老年慢性心力衰竭患者血清卵泡抑素样蛋白1、Dickkopf相关蛋白3水平与心室重构及预后的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清卵泡抑素样蛋白1(FSTL-1)、Dickkopf相关蛋白3(DKK3)水平与心室重构及预后的关系。方法选取庐江县中医院2020年3月至2022年3月收治的142例老年CHF患者为研究对象(CHF组),根据纽约心脏协会(NYHA)心功能分级将CHF患者分为Ⅱ级(61例)、Ⅲ级(46例)、Ⅳ级(35例),根据随访结果将CHF患者分为预后不良组(48例)和预后良好组(94例)。另将同期在我院体检健康者142例作为对照组。ELISA法测定血清FSTL-1、DKK3水平;彩色多普勒超声测定患者心功能指标。比较CHF组与对照组、不同心功能分级及不同预后CHF患者血清FSTL-1、DKK3水平;血清FSTL-1、DKK3水平与心功能指标间的关系采用Pearson相关性分析;CHF患者发生预后不良的影响因素采用Logistic回归分析;采用ROC曲线分析血清FSTL-1、DKK3对老年CHF患者预后不良的预测价值。结果CHF组患者血清FSTL-1水平、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心房内径(LAD)、左心室质量指数(LVMI)高于对照组,左心室射血分数(LVEF)及血清DKK3水平低于对照组,差异有统计学意义(t=35.771、39.686、25.148、14.262、35.767、18.208,P<0.05)。随着NYHA分级的增加,CHF患者血清FSTL-1水平及LVEDD、LAD、LVMI逐渐增加(F=86.720,239.493、114.340、16.883,P<0.05),血清DKK3及LVEF逐渐降低(F=89.083、217.157,P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清FSTL-1与LVEDD、LAD、LVMI均呈正相关(r=0.630、0.568、0.404,P<0.01),与LVEF呈负相关(r=-0.642,P<0.01);血清DKK3与LVEDD、LAD、LVMI均呈负相关(r=-0.580、-0.593、-0.467,P<0.01),与LVEF呈正相关(r=0.621,P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,心功能分级、LVEF、LVEDD、LAD、LVMI、FSTL-1、DKK3均是CHF患者发生预后不良的影响因素[OR(95%CI)=1.422(1.043~1.938)、0.621(0.401~0.961)、1.353(1.024~1.787)、1.227(1.023~1.472)、1.531(1.159~2.022)、1.472(1.095~1.979)、0.724(0.544~0.964),P<0.05]。ROC曲线结果显示,血清FSTL-1联合DKK3预测老年CHF患者预后不良的敏感度和特异度分别为86.8%、82.4%,AUC为0.959,高于FSTL-1、DKK3单独检测(Z=2.300、2.006,P<0.05)。结论老年CHF患者血清FSTL-1、DKK3水平与心室重构和预后密切相关,两者有望成为临床评估老年CHF患者心室重构情况及预后的生物学指标。

mi R-32-5p通过靶向Dickkopf相关蛋白3的表达调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的生物学行为

