The DNA injury-repair of esophageal cancer EC109 cells to diallyl trisulfide (DATS) combining radiation

Objective: The aim of our study was to investigate the effect of diallyl trisulfide (DATS) combining radiation on DNA injury-repair of Esophageal cancer EC109 cells. Methods: Using 10 and 20 μg/mL DATS on EC109 cells, and taking X-ray radiation 24 h later. Investigate the radiosensitization effect of DATS on EC109 cells by clone formation, and the mechanism of DNA injury-repair by Comet Assay. Results: The clone formation resulted that DATS had radiosensitization effect on EC109 cells. Radiosensitization enhancement ratios of 10 and 20 μg/mL DATS in combination with radiation were 1.55, 1.64 (Do) and 1.43, 1.75 (Dq) respectively. In the comet assay, the TM (tail moments) of 20 μg/mL DATS combining radiation group lines at 0 h, 2 h, 6 h and 24 h were 7.16 ± 2.61, 3.65 ± 2.06, 2.09 ± 0.83, 1.45 ± 1.37 respectively. They were slightly increased than radiation group (0.95 ± 0.65, 0.11 ± 0.07, 0.1 ± 0.05, 0.11 ± 0.08) and DATS group (1.81 ± 1.23, 1.58 ± 1.40, 0.45 ± 0.25, 0.60 ± 0.40) (P < 0.01). The result showed that DATS combining radiation had the effect of increasing DNA damage and inhibiting DNA repair on EC109 cells. Conclusion: DATS has radiosensitization effect on Esophageal cancer EC109 cells. And the effect is probably related with DNA injury-repair.

大蒜素有效成分DATS对粪肠球菌抑制作用的体外研究

目的:观察大蒜素有效成分二烯丙基化三硫(DATS)对感染根管粪肠球菌生物膜的作用。方法:选取60颗健康单根管恒牙,45颗建立粪肠球菌感染根管模型。分为4组(n=15):阴性对照组(未感染组)、DATS组、氢氧化钙组和阳性对照(无抗菌处理)组。二倍稀释法测定DATS对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。分别于实验第1天、第3天和第7天,取根管内层牙本质粉末,置于2 mL BHI中培养72 h,电子比浊仪读取肉汤上层液体浊度。使用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。结果:DATS对粪肠球菌的MIC和MBC(μg/mL)分别为2 560和5 120。第1天,DATS组、氢氧化钙组、阳性对照组与阴性对照组浑浊度,DATS组小于氢氧化钙组(P<0.05);第3天时,DATS组与阴性对照组浑浊度无统计学差别(P=0.454),已基本杀灭细菌;第7天时,氢氧化钙糊剂组与阴性对照组有统计学差别(P<0.05),不能完全杀灭细菌。各时间点阳性对照组浑浊度最高。结论:DATS能够有效杀灭或抑制感染根管中的粪肠球菌。

DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β表达的信号转导机制。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测细胞核因子-κB(NF-κB)活性,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果LPS刺激MH-S细胞可导致TNF-α、IL-1β mRNA、p-IκB表达增加及NF-κB活性升高。用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0mg.L-1)预处理细胞30min后再给予LPS刺激,可使TNF-α、IL-1β mRNA表达降低,并呈剂量依赖性;升高的NF-κB活性及p-IκB表达均显不同程度的抑制。单独DATS对TNF-α、IL-1β mRNA表达及NF-κB活性无影响。结论DATS可通过抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达。

DATS通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α及IL-1β表达

目的探讨p38MAPK在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预,Western blot检测细胞p38及磷酸化p38(p-p38)的表达;用LPS和(或)SB203580孵育细胞,反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1βmRNA表达,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果 LPS刺激MH-S细胞可导致p-p38表达增加,呈时间依赖性;用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0 mg.L-1)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激,p-p38表达呈剂量依赖性下降;单独DATS对p-p38表达无明显影响。p38特异性抑制剂SB203580可剂量依赖性地抑制LPS诱导的p-IκB蛋白、TNF-α及IL-1βmR-NA表达。结论 DATS可通过抑制p38MAPK通路抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达。

