PCR-DIG探针斑点杂交法快速检测SRY基因

以正常男性ＤＮＡ作为模板，用本文设计的ＳＲＹ基因的１对引物组合进行ＰＣＲ法制备ＤＩＧ探针，然后通过低熔点琼脂糖电泳回收将扩增产物纯化，得到ＳＲＹ基因探针。与其他制备探针的方法相比，此方法制得的探针产量和标记效率都很高，标记灵敏度达００１ｐｇ，片段长度均一，为２９０ｂｐ。在ＤＮＡ斑点杂交检测ＳＲＹ基因时显示了很好的特异性，显示这种方法可以同时对大量性反转病例进行临床检测。

DiG探针斑点杂交技术在检测乙型肝炎HBV DNA中的应用

我室收集1991年—1993年慢性乙肝和乙肝免疫指标阳性患者血清标本182例,用核酸分子杂交技术检测HBV DNA。182例标本HBV DNA阳性81例,阳性率44.5 %;91例慢性乙肝标本HBV DNA阳怀51例,阳性率56％;91例乙肝免疫学指标阳性标本,NBV DNA阳性30例.阳性率32.95。其中30例慢性乙肝、肝功能均异常.临床症状明显.HBV DNA阳性18例,阳性率60％。结果表明HBV DNA的存在与乙型肝炎,尤在慢性乙肝肝炎活动期间有着密切关系,可作为乙肝感染的特异性标志。

Dig标记探针原位杂交检测MSG-肝再生-大鼠下丘脑弓状核TGF-β_1mRNA

目的 通过建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑弓状核 (ARN)TGF β1mRNA的表达与神经内分泌免疫网络的关系。方法 用肝大部分切除MSG 大鼠的方法建立MSG 肝再生 大鼠模型 ,原位杂交技术检测MSG 肝再生 大鼠下丘脑弓状核 (ARN)TGF β1mRNA的表达。结果 发现MSG -肝再生 -大鼠ARNTGF - β1mRNA的表达显著上调 ,切除 11天达 2 0 9± 1 6 ,与生理盐水组 (11 1± 1 2 )和MSG -大鼠假手术组 (15 2± 1 1)比较 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论 MSG -肝再生 -大鼠神经 -内分泌 -免疫网络功能紊乱与其ARNTGF - β1mRNA表达失调密切相关。

应用Digoxigenin标记探针定量检测血清HBV DNA

本文报道采用非同位素Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记探针定量检测血清ＨＢＶＤＮＡ。显色膜经空气干燥、液体石蜡透明处理后，即可置酶联免疫检测仪上测定各斑点的光密度（ＯＤ）值，波长６３０ｎｍ。结果发现已知含量的ＨＢＶＤＮＡ在２－５００ｐｇ／样点范围内与其相应的ＯＤ值有着良好的线性关系（ｒ＝０．９７０ｙ＝０．００１２ｘ＋０．１０５６）。标本测得ＯＤ值后，便可知其含量。该法重复性试验结果良好，１１份ＨＢＶＤＮＡ阳性的血清经定量测定，其ＨＢＶＤＮＡ含量在２０－１０５ｐｇ／４０μｌ之间。定量检测血清ＨＢＶＤＮＡ不仅可用来评价乙肝治疗的效果，而且也可用于了解血清传染性的强弱。

核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒方法的建立及应用

以地高辛(DIG)标记鸡传染性支气管炎病毒(IBV)pol基因的保守片段制成核酸探针,与IBV参考株、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽流感病毒、正常鸡胚尿囊液及正常鸡肾组织等的RT-PCR产物进行斑点杂交,以检测探针的特异性,结果该探针仅与IBV毒株的RT-PCR产物杂交呈阳性,与对照病毒和组织的RT-PCR产物杂交呈阴性。敏感性试验显示,探针最低能检出约3.4pg的IBVRT-PCR产物。用该方法检测了38份疑似IBV临床病料,31份阳性;而用RT-PCR法扩增IBVS2基因确诊为阳性的只有29份。对人工接种IBV H52弱毒苗鸡咽喉和肛门拭子32份进行检测,检出15份阳性。结果表明,利用DIG探针检测IBV的RT-PCR产物,特异性和敏感性强,可重复,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性。

异羟基洋地黄毒甙配基核酸探针及其检测系统

原理 异羟基洋地黄毒甙配基(Digoxigenin,以下简称Dig,是从植物洋地黄中提取的固醇类半抗原物质。由连接臂共价结合到嘧啶环的5位上,构成Dig标记的核苷酸类似物Dig-11-dUTP。