目的:通过生物信息学手段筛选乳腺癌中差异表达的关键miRNA及其靶基因,干预其在乳腺癌细胞中的表达并观察对乳腺癌细胞功能的影响。方法:利用GEO数据库筛选在乳腺癌中差异表达的miRNA,ENCORI数据库验证差异miRNA的表达,以选定最显著的差异表达miRNA为研究对象;利用Starbase、miRDB和miRWalk数据库预测miR-32-5p的靶基因,利用DAVID数据库对靶基因进行GO分析和KEGG分析,利用String数据库联合Cytoscape3.6.2软件进行PPI网络分析及核心基因的筛选,从核心基因中选择相互联系紧密"度值"最显著的Dickkopf相关蛋白3(DDK3)基因进行后续实验。qPCR检测miR-32-5p在人正常乳腺细胞MCF10A和人乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-453细胞中的表达。向MDA-MB-231细胞中转染miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor及各自的对照(NC)序列,分别用CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验检测过表达或抑制miR-32-5p对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果:从GEO数据库中获取的两个数据集共识别出两个差异miRNA,ENCORI数据库验证差异miRNA的表达发现miR-32-5p的表达水平与GEO数据库的结果一致,故选择其进行研究;预测得到198个miR-32-5p潜在的靶基因并鉴定出10个核心基因(DKK3、WNT2B、SFRP5、SFRP2、SFRP1、LRP6、WNT6、KREMEN1、NEDD4L、TRIP12),其中DKK3的度值最大可能在乳腺癌中较为重要,于是选择miR-32-5p/DKK3轴进行后续研究。miR-32-5p在3种乳腺癌细胞中的表达水平显著高于正常乳腺细胞(均P<0.01),其中以MDA-MB-231细胞中表达最高。双荧光素酶基因报告实验验证了miR-32-5p与DKK3基因的靶向结合及其对后者表达的负向调控。转染miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor后成功提高或抑制了MDA-MB-231细胞中miR-32-5p的表达。与对照组相比,过表达miR-32-5p可抑制MDA-MB-231细胞的凋亡而促进细胞增殖和侵袭(P<0.05或P<0.01),敲低miR-32-5p则起相反的作用(均P<0.01)。结论:miR-32-5p/DKK3轴可能是影响乳腺癌发生发展的关键通路,过表达miR-32-5p能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡而促进细胞增殖和侵袭。

Dickkopf相关蛋白3在造影剂急性肾损伤中的应用价值分析

目的探讨Dickkopf相关蛋白3(DKK3)在预测冠心病介入造影或冠脉CTA后并发造影剂急性肾损伤(CI-AKI)的早期诊断价值。方法选取我院2019年9月至2020年10月就诊的640例冠状动脉造影或冠脉CTA患者,检测患者术前24 h和术后48~72 h的DKK3、尿微量白蛋白及肌酐水平,观察CI-AKI发生情况。结果640例患者中,38例(5.9%)患者出现CI-AKI,参照急性肾脏损伤网络(AKIN)标准,其中I期35例,II期3例。发生CI-AKI的受试者尿DKK3/creatinine比值较未发生CI-AKI的受试者高3.2倍(7.9 pg/mg vs.1.9 pg/mg,P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)分析曲线下面积(AUC)为0.62。在无临床明显慢性肾病的受试者[肾小球滤过率(eGFR)>60 ml/min,尿微量白蛋白肌酐(ACR)比值<30 mg/g]中,继发CI-AKI的DKK3/肌酐比值为5.6倍(7.9 pg/mg vs.1.4 pg/mg,P<0.05,AUC为0.63)。结论无论患者是否有明显的慢性肾病(CKD),冠心病介入造影或冠脉CTA术后,CI-AKI患者尿DKK3水平显著升高,对早期诊断CI-AKI具有较高的应用价值,可作为CI-AKI的首选检测指标之一。

尿Dickkopf相关蛋白3水平与脓毒症相关急性肾损伤相关性分析

目的通过回顾性研究探讨脓毒症引起的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患者的临床相关资料,分析Dickkopf相关蛋白3(Dickkopf Wnt signaling pathway inhibitor 3,DKK3)与脓毒症引起的AKI患者疾病发展的相关性。方法回顾性分析华北石油管理局总医院诊断为脓毒症有或没有AKI的患者80例,收集诊断时的患者血清及尿液样本以测量相关生物标志物。根据患者入院24h内最差值,应用序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA)评估患者器官功能衰竭情况。采用Logistic回归进行危险因素分析,卡方检验进行差异性比较,Spearman相关系数进行相关性分析,P<0.05有统计学意义。结果在入组的80例患者中,脓毒症相关AKI患者31例,脓毒症非AKI患者49例;脓毒症相关AKI患者尿DKK3中位水平843pg/ml,脓毒症非AKI患者DKK3中位水平76pg/ml;入组患者尿SOFA评分8~12分,中位评分9分。患者年龄、体温、尿DKK3水平、尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)水平、血浆B型脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)水平、血肌酐(serum creatinine,Scr)水平、血白细胞(white blood cell,WBC)水平及SOFA评分与脓毒症患者发生AKI相关,差异有统计学意义(P<0.05),且年龄、体温、尿DKK3水平、尿NGAL水平、血浆BNP水平,血Scr水平、血WBC水平与患者SOFA评分呈正相关(P<0.05)。结论尿DKK3水平升高与脓毒症患者发生AKI相关,并且尿DKK3水平越高,显示患者SOFA评分越高,预后越差,提示尿DKK3水平可能作为预测脓毒症AKI疾病发展的新的生物标志物。

