马蹄金(Dichondra repens Forst.)组织培养和快速繁殖

为了探究马蹄金组织培养及快繁技术,本研究以马蹄金为材料,使用75%的酒精和10%NaClO对不同外植体(胚根,下胚轴,子叶)进行消毒处理,在不同激素浓度配比的MS培养基中进行丛生芽诱导、愈伤组织诱导及分化,成功建立了马蹄金的组培快繁体系。结果表明:利用马蹄金下胚轴为外植体直接诱导不定芽效果较好,其最适程序为:流水冲洗30 min+75%酒精30 s+10%NaClO 9 min,污染率为5%,成活率为75%;下胚轴不定芽诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,诱导率为93.55%,出芽指数为8.86;胚根愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%,下胚轴愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA,诱导率为95.24%,子叶愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%;愈伤组织不定芽分化的最适培养基为1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,芽诱导率为20%,平均芽数为12.83;组培苗诱导生根的最适培养基为不加激素的1/2MS培养基;生根苗以瓶盖全开的炼苗方式移栽到以河沙为基质的育苗盒中成活率为100%,且添加蒸馏水与自来水对植株生长并无明显影响。本研究成功建立了马蹄金组织培养与快繁体系,为马蹄金种质资源改良及优质种苗生产提供了技术参考。

Box-Behnken响应面法优选低共熔溶剂提取马蹄金总黄酮工艺

目的 优选低共熔溶剂提取马蹄金总黄酮的工艺。方法 以低共熔溶剂体系摩尔比、含水量、超声功率、超声时间为单因素变量,以马蹄金中黄酮类成分提取率为评价指标,采用Box-Behnken响应面法优选总黄酮提取工艺,并进行验证试验。结果 优选的提取工艺为低共熔溶剂氯化胆碱-乳酸(摩尔比1∶2),含水量为70%,超声(功率为180 W)提取30 min。验证试验结果显示,在此条件下的总黄酮提取率与回归模型预测值的相对误差为0.55%。结论 该优选工艺操作简便、重复性好,可用于马蹄金总黄酮的提取。

马蹄金愈伤组织诱导及植株再生研究

以马蹄金无菌苗的下胚轴、子叶和叶片作为外植体 ,结合不同植物生长调节剂组合和不同基本培养基 ,探讨了马蹄金离体培养的方法和影响因素。结果表明 ,不同植物生长调节剂组合的培养基对愈伤组织诱导频率有显著影响 ,以MS培养基作愈伤组织诱导的基本培养基效果较好 ,使用MS +1.0mg/L 2 ,4 -D +0 .2mg/L6 -BA或MS +1.0mg/L 2 ,4 -D +0 .2mg/LKT作为愈伤组织诱导培养基 ,对 3种外植体愈伤组织诱导的效果均较好 ,出愈率均为 10 0 % ,而且愈伤组织质地好、生长旺盛 ,再用MS +0 .1mg/L 2 ,4 -D +2 .0mg/L 6-BA +3.0mg/LAgNO3 作愈伤组织分化培养基出苗效果最佳 ,愈伤组织分化频率达 2 0 .7%。

马蹄金叶片中铜、铅含量及其对生理指标的影响

研究了草坪草马蹄金对不同污染土壤的Cu、Pb含量 .结果表明 ,马蹄金体内Cu含量 (4 4 8mg·kg-1)高于Pb含量 (2 5 5 9mg·kg-1) 两种元素在体内的分布特征是根、茎 >叶 (P <0 0 5 ) ,并随着土壤内重金属含量增加而增加 ,但富集系数呈下降趋势 ;马蹄金对Cu的富集系数 (0 784 )高于Pb的富集系数(0 4 6 5 ) .自然状态下不同程度Cu、Pb复合污染对马蹄金叶片细胞膜及细胞保护系统的影响结果表明 ,随着Cu、Pb浓度增加 ,叶片内叶绿素a、叶绿素a/b分别由 1 6 10mg·g-1FW和 4 10 0下降到 1 0 17mg·g-1FW和 2 2 99;SOD活性先升高至 10 6 4 94U·g-1FW ,随后下降至 86 2 5 8U·g-1FW ;POD活性则逐渐增加 ;

