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Dhori病毒核蛋白抗原表位的筛选及鉴定
1
作者
张敏
古丽娜孜·沙都汉
+4 位作者
刘利平
王岚
孙素荣
张渝疆
丁军涛
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期956-962,共7页
目的研究鉴定DHOV核蛋白(NP)的最小线性B细胞表位(BCEs),为DHOV的疫苗研制和预防奠定基础。方法本研究针对DHOV-GRT169毒株NP蛋白进行生物信息学分析,采用改良生物合成肽法鉴定其BCEs。首先将DHOV NP蛋白截短为4个片段并鉴定其抗原性,...
目的研究鉴定DHOV核蛋白(NP)的最小线性B细胞表位(BCEs),为DHOV的疫苗研制和预防奠定基础。方法本研究针对DHOV-GRT169毒株NP蛋白进行生物信息学分析,采用改良生物合成肽法鉴定其BCEs。首先将DHOV NP蛋白截短为4个片段并鉴定其抗原性,将阳性片段继续截短成相互重叠8个氨基酸的16肽,将16肽序列分别克隆至原核表达载体pXXGST-3中表达,兔抗融合蛋白NP蛋白多克隆抗体作为一抗,用Western blotting检测16肽的抗原性,将检测出的阳性16肽都截短成相互重叠7个氨基酸的8肽,用同样的方法诱导表达及检测。最后用生物信息学方法分析每个BCEs在NP蛋白三维结构中的位置。结果从NP蛋白中最终鉴定出9个BCEs,分别为Enp1(^(3)NPTPKR^(8))、Enp2(^(7)KRAEPGD^(13))、Enp3(^(83)YUFFFL^(88))、Enp4(^(111)NQTLTDE^(117))、Enp5(^(224)QSQKAMLK^(231))、Enp6(^(227)KAMLKQIF^(234))、Enp7(^(418)LNAEFEEY^(425))、Enp8(^(421)EFEEYSKL^(428))、Enp9(^(432)GTGAFYER^(439)),均位于NP蛋白表面。结论这些鉴定的表位将提高对DHOV表位分布和致病机制的认识,为DHOV多表位检测抗原的开发提供基础,也可为DHOV感染与免疫机制研究提供理论依据。
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关键词
蜱传
dhori病毒
核蛋白NP
改良生物合成肽法
最小抗原表位
下载PDF
职称材料
基于Dhori病毒GP蛋白间接ELISA检测方法的建立
2
作者
汪烘宇
高赟
+5 位作者
马晓芹
朱忠正
富玉姣
晁小珊
靳军霞
丁军涛
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期888-895,共8页
本研究利用原核表达系统表达Dhori病毒(DHOV)糖蛋白(GP),以此为抗原建立间接ELISA检测方法。根据DHOV-GRT169毒株GP基因设计引物并扩增得到去除跨膜区与信号肽的基因片段,构建了重组表达质粒p ET-32a-GP,测序验证正确后转入大肠杆菌BL21...
本研究利用原核表达系统表达Dhori病毒(DHOV)糖蛋白(GP),以此为抗原建立间接ELISA检测方法。根据DHOV-GRT169毒株GP基因设计引物并扩增得到去除跨膜区与信号肽的基因片段,构建了重组表达质粒p ET-32a-GP,测序验证正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导表达。采用镍柱亲和层析法纯化重组GP蛋白。以DHOV阳性山羊血清为一抗,经Western-blot检测纯化蛋白后,以纯化的p ET-32a-GP为包被抗原,通过方阵滴定法优化反应条件,建立检测DHOV血清抗体的间接ELISA检测方法,评价其重复性、敏感性和特异性。采用建立的间接ELISA检测方法检测新疆部分地区采集的不同动物血清样本中DHOV抗体。结果显示,pET-32a-GP原核表达质粒构建正确,GP蛋白大小约为66.8 ku,反应原性良好;ELISA条件优化确定的最佳包被浓度为4μg/m L、一抗稀释度为1∶1000、一抗孵育时间为30min、二抗稀释度为1∶3000、二抗孵育时间为30 min、TMB显色时间为4 min;重复性试验结果表明,批内与批间变异系数(CV)均<10%;敏感性试验表明,当阳性血清稀释度为1∶1400时具有良好的敏感性;特异性试验表明,建立的间接ELISA检测方法检测GTV、CCHFV和TAMV时呈阴性反应;随机选取343份采于新疆不同地区的动物血清进行ELISA检测,检出48份血清结果呈阳性,阳性检出率为13.99%。该检测方法的建立为DHOV的流行病学分析提供了基础,为进一步研究DHOV GP蛋白的生物学功能、检测试剂盒的开发以及疫苗的研制提供了理论依据。
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关键词
dhori病毒
GP蛋白
原核表达
间接ELISA
原文传递
题名
Dhori病毒核蛋白抗原表位的筛选及鉴定
1
作者
张敏
古丽娜孜·沙都汉
刘利平
王岚
孙素荣
张渝疆
丁军涛
机构
新疆大学生命科学与技术学院
新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期956-962,共7页