Dickkopf相关蛋白3调控上皮细胞间质转化相关蛋白表达对前列腺癌PC3细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨Dickkopf相关蛋白3(DKK3)通过调控上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白表达对人前列腺癌PC3细胞凋亡、迁移和侵袭作用的影响。方法:选取2019年6月~2020年6月武汉大学人民医院确诊并进行前列腺癌根治手术的患者标本24例为研究对象,选择同期因良性前列腺增生行电切手术的患者标本24例为对照组,免疫组化法检测组织中DKK3表达情况。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测DKK3的mRNA表达水平,流式细胞术、MTT实验及Transwell实验测定过表达DKK3对前列腺癌细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响。Western blot法和qRT-PCR法测定过表达DKK3后EMT相关蛋白的表达变化。结果:前列腺癌组织较前列腺增生组织中DKK3表达明显降低。与正常前列腺上皮细胞系相比,前列腺癌PC3细胞中DKK3表达明显减少。与ctrl和NC组相比,ov-DKK3组细胞凋亡率显著升高,细胞增殖、细胞迁移和侵袭能力显著降低。ov-DKK3组中E-cadherin表达水平与ctrl和NC组相比表达升高,Vimentin和N-cadherin的表达水平较ctrl和NC组表达下降。结论:DKK3可以通过调控EMT相关蛋白的表达来影响前列腺癌PC3细胞的细胞凋亡及其迁移和侵袭能力。

人参皂苷Rg3调控Dickkopf相关蛋白3对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究人参皂苷Rg3对肝癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法:以人肝癌细胞系HepG2为研究对象,分为对照组(Control)、人参皂苷Rg3组(G-Rg3)、人参皂苷Rg3+Dickkopf相关蛋白3无关片段组(G-Rg3+DKK3-NC)以及人参皂苷Rg3+Dickkopf相关蛋白siRNA组(G-Rg3+DKK3-siRNA)。其中G-Rg3组细胞给予G-Rg3(40mg/L)干预48h;G-Rg3+DKK3-NC组细胞转染DKK3-NC 24h,后G-Rg3干预48h;G-Rg3+DKK3-siRNA组细胞转染DKK3-siRNA后,G-Rg3干预48h;Control组细胞正常培养。MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法检测DKK3、Wnt、β-连环蛋白(β-catenin)表达。结果:与Control组相比,G-Rg3组细胞凋亡指数显著升高(P<0.01)、细胞增殖显著降低(P<0.01)、DKK3表达显著升高(P<0.01),Wnt和β-catenin表达均显著降低(P<0.01);与G-Rg3组相比,G-Rg3+DKK3-siRNA组细胞凋亡指数显著降低(P<0.01)、细胞增殖显著增加(P<0.01)、DKK3表达显著降低(P<0.01),Wnt和β-catenin表达均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:G-Rg3能够抑制肝癌细胞增殖,促进凋亡,其机制与促进DKK3表达,抑制Wnt/β-catenin信号传导相关。