民族药马蹄金提取物对小鼠肝损伤的保护作用

目的 :观察马蹄金提取物对四氯化碳 (CCl4)所致小鼠肝损伤的保护作用。方法 :以不同浓度不同剂量的CCl4 给予小鼠 ,造成肝损伤模型 ,分别检测在CCl4 损伤肝脏 16h ,7d ,3周后的血清酶学有关指标及对肝脏作病理学的检查。结果 :马蹄金提取物各剂量组 (3 2 .5,16.3 ,8.2 g·kg- 1)经连续灌胃给药后 ,对因CCl4 所致的血清转氨酶 (ALT、AST)的明显升高均有不同程度的降低作用 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。病理切片显示药物治疗组的肝损伤程度较模型组明显减轻。结论 :马蹄金提取物对CCl4 所致小鼠化学毒性的肝损伤 ,具有一定的保护作用。

马蹄金中铁、钙、镁、铜、锌、锰、镍的形态分析

目的:研究马蹄金全草中微量元素的存在形态。方法:采用超声波提取,电感耦合等离子发射光谱法(ICP-AES)对马蹄金不同形态中 Fe、Ca、Mg、Cu、Zn、Mn、Ni 等元素进行分析。结果:Fe 元素在马蹄金中含量最高,而 Cu 元素含量最低;Ca 的提取率最高,Fe 的提取率最低;Ca、Mg、Cu、Zn、Mn、Ni 6种元素的可溶态均大于悬浮态;且渣中的微量元素含量较高。结论:马蹄金中的微量元素是以无机态为主,多种形态共存的复杂体系。

野生和栽培马蹄金抗旱性比较及其抗旱机制初探

为了鉴别野生和栽培马蹄金(Dichondra repens)的抗旱性,探讨其抗旱适应性的生理机制,对野生和栽培马蹄金进行了土壤水分胁迫处理,系统测定了野生和栽培马蹄金叶片内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、硝酸还原酶的活性和游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白、NO2-/NO3-含量以及总DNA片断化程度。结果表明野生和栽培马蹄金在抗旱适应性上存在显著差异。随水分胁迫强度的增加,野生马蹄金叶片内抗氧化酶活性及其升高幅度,渗透调节物质的积累量及积累速度均高于栽培马蹄金,而叶片含水量下降的程度、DNA片断化程度低于栽培马蹄金,其中野生和栽培马蹄金叶片内NO2-/NO3-含量,硝酸还原酶的活性变化差异尤其显著,野生马蹄金叶片内的NO2-/NO3-含量、硝酸还原酶的活性明显高于栽培马蹄金,二者最大含量分别相差10和2.2倍。研究结果说明了野生马蹄金对干旱环境的适应性强于栽培品种;在干旱逆境下马蹄金叶片内的NO2-/NO3-含量的变化在一定程度上可能反映了内源NO的变化,内源NO浓度的高低可能是野生和栽培马蹄金不同抗性的真正原因。

低温胁迫对马蹄金抗性生理生化指标的影响

在低温胁迫下,马蹄金叶片内游离脯氨酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛含量均发生明显变化。低温处理过程中,随温度降低脯氮酸含量先增后减,在5℃和0℃时,脯氨酸含量处理48h比处理24h有所增加,在-5℃时,2种处理结果差异不明显。随温度降低SOD活性也呈先增后减趋势;在0℃和5℃时,SOD活性处理48h比处理24h高,而-5℃时结果相反。丙二醛含量随温度降低呈递增趋势。

马蹄金中黄酮成分分析

为了进一步开发利用马蹄金的资源,用光谱法对马蹄金中黄酮类成分进行定性分析和定量测定,并利用正交设计优选马蹄金中总黄酮的提取条件。结果表明,马蹄金中含有黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类等多种黄酮成分。总黄酮提取的最佳条件是:用70%乙醇在50℃下超声波提取1.5h、提取体积80mL、提取一次。马蹄金中总黄酮的含量为0.937%,平均回收率为100.3%,RSD=0.38%(n=6)。此结果为马蹄金药效功能的进一步研究和资源开发利用提供科学依据。

野生马蹄金无性系构件种群组成及生物量结构变异性

对我国23份野生马蹄金的无性系种群构件数量、质量性状及生物量结构进行比较分析,结果表明:不同种群构件的表型性状与数量呈现出变异性。单叶叶面积和叶柄长的变异系数较大,分别为39.35%和39.01%;叶长与叶宽变异系数都在20%以上;叶柄直径和叶片厚度的变异系数分别为14.80%和16.29%;匍匐茎长度的变异系数为27.29%,分枝数变异系数高达67.46%,间隔子长度、直径和数目以及根系的深度、直径变异系数较小;生物量结构方面,单位面积茎生物量、叶生物量和果实生物量的变异小,表明在一定环境中具有一定的可塑性。