高效液相色谱法测定大蒜素片中DADS和DATS的含量

建立并使用高效液相色谱法测定药用大蒜素片中二烯丙基二硫醚(Diallyl disulfide,DADS)以及二烯丙基三硫醚(Diallyl trisulfide,DATS)的含量。实验使用H ypersiL ODS C18柱进行色谱分离,流动相由甲醇/水/甲酸组成,比例为85∶15∶0.1。测定波长是225nm,流速为1.0 mg/L。实验结果表明,DADS在1.0~16.0mg/L浓度的范围内和峰面积有较好的线性关系,R^(2)=0.9991。DATS在1~40mg/L浓度的范围内和峰面积有较好的线性关系,R^(2)=0.9994。DADS的回收率在91.20%~98.80%,DATS的回收率在94.74%~106.39%。

大蒜油亚微乳的稳定性研究

目的 考察大蒜油亚微乳的稳定性。方法 采用HPLC法,以大蒜素(DATS)为指标性成分,分别对大蒜油亚微乳、大蒜油注射液进行高温高湿冷冻稀释试验以及加速试验,长期留样观察试验,并以粒径为指标观察物理稳定性。结果 在高温、光照条件下,亚微乳中大蒜素的含量有所下降,粒径无明显变化,同等条件下,DATS在注射液中的下降率几乎是在亚微乳中的2倍;冷冻条件下,含量无变化,而粒径显著增大。在2 5±2℃下避光条件下进行的加速试验和在6±2℃条件下进行的长期留样试验,各项检查指标基本无变化,稳定性良好。稀释试验表明不同稀释剂在10h内对乳剂的各项检查指标无显著影响。结论 大蒜油亚微乳的稳定性比大蒜油注射液的有所提高,但仍应在适宜温度下避光贮存,不得冷冻。

大蒜素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备工艺研究

目的:研制大蒜素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒并对处方与制备工艺进行优化筛选。方法:以生物降解型聚氰基丙烯酸正丁酯为载体材料,采用乳化聚合法制备大蒜素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒;以载药量、包封率、形态和粒径分布为评价指标,通过单因素试验考查、均匀设计法优化制备工艺。结果:按优化处方与制备工艺条件,制得纳米粒球形圆整、分散良好,算术平均粒径为113．4 nm,粒径分布范围为11．7-146．8 nm,载药量为18．57％,包封率为92.87％。结论:经优比筛选出的工艺是大蒜素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的最佳制备工艺。

大蒜素壳聚糖微球的研究

目的:研制大蒜素壳聚糖微球并对处方工艺进行筛选。方法:采用乳化交联法制备大蒜素壳聚糖微球,正交设计安排实验,使用人工神经网络优化微球的制备工艺。结果:制得的微球形状圆整,分散良好,算术平均径16.4μm,包封率20.83%,载药量5.79%。结论:制备的大蒜素壳聚糖微球粒径大小适宜,带有正电荷,可满足肺靶向微球的要求。

大蒜素自微乳的制备与质量评价

目的:制备大蒜素(DATS)自微乳制剂,并评价其质量。方法:采用伪三元相图法,以聚氧乙烯氢化蓖麻油RH-40为表面活性剂,无水乙醇为助表面活性剂,油酸为油相,绘制该系统的相图,在此基础上制备DATS自微乳;建立HPLC法测定DATS自微乳中DATS的含量;对自微乳的外观性状、相对密度、黏度、pH值、电导率、形态、粒径及粒度分布、Zeta电位、含量、配伍和稳定性等进行研究。结果:DATS自微乳为无色澄明液体,稳定性良好,相对密度为0.840 g.mL-1,黏度为5.447 mPa.s,遇水形成O/W型微乳,稀释250倍后电镜下观察成圆球形,平均粒径26.4 nm,Zeta电位0.398 mV,pH值5.62,电导率为8.37μs.cm-1,3批制剂的含量分别为31.77,31.45,32.15 mg.mL-1。DATS自微乳与葡萄糖注射液、氯化钠注射液等配伍稳定。结论:DATS自微乳制备工艺简单,性质稳定,质量易控。