重组人Dickkopf相关蛋白3在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中的表达及其临床意义

目的探讨重组人Dickkopf相关蛋白3(DKK3)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达及其临床意义。方法纳入2017年12月至2019年12月恩施土家族苗族自治州中心医院收治的DLBCL患者56例,选取DLBCL组织和癌旁组织为检测标本。应用免疫组织化学法检测组织DKK3蛋白表达,并分析其与患者临床特征的关系;记录并比较DLBCL阳性和阴性患者的近期临床疗效和中位无进展生存期。结果免疫组织化学检测结果显示,DLBCL组织中DKK3蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织[42.86%(24/56)比83.93%(47/56)](χ^(2)=7.782,P<0.001)。临床分期Ⅰ-Ⅱ期的DKK3阳性表达率高于Ⅲ-Ⅳ期[57.14%(16/28)比28.57%(8/28)],国际预后指数评分0-2分的DKK3阳性表达率高于3-4分[52.78%(19/36)比25.00%(5/20)](P<0.05)。术后1年DKK3阳性表达的DLBCL患者的总有效率明显高于DKK3阴性表达患者[79.17%(19/24)比53.13%(17/32)](χ^(2)=4.051,P=0.044)。至随访结束,DKK3阳性表达的DLBCL患者中位无进展生存期长于DKK3阴性表达患者[(36±6)个月比(22±4)个月](P<0.01)。结论DKK3在DLBCL患者中低表达,与临床分期及国际预后指数评分有关,对预后判断也有积极意义,可作为DLBCL诊断和治疗的潜在靶点。

Dickkopf相关蛋白3甲基化对直肠癌细胞生物学行为的影响及其临床意义

目的:探讨Dickkopf相关蛋白3(DKK3)基因高甲基化对直肠癌增殖、迁移及侵袭的影响及其临床价值。方法:SW480、LOVO、HT29及HCT116等直肠癌细胞购自中国科学院细胞库。选择2016年1月至2016年12月直肠癌患者(直肠癌组)及直肠良性疾病患者(对照组)为研究对象。设计合成寡核苷酸序列(MON、UMON和CON)并转染至LOVO直肠癌细胞。采用甲基特异性PCR检测直肠癌患者(肿瘤组织、癌旁组织)、对照组直肠组织及直肠癌细胞系中DKK3基因甲基化状态;分析DKK3基因甲基化与临床病理因素、无进展生存期(PFS)及总生存期的关系;Transwell小室检测MON组、UMON组及CON组LOVO直肠癌细胞迁移及侵袭。两组间均数比较用独立样本t检验;多组间均数比较用单因素方差分析(组间比较用LSD-t检验)。Kaplan-Meier生存分析并采用Log-rank比较。结果:直肠癌组患者肿瘤组织DKK3基因甲基化率显著高于癌旁组织及对照组直肠组织(甲基化率分别72.2%、11.1%比12.0%),差异有统计学意义(χ^(2)=88.756,P<0.05)。SW480、HT29及HCT116等直肠癌细胞系中DKK3基因呈甲基化状态,而在LOVO直肠癌细胞中呈未甲基化状态。低+中分化、N2淋巴结转移、肿瘤最大径≥3 cm、T3+T4及Ⅲ+Ⅳ期患者DKK3基因甲基化率显著高于高分化、N0+N1淋巴结转移、肿瘤最大径<3 cm、T1+T2及Ⅰ+Ⅱ期患者(甲基化率分别79.31%比59.38%、86.11%比62.96%、83.67%比58.54%、83.33%比59.52%、82.76%比53.13%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.922、4.673、5.833、5.198、7.610,均P<0.05)。DKK3基因甲基化患者PFS及中位生存期显著低于DKK3基因未甲基化患者[PFS为(24.4±3.8)个月比(33.7±4.1)个月,中位生存期为(31.5±4.2)个月比(42.8±5.4)个月],差异有统计学意义(Log-rank=21.135、30.876,P<0.05)。MON组LOVO直肠癌细胞1~6 d细胞活力、细胞迁移数及侵袭数均显著高于UMON组及CON组LOVO直肠癌细胞[1 d的吸光度(A)值分别为0.21±0.03、0.14±0.03比0.15±0.04、2 d的A值分别为0.31±0.04、0.21±0.04比0.23±0.05、3 d的A值分别为0.42±0.05、0.29±0.05比0.28±0.06、4 d的A值分别为0.57±0.05、0.33±0.06比0.35±0.05、5 d的A值分别为0.71±0.08、0.45±0.06比0.44±0.07、6 d的A值分别为0.89±0.09、0.53±0.08比0.54±0.09,细胞迁移数分别为(687.1±23.5)、(287.5±15.4)个比(285.9±15.1)个;细胞侵袭数分别为(419.6±34.2)、(151.7±14.9)个比(152.6±15.5)个],差异有统计学意义(F=11.382、13.263、14.651、16.128、19.877、21.235、44.981、37.247,P<0.05)。结论:DKK3基因高甲基化可促进直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭,有助于直肠癌病情及预后评估。