不同外植体对马蹄金愈伤组织诱导及分化的影响

从不同外植体的生长时间、切取方式和光照条件诸因素探讨了对草坪地被植物马蹄金Dichondrarepens愈伤组织诱导及分化的影响作用。结果表明 :下胚轴和子叶的生长时间只对愈伤组织诱导的始愈时间和生长势有影响 ,生长期越短 ,则始愈时间缩短 ,愈伤组织生长势强 ,而对出愈率、愈伤组织状态和愈伤组织分化率无明显作用 ;光照和黑暗培养只对下胚轴诱导愈伤组织的生长状态有影响而对子叶诱导愈伤组织无作用 ;外植体的不同切取方式对愈伤组织诱导的始愈时间有影响 ,经切取后可缩短始愈时间 ;仅从完整子叶离体培养诱导愈伤组织获得了再生植株 ,其分化频率为 13 9%～ 18 6 %。

壳聚糖对马蹄金种子萌发及幼苗抗性相关的酶活性的影响

为了提高马蹄金种子的发芽率,增强植株的抗逆性,加速品种推广,改善草坪质量,采用不同浓度壳聚糖溶液处理马蹄金种子并进行萌发和栽培试验。统计了种子的发芽率、幼苗的株高、地上部植株鲜重、根长、根重和根冠比,并对幼苗的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)四种抗性相关酶的活性进行了测定。结果表明:0.8g/L壳聚糖处理与对照相比发芽率降低,其余浓度的壳聚糖对马蹄金种子萌发和幼苗生长具有明显的促进作用;随着处理浓度的提高,各酶的活性有所升高,0.5g/L达到最佳,但浓度进一步增大,却又表现出一定的抑制作用。试验说明,用适量浓度的壳聚糖溶液对马蹄金浸种,可以提高种子的发芽率,改善苗期的生长状况,提高幼苗的抗逆性,缩短成坪时间。

不同光照强度对马蹄金叶的特征及总黄酮含量的影响

以马蹄金叶为研究对象,利用遮荫网设置光照梯度(透光率分别为:对照100%、76.19%、59.27%、38.09%),对其形态特征及总黄酮含量进行测定和分析。结果表明:(1)随着光照强度的降低,马蹄金叶片的长度、宽度及厚度均表现出先增大后减小的趋势,在76.19%透光率下达到最大值;叶柄长度随着光强的减弱而增长,叶片的形态并未发生显著变化。(2)光照强度对马蹄金叶片总黄酮含量有影响,透光率为76.19%时,马蹄金叶中总黄酮含量最高。分析表明76.19%的透光率有利于马蹄金的生长并能提高马蹄金叶中总黄酮的含量。

草坪草马蹄金与结缕草种子萌发期抗旱性比较

通过不同浓度分子量为6 000的聚乙二醇(PEG)溶液模拟干旱的方法及不同土壤含水量下成坪速度的试验,比较了马蹄金Dichondra repens与结缕草Zoysia japonica种子萌发期抗旱性强弱。结果表明,马蹄金、结缕草的发芽势随干旱胁迫强度的增加呈下降趋势,马蹄金比结缕草更易受影响,导致出芽整齐度降低;马蹄金种子萌发期抗旱性临界值为-11 bar,结缕草为-7 bar,若以发芽率作为抗旱性衡量标准,则马蹄金种子萌发期抗旱性比结缕草强;短期的轻度土壤水分胁迫有利于马蹄金和结缕草的成坪,严重土壤水分胁迫使成坪速度明显减慢,且结缕草比马蹄金更易受影响。

民族药马蹄金中多羟基化合物的研究

目的 研究马蹄金全草的活性成分。方法 利用各种色谱技术进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果 从马蹄金全草中分离得到5个糖类化合物,分别鉴定为(2R,3R)-2,3-二羟基-2-甲基-γ-丁内酯(Ⅰ)、3,5-二羟基-γ-戊内酯(Ⅱ)、(2S,3R)-1,2,3,4-四羟基-2-甲基丁烷(Ⅲ)、(3R)-2-羟甲基-1,2,3,4-四羟基丁烷(Ⅳ)和甘油三乙酸酯(Ⅴ)。结论 化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ均为首次从该植物中分得,化合物Ⅰ具有一定的抗乙肝病毒(HBV)作用。