大蒜素包被支架术后冠状动脉管壁原癌基因c-fos表达的变化

目的探讨大蒜素(DT)包被支架置入后对血管内膜增生及管壁原癌基因c-fos表达的影响。方法直接支架置入术建立犬冠状动脉内膜损伤模型,观察血管形态学变化,并用RT-PCR方法检测不同时点冠状动脉壁内c-fos基因的表达丰度。结果单纯蛋白包被支架置入后4周管壁内膜明显增生,DT包被支架明显抑制内膜增生。对照组c-fos基因在术后1d有大量的表达,7d达高峰,以后随时间的推移表达逐渐下降,28d仍可检出。与对照组相比,各时点DT包被支架均显著抑制c-fosmRNA的表达。结论DT包被支架具有抑制c-fos基因的表达与内膜增生的作用。

GC/MS法分析影响大蒜油活性成分的几个因素

用GC/MS法对大蒜油提取前大蒜发酵的温度、时间、加水量、pH及大蒜新鲜度对大蒜新素(三硫化二烯丙基)和大蒜辣素(二硫化二烯丙基)的影响进行了实验研究。结果表明,大蒜泥在70℃发酵2h,大蒜新素和大蒜辣素的含量最高,加水发酵不利于大蒜新素和大蒜辣素的生成,pH在4～9变化对结果影响不大,放置6个月的大蒜有效成分下降2/3。

二烯丙基三硫对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预。酶联免疫吸附法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1α(IL-1β)浓度。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1βmRNA表达。结果LPS1 mg/L)孵育细胞1、2、3、6 h,TNF-α、IL-1β的蛋白生成及其mRNA表达均较对照组明显增加(P＜0．01),呈时间依赖性。用DATS(0．1、0．5、2．5、5．0 mg/ L)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激3h,可使TNF-α、IL-1β含量及其mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖性,其中TNF -α含量仍高于对照纽(P＜0．05),但IL-1β含量在2．5、5 mg/L DATS作用下可降至对照组水平。单独DATS对TNF-α及IL -1β的生成及其mRNA表达无明显影响(P＞0．05)。结论DATS通过抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α、IL-1βmR- NA表达而减少其蛋白生成,具有直接的抗炎效应,这是DATS预防ALI发生、减轻肺组织损伤的重要机制。

二烯丙基三硫化物包被支架术后冠状动脉管壁基质金属蛋白酶2及其抑制物表达的变化

目的探讨二烯丙基三硫化物包被支架对犬冠状动脉基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶组织抑制物2表达的影响。方法利用犬冠状动脉置入过大支架致内膜损伤,建立血管狭窄的动物模型。28个支架平分为基础对照组(单纯蛋白包被支架)和二烯丙基三硫化物治疗组(二烯丙基三硫化物包被支架),分别置入14只杂种犬的冠状动脉前降支或回旋支,未置入支架的另一支冠状动脉作为正常对照组(n=14)。在不同时点(5 h,1、7、14天和28天)处死动物,术后4周的血管标本做病理切片,部分组织抽提总RNA,应用RT-PCR方法测定不同时点冠状动脉壁内基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶组织抑制物2的表达。结果与基础对照组相比,4周后二烯丙基三硫化物包被支架组显著抑制新生内膜的形成(P<0.01),面积狭窄率显著降低(P<0.01);与基础对照组相比,在5 h、1、14天和28天二烯丙基三硫化物包被支架显著抑制冠状动脉壁内基质金属蛋白酶2 mRNA的表达(P<0.05)。在5 h、1天和14天3个时点,二烯丙基三硫化物组与基础对照组基质金属蛋白酶组织抑制物2的表达差异无显著性;在7天和28天,二烯丙基三硫化物组基质金属蛋白酶组织抑制物2的表达明显高于对照组(P<0.05)。结论二烯丙基三硫化物包被支架明显抑制基质金属蛋白酶2基因的表达和增加基质金属蛋白酶组织抑制物2基因的表达,这可能是二烯丙基三硫化物抑制内膜增生的机制之一。