微小RNA-425调控重组人Dickkopf相关蛋白3对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-425靶向调控重组人Dickkopf相关蛋白3(DKK3)在膀胱癌细胞中对凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选取2017年1月—2019年8月武汉大学人民医院收集的32例膀胱癌组织及癌旁组织样本作为研究对象,采用qRT-PCR法检测膀胱癌组织及癌旁组织中miR-425表达水平;在膀胱癌T24细胞中采用慢病毒建立对照miRNA和miR-425敲降细胞株(NC inhibitor组和miR-425 inhibitor组),采用Western Blot和qRTPCR法检测细胞中DKK3的蛋白及mRNA表达水平,采用生物信息学和荧光素酶报告实验测定miR-425和DKK3的相关性,分别采用双染法流式细胞术、划痕实验、Transwell实验观察细胞凋亡、迁移和侵袭水平的改变。组间比较采用t检验。结果:miR-425在膀胱癌组织中的表达水平(4.29±0.32)高于癌旁正常组织(1.32±0.21),差异有统计学意义(t=43.895,P<0.05)。miR-425表达水平与肿瘤的组织学分级和肿瘤直径相关(P<0.05)。生物信息学和荧光素酶报告实验验证了DKK3是miR-425的下游靶基因。与NC inhibitor组DKK3蛋白(0.23±0.04)和mRNA(1.00±0.18)表达水平相比,miR-425 inhibitor组DKK3蛋白(0.72±0.06)和mRNA(3.21±0.25)表达水平明显增加,差异有统计学意义(t=11.769,P<0.05;t=12.426,P<0.05)。与NC inhibitor组[凋亡率(10.70±1.34)%]相比,miR-425 inhibitor组凋亡水平[(25.20±1.89)%]显著增加,差异有统计学意义(t=10.840,P<0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-425 inhibitor组迁移和侵袭数量显著降低,差异有统计学意义(分别为:t=-4.745,P<0.05;t=-9.784,P<0.05)。结论:miR-425在膀胱癌T24细胞中通过靶向DKK3表达,影响细胞凋亡、增殖和侵袭能力。

Yes相关蛋白(YAP)通过激活PI3K/AKT通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中表达及与cSCC侵袭和迁移中的作用。方法通过免疫组织化学染色法检测cSCC、鲍温病(BD)、癌旁正常皮肤组织中YAP的表达水平,并分析与临床病理参数之间的关系;利用慢病毒转染构建YAP基因敲低的A431稳定细胞株,利用四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽检测A431细胞微丝分布和数量,Transwell TM实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测A431细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色法观察敲低YAP后上皮间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、锌指转录因子Snail的表达;Western blot法检测E-cadherin、Snail、β-catenin、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、核糖体蛋白S6(S6)、磷酸化S6(p-S6)、4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化的4EBP1(p-4EBP1)的表达。结果YAP在cSCC和BD中表达显著高于癌旁正常皮肤组织;cSCC中YAP高表达与肿瘤大小、分化程度、侵袭程度密切相关,与患者的性别、年龄、发病部位、形态类型、是否神经脉管侵犯不相关;敲低A431细胞中YAP后,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力降低,细胞微丝变细、伪足变少;E-cadherin表达增加,Snail和β-catenin蛋白表达降低,p-AKT、p-S6及p-4EBP1蛋白表达降低。结论YAP在cSCC中高表达,YAP激活PI3K/AKT信号通路促进cSCC的侵袭、迁移及EMT过程。

