诱导血管平滑肌细胞FRP基因表达的机制研究

目的:细胞基质蛋白FRP(Follistatin related protein,FRP)具有调节细胞增殖与迁移的功能,探讨诱导体外培养血管平滑肌细胞表达FRP的机制研究。方法:分离培养脐动脉和人乳内动脉血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cell,VSMC);确定植物雌激素类药物大豆苷元抑制VSMC增殖的最佳作用时间与浓度;鉴定雌激素受体α、β;给予大豆苷元、17-β雌二醇和雌激素受体完全阻断剂ICI182780刺激细胞,进行竞争性反转录PCR、Northern Blot和原位杂交探讨药物诱导FRP表达途径。结果:大豆苷元可抑制两种VSMC的增殖;脐动脉VSMC表达雌激素受体α,人乳内动脉VSMC表达受体α、β;大豆苷元和雌激素可显著诱导FRP在两种不同VSMC中的表达,ICI182780可抑制大豆苷元的诱导作用。结论:细胞基质蛋白FRP可被雌激素类药物通过其受体诱导。

HPLC法同时测定不同产地蔓性千斤拔中5个异黄酮成分的含量

目的:建立同时测定不同产地蔓性千斤拔药材中染料木素-4′,7-二-O-葡萄糖苷、大豆苷元-7-O-β-D-葡萄糖苷、染料木素-6-C-葡萄糖苷、5,4’-二羟基异黄酮-7-O-β-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、染料木苷5个异黄酮类化合物含量的高效液相色谱法。方法:采用Diamonsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长258 nm,柱温30℃。结果:染料木素4′,7-二-O-葡萄糖苷、大豆苷元-7-O-β-D-葡萄糖苷、染料木素-6-C-葡萄糖苷、5,4’-二羟基异黄酮-7-O-β-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷和染料木苷进样量分别在0.033~0.656μg(r=0.999 7)、0.010~0.204μg(r=0.999 5)、0.034~0.687μg(r=0.999 9)、0.012~0.244μg(r=0.999 7)和0.086~1.725μg(r=0.999 9)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为98.11%、94.27%、93.17%、93.13%和98.97%,RSD分别为1.0%、1.6%、1.4%、1.4%和1.8%。测得染料木素4′,7-二-O-葡萄糖苷、大豆苷元-7-O-β-D-葡萄糖苷、染料木素-6-C-葡萄糖苷、5,4’-二羟基异黄酮-7-O-β-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷和染料木苷的样品含量分别为0.112~0.192、0.047~0.072、0.110~0.170、0.074~0.115和0.437~0.703 mg·g^(-1)。结论:经方法学验证,本法可用于蔓性千斤拔药材的质量控制。