水平Ⅰ级组呈显著正相关(r=-0.60,P<0.05),Ⅱ级组呈显著负相关(r=-0.65,P<0.05),Ⅲ级组则呈显著负相关(r=-0.70,P<0.05)。FEV1与α-HBDH水平Ⅰ级组无显著相关性(r=-0.30,P>0.05),Ⅱ级组也无显著相关(r=-0.15,P>0.05),Ⅲ级组则呈弱相关(r=-0.41,P=0.05)。结论:血清四项指标浓度的变化与COPD患者病情进展的关系密切;其测定对于老年COPD患者病情的了解和预后评估有一定的临床价值。

以地机为主穴针刺治疗原发性痛经30例

目的观察以地机为主穴治疗原发性痛经的临床疗效。方法将60例患者随机分为治疗组(30例)和对照组(30例),治疗组以地机穴为主穴结合辨证取穴治疗,对照组口服布洛芬;两组均连续3个月经周期为1个疗程,观察症状体征积分变化情况,疗程结束3个月后统计临床疗效。结果治疗组、对照组总有效率分别为96.7%7、0.0%;组间临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后症状体征积分均明显减少(P<0.05);组间治疗后及差值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论以地机穴为主穴针刺治疗原发性痛经疗效良好。

针刺郄穴地机治疗原发性痛经疗效观察

目的观察针刺治疗原发性痛经患者的临床疗效,验证有关郄穴临床主治的理论。方法将原发性痛经患者60例随机分成推拿组和针刺组,选用脾经郄穴地机,单穴刺激,观察治疗前后VAS值。结果两组治疗前后VAS值比较差异均有统计学意义(P<0.05),组间治疗前后VAS差值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 地机穴的穴位特性与止痛疗效相关,不同治疗方法间止痛效果无差异,验证了经络理论中有关郄穴主治痛证、急症的理论。

德沃斯氏菌ANSB714对采食呕吐毒素小鼠生产性能、免疫和抗氧化功能的影响

针对呕吐毒素对动物的毒害问题,试验研究德沃斯氏菌(Devosia sp)ANSB714对采食呕吐毒素污染日粮小鼠生产性能、免疫和抗氧化功能的影响。选取雄性3周龄BALB/c小鼠80只,分为4个处理组,每个处理组5个重复,每个重复为1笼4只小鼠。4个处理组分别为:正常日粮组、正常日粮+ANSB714组、呕吐毒素日粮组和呕吐毒素日粮+ANSB714组。试验期为28d,试验结束后,测定每个处理小鼠的生产性能(平均日增重、平均日采食量和料重比)、免疫指标(IgA、IgG、IL-1β、IL-6和TNF-α)和抗氧化指标(SOD、GSH-PX和MDA)。研究结果表明,小鼠采食呕吐毒素日粮后,平均日增重和日采食量显著降低(P<0.05),血清IgA、IL-6和TNF-α的含量显著升高(P<0.05)。在饲喂DON日粮基础上添加德沃斯氏菌ANSB714,显著缓解了由呕吐毒素引起的小鼠生产性能的降低,以及DON对免疫性能和抗氧化性能的负面影响。因此ANSB714可缓解小鼠的呕吐毒素中毒症状。