衔接蛋白失能同源物2通过抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响

目的:探讨衔接蛋白失能同源物2(DAB2)抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响。方法:按照随机数字法将60只SPF级雄性SD大鼠分为四组,每组40只。除正常对照组外,结核性胸膜炎组、DAB2组和pcDNA-NLRP3组进行建模处理,以第2天是否抽出胸腔积液为模型建立成功。正常对照组不注射结核分枝杆菌H37RV悬液,DAB2组建模后第2天静脉注射AAV9-DAB2质粒,每天1次,连续注射7 d,DAB2+pcDNA-NLRP3组在注射AAV9-DAB2质粒500μg/L的同时注射pcDNA-NLRP380μl,正常对照组和结核性胸膜炎组的大鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液。进行各组呼吸功能指标测定,收集胸腔积液,记录积液量,观察3、5、7 d的胸腔积液粘连性情况,HE染色观察胸膜组织病理学情况,Western blot检测胸膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和MMP-9蛋白表达,荧光探针DCFH-DA分析检测活性氧(ROS)的水平。结果:与正常组相比,结核性胸膜炎组的大鼠的胸腔积液和胸膜厚度明显增加,用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)、用力呼气容积(FEV)0.3和FEV0.3/FVC显著降低,TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达显著升高,基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)蛋白表达显著降低,丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,ROS累积量明显升高(均P<0.001);与结核性胸膜炎组相比,DAB2组大鼠胸腔积液和胸膜厚度显著降低,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显升高,DAB2组大鼠胸膜组织中的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显降低,TIMP-1水平明显升高,MDA水平降低,SOD水平升高,ROS累积量明显降低(均P<0.001);与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠胸腔积液和胸膜厚度明显升高,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显降低,DAB2+pcDNA-NLRP3组的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显升高,TIMP-1蛋白表达显著降低,MDA水平明显升高,SOD水平显著降低,ROS累积量显著升高(均P<0.001),各组大鼠在3、5、7 d的胸腔积液粘连性评分比较采用重复测量设计的方差分析,结果显示,不同时间点的胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分变化趋势比较差异有统计学意义(均P<0.001);与模型组相比,DAB2组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状减轻,有少量的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显减少,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显减少;与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状加重,出现的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显增多,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显增加。结论:DAB2通过抑制NLRP3的活性促进胸腔积液的吸收,降低胸膜厚度和粘连发生率,降低炎症反应和氧化应激水平,缓解结核性胸膜炎的进展。

血清肿瘤坏死因子受体相关因子3和卵泡抑素样蛋白1检测对系统性红斑狼疮患者吗替麦考酚酯治疗无效的预测价值

目的:分析血清肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)和卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)水平检测对系统性红斑狼疮患者吗替麦考酚酯治疗无效的预测价值。方法:选择系统性红斑狼疮患者58例为研究对象,采用吗替麦考酚酯治疗,根据治疗效果分为有效组(45例)和无效组(13例)。检测血清TRAF3、FSTL1水平,分析TRAF3、FSTL1与系统性红斑狼疮患者吗替麦考酚酯治疗效果的关系,以及血清TRAF3、FSTL1对系统性红斑狼疮患者吗替麦考酚酯治疗无效的预测价值。结果:系统性红斑狼疮患者经吗替麦考酚酯治疗后,血清TRAF3、FSTL1水平降低(均P<0.05)。与无效组比较,有效组血清TRAF3、FSTL1水平降低(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,TRAF3、FSTL1是系统性红斑狼疮患者吗替麦考酚酯治疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清TRAF3、FSTL1对系统性红斑狼疮患者吗替麦考酚酯治疗无效具有一定的预测价值,且联合检测预测价值更高(均P<0.05)。结论:血清TRAF3、FSTL1高表达与系统性红斑狼疮患者吗替麦考酚酯治疗无效相关,两者联合检测能提升系统性红斑狼疮患者治疗无效风险的预测价值。

调补心肾方通过活化PI3K/Akt/mTOR通路促进阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性相关蛋白的合成