马蹄金的解热利胆作用及其对免疫功能的影响

目的 :观察马蹄金的解热、利胆作用及其对免疫功能的影响。方法 :用蛋白胨造成大鼠致热模型 ,测定其降温作用 ;以大鼠总胆管引流法 ,测定各时间段胆汁流量 ;按小鼠免疫器官重量及当日体重 ,计算胸腺及脾脏指数 ;用小鼠碳粒廓清法计算K及α值而观察吞噬功能 ;并进行小鼠血清溶血素水平的测定。结果 :经t检验显示 ,该药大剂量组 (32 5g·kg-1)有明显降温作用 ;各剂量组均可明显增加胆汁流量 ;明显增加免疫器官重量及指数 ,增强吞噬功能 ,使K及α值提高 ,且明显升高血清溶血素水平。结论 :马蹄金对动物有较明显的解热及利胆作用 。

5份西南野生马蹄金材料的光合特性比较

以5份西南野生马蹄金Dichondra repens(SD09、SD10、YD03、GD03、SD11)为材料,用美国LI-6400便携式光合测定系统测定其光合日变化,比较5份西南野生马蹄金材料光合特性差异。试验结果显示:1)在自然光照条件下,5份材料的净光合速率(Pn)日变化均呈双峰型,高峰和次峰分别出现在12:00和16:00,有典型的"午休"现象。2)5份材料的单位面积蒸腾速率(Tr)和有效水分利用率(WUE)日平均值均存在差异,其中,SD10 Tr日平均值远高于其他材料,属于强蒸腾材料;SD11的WUE最高,该材料能在吸收等量水分的情况下,比其他材料生产出更多的生物量。5份野生马蹄金材料对光适应性不同,其中GD03的光饱和点(LSP)和光补偿点(LCP)分别为1 051和28.2μmol/(m2.s),为高LSP、低LCP植物,既具备优越的耐荫能力,又能适应较强的阳光辐射,且其坪用特性优异,可作为优良草坪草种质资源进一步研究。

光照强度对马蹄金保护酶活性和光合特性的影响

通过盆栽试验,利用遮荫网设置光照梯度(透光率分别为100%、76.19%、59.27%、38.09%),研究了光照强度对马蹄金生理指标和光合特性的影响。结果表明,随着光照强度的降低,马蹄金叶片中SOD、POD、CAT活性均逐渐增大;O2-含量和MDA含量均呈下降趋势,说明高度遮荫马蹄金叶片膜系统受到伤害;叶绿素a和叶绿素b均表现出上升的趋势,叶绿素a与叶绿素b的比值逐渐下降;光合有效辐射、净光合速率和蒸腾速率逐渐降低。光合有效辐射均呈"单峰"型,最高峰出现在13∶00。遮荫条件下T1处理蒸腾速率最大。高度遮荫不利于马蹄金的生长。

镉胁迫对白三叶和马蹄金种子萌发的影响

采用不同浓度的镉处理白三叶和马蹄金种子,研究两者萌发阶段对镉胁迫的反应。结果表明:镉浓度低于5mg/L时促进了白三叶和马蹄金种子的萌发。镉浓度为10mg/L时,白三叶发芽率和活力指数开始下降,而马蹄金依然高于对照。随镉处理浓度的继续增高,两者种子发芽率和活力指数逐渐下降。两个草种相比较,在相同镉胁迫作用下,马蹄金比白三叶表现出了较强的耐镉性。

西南地区野生马蹄金无性繁殖特性研究

采用野生马蹄金Dichondra repens(SD200310、SD200411、GD200504、SD200304)为材料,研究了无性系构件克隆生长的时间动态、形态、空间构型等。结果表明:1)主茎增长率随时间推移而下降,空间扩展依赖源株和早生分株、叶片的贡献;2)移植植株生长和茎叶扩展之间对物质能量的需求变换,导致了无性系的生长格局及无性系构件和生物量在空间上的分配与配置差异;3)以5 cm×5 cm草皮间铺栽植在密度为D2(40 cm×40 cm)时,主茎长(22.33 cm)、叶片数(28.38片)、节数(24.76节)和节长(1.42 cm)的均值达最大值,呈最佳生长状态,为合理的建植密度;4)随密度增加,间隔子长度递减,分枝角度增加,分枝强度减小,体现了在密度影响下的可塑性变化。