大蒜素对IgA肾病模型大鼠Th1／Th2免疫平衡的影响

目的探讨Th1／Th2免疫平衡在IgA肾病发病中的影响和大蒜素对IgA肾病的治疗作用。方法选取雌性SD大鼠30只，随机分为对照组、模型组、大蒜素高剂量组、大蒜素低剂量组和泼尼松组。药物干预8周，观察各组大鼠肾脏病理学变化，ELISA法检测血清白细胞介素-4、干扰素-γ含量，对检测结果进行分析。结果与模型组比较，大蒜素高、低剂量组血清白细胞介素-4水平均明显下降（均为P=0．0001〈0．01），而两纽间无明显差异（P〉0．05），泼尼松组下降效果不明显（P=0．071〉0．05）。与模型组比较，大蒜素高、低剂量组血清干扰素-1水平均明显升高（分别为P高剂量组=0．016，P低剂量组=0．022，均P〈0．05），而两组间无明显差异（P〉0．05），泼尼松组升高效果不明显（P=0．563〉0．05）。大蒜素高、低剂量组肾组织光镜病理学改变及免疫荧光与模型组相比均明显减轻。结论大蒜素可以使IgA肾病大鼠血清中白细胞介素－4水平下降，干扰素－1水平上升，从而调节IgA肾病大鼠的Th1／Th2细胞平衡紊乱，减少系膜区IgA免疫复合物沉积，减轻肾脏病理改变，达到治疗IgA肾病大鼠的目的。

大蒜活性成分二烯丙基三硫化物调控Wnt通路抑制香烟烟雾增强的胃癌干细胞干性

目的:探讨大蒜活性成分二烯丙基三硫化物(diallyl trisulfide,DATS)能否干预香烟烟雾促进的SGC-7901源胃癌干细胞干性,并探究Wnt通路在其中的作用。方法:用不同浓度(0%、0.25%和0.50%)的香烟烟雾悬液和DATS单独或联合处理SGC-7901源胃癌干细胞7 d,显微镜下观察胃癌干细胞球大小及数量的变化,实时定量PCR及蛋白质印迹检测干性基因NANOG、OCT-4、SOX2、LIN28的mRNA和蛋白表达;香烟烟雾悬液、DATS和氯化锂单独或联合处理胃癌干细胞,蛋白质印迹检测干性基因及Wnt通路相关蛋白表达的变化。结果:DATS能明显抑制香烟烟雾促进的胃癌干细胞球的形成及干性基因NANOG、OCT-4、SOX2、LIN28的mRNA和蛋白表达;蛋白质印迹结果显示,DATS能抑制香烟烟雾诱导的β-连环蛋白、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)表达异常;氯化锂能增强NANOG和OCT-4的表达,与对照组相比,DATS和氯化锂联合处理组GSK3β蛋白表达水平下调,而β-连环蛋白表达水平上调,同时NANOG和OCT-4的蛋白表达水平上调。结论:DATS能抑制香烟烟雾促进的SGC-7901源胃癌干细胞干性,Wnt通路在其中发挥重要作用。

大蒜素微球体外释放研究

目的:研究聚乳酸大蒜素微球释放规律。方法:采用动态透析技术研究聚乳酸大蒜素微球的体外释药性能,并用高效液相色谱法测定大蒜素含量,以累计释药百分率进行不同模型的拟合。结果:聚乳酸大蒜素微球的释放曲线符合双相动力学方程。结论:聚乳酸大蒜素微球具有良好的缓释作用。

一种新型介孔二氧化硅-硫化氢控释纳米微球的构建和评价

目的目前的硫化氢(H2S)研究仍缺乏理想的供体。本研究旨在利用介孔二氧化硅纳米粒子(MSN)合成一种新型的控释H2S供体,并评价其在体外实验中释放H2S的特点。方法溶胶-凝胶法制备均一大小的MSN,将二烯丙基三硫化物(DATS)负载至MSN孔道中,合成控释H2S系统(DATS-MSN)。分析其表征、释放H2S的特点、细胞毒性和细胞摄取能力。结果 DATS-MSN可在体外缓慢、持续、可调节的释放H2S。其可被心肌细胞成功摄取,在常规应用的浓度范围内未见明显细胞毒性。结论 DATS-MSN可在体外环境中缓慢而可控的释放H2S,并具备良好的体外安全性,是H2S体外研究的良好工具。