基金
国家自然科学基金项目(No.81960369,No.81760365)。
文摘
目的研究鉴定DHOV核蛋白(NP)的最小线性B细胞表位(BCEs),为DHOV的疫苗研制和预防奠定基础。方法本研究针对DHOV-GRT169毒株NP蛋白进行生物信息学分析,采用改良生物合成肽法鉴定其BCEs。首先将DHOV NP蛋白截短为4个片段并鉴定其抗原性,将阳性片段继续截短成相互重叠8个氨基酸的16肽,将16肽序列分别克隆至原核表达载体pXXGST-3中表达,兔抗融合蛋白NP蛋白多克隆抗体作为一抗,用Western blotting检测16肽的抗原性,将检测出的阳性16肽都截短成相互重叠7个氨基酸的8肽,用同样的方法诱导表达及检测。最后用生物信息学方法分析每个BCEs在NP蛋白三维结构中的位置。结果从NP蛋白中最终鉴定出9个BCEs,分别为Enp1(^(3)NPTPKR^(8))、Enp2(^(7)KRAEPGD^(13))、Enp3(^(83)YUFFFL^(88))、Enp4(^(111)NQTLTDE^(117))、Enp5(^(224)QSQKAMLK^(231))、Enp6(^(227)KAMLKQIF^(234))、Enp7(^(418)LNAEFEEY^(425))、Enp8(^(421)EFEEYSKL^(428))、Enp9(^(432)GTGAFYER^(439)),均位于NP蛋白表面。结论这些鉴定的表位将提高对DHOV表位分布和致病机制的认识,为DHOV多表位检测抗原的开发提供基础,也可为DHOV感染与免疫机制研究提供理论依据。
关键词
蜱传
dhori病毒
核蛋白NP
改良生物合成肽法
最小抗原表位
Keywords
tick-borne
dhori
virus
nuclear protein NP
modified biosynthetic peptide method
minimal epitope
分类号
R373.3 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
基于Dhori病毒GP蛋白间接ELISA检测方法的建立
2
作者
汪烘宇
高赟
马晓芹
朱忠正
富玉姣
晁小珊
靳军霞
丁军涛
机构
新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期888-895,共8页
基金
国家自然科学基金项目(81960369,81760365)
新疆高校科研计划自然科学重点项目(XJEDU2019I002)。
文摘
本研究利用原核表达系统表达Dhori病毒(DHOV)糖蛋白(GP),以此为抗原建立间接ELISA检测方法。根据DHOV-GRT169毒株GP基因设计引物并扩增得到去除跨膜区与信号肽的基因片段,构建了重组表达质粒p ET-32a-GP,测序验证正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导表达。采用镍柱亲和层析法纯化重组GP蛋白。以DHOV阳性山羊血清为一抗,经Western-blot检测纯化蛋白后,以纯化的p ET-32a-GP为包被抗原,通过方阵滴定法优化反应条件,建立检测DHOV血清抗体的间接ELISA检测方法,评价其重复性、敏感性和特异性。采用建立的间接ELISA检测方法检测新疆部分地区采集的不同动物血清样本中DHOV抗体。结果显示,pET-32a-GP原核表达质粒构建正确,GP蛋白大小约为66.8 ku,反应原性良好;ELISA条件优化确定的最佳包被浓度为4μg/m L、一抗稀释度为1∶1000、一抗孵育时间为30min、二抗稀释度为1∶3000、二抗孵育时间为30 min、TMB显色时间为4 min;重复性试验结果表明,批内与批间变异系数(CV)均<10%;敏感性试验表明,当阳性血清稀释度为1∶1400时具有良好的敏感性;特异性试验表明,建立的间接ELISA检测方法检测GTV、CCHFV和TAMV时呈阴性反应;随机选取343份采于新疆不同地区的动物血清进行ELISA检测,检出48份血清结果呈阳性,阳性检出率为13.99%。该检测方法的建立为DHOV的流行病学分析提供了基础,为进一步研究DHOV GP蛋白的生物学功能、检测试剂盒的开发以及疫苗的研制提供了理论依据。
关键词
dhori病毒
GP蛋白
原核表达
间接ELISA
Keywords
dhori
virus
glycoprotein
prokaryotic expression
indirect ELISA
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Dhori病毒核蛋白抗原表位的筛选及鉴定
张敏
古丽娜孜·沙都汉
刘利平
王岚
孙素荣
张渝疆
丁军涛
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
下载PDF
职称材料
2
基于Dhori病毒GP蛋白间接ELISA检测方法的建立
汪烘宇
高赟
马晓芹
朱忠正
富玉姣
晁小珊
靳军霞
丁军涛
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
原文传递
已选择
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