目的探讨调补心肾方(党参、制首乌、枸杞子、黄芪等)对阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性的影响及机制。方法取5月龄雄性野生型(WT)小鼠和5xFAD转基因小鼠各18只,分别随机分为对照组(0.9%NaCl)、调补心肾方组(颗粒剂,4.18 g·kg^(-1))、安理申组(盐酸多奈哌齐,0.625 mg·kg^(-1)),每组6只。按照上述分组灌胃给药,每日1次,共60 d。采用透射电镜观察小鼠海马组织超微结构;Western Blot法检测小鼠皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1、NMDAR1、p-CaMKⅡa、CaMKⅡa、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果与WT对照组比较,5xFAD对照组小鼠海马CA1区突触的超微结构不规则,线粒体萎缩、减少,线粒体嵴断裂、消失,突触膜弯曲不规则,突触囊泡减少,突触后致密物(PDS)变薄甚至断裂;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.05)。与5xFAD对照组相比较,5xFAD调补心肾方组小鼠海马CA1区突触的超微结构有明显变化,线粒体数量增加,突触囊泡增多,突触膜完整,突触后致密物有增厚现象;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论调补心肾方可能通过活化PI3K/Akt/mTOR通路,促进突触可塑性相关蛋白合成,进而改善AD的认知功能障碍。

茵陈水提物对多药耐药蛋白3基因突变致新生儿肠外营养相关性胆汁淤积的保护作用

目的探讨茵陈水提物对多药耐药蛋白3(MDR3)基因突变导致的新生儿肠外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的保护作用及可能机制。方法①将人原代培养肝细胞应用体外细胞培养、CRISPR/Cas9慢病毒感染、MDR3突变基因导入等技术处理后,比较1%脂肪乳诱导处理前(0)和处理后16、32、48 h不同时间点肝细胞上清液中肝胆生化指标〔丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、间接胆红素(IBil)、总胆汁酸(TBA)〕的水平,确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间。②将人原代培养肝细胞株按随机数字表法分为空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组、茵陈水提物干预组。空白对照组只用培养液处理,MDR3基因野生型组应用慢病毒感染融入野生型MDR3基因和培养液培养,MDR3基因突变组应用慢病毒感染慢病毒导入MDR3(c.485T>A、c.2793insA、c.1031G>A、c.3347G>A)突变基因和培养液培养,茵陈水提物干预组应用慢病毒感染导入MDR3突变基因和培养液培养的基础上,加入100 g/L茵陈水提物预处理,然后将4组肝细胞分别加入1%脂肪乳诱导处理,处理时间为构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需时间。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定4组肝细胞上清液中肝胆生化(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4组肝细胞编码MDR3、胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白(MRP)2~4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的三磷酸腺苷结合盒蛋白(ABCB4、ABCB11、ABCC2、ABCC3、ABCC4)和TNF基因mRNA的表达丰度。结果与空白对照组和MDR3基因野生型组比较,MDR3基因突变组在经1%脂肪乳诱导处理前和处理后16 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平比较差异无统计学意义,经1%脂肪乳诱导处理32 h和48 h MDR3基因突变组肝细胞上清液肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平均明显升高(均P<0.05),确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间为32 h。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提物干预组肝细胞在脂肪乳处理后32 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、TBA)水平均明显降低〔ALT(ng/L):148.3±2.3比164.9±7.0,AST(ng/L):2767.4±78.8比3239.4±107.1,TBi(lμmol/L):7.6±0.2比13.6±0.3,DBi(lμmol/L):1.8±0.1比5.7±0.2,TBA(μmol/L):3.4±0.2比6.7±0.1,均P<0.05〕;空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组和茵陈水提物干预组肝细胞编码MDR3、MRP2、MRP3、MRP4的ABCB4、ABCC2、ABCC3、ABCC4基因mRNA表达丰度差异无统计学意义;TNF基因mRNA在MDR3基因突变组呈高表达(2-ΔΔCt:1.258±0.200比1.001±0.052),茵陈水提物干预组呈低表达(2-ΔΔCt:0.387±0.247比1.258±0.200),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提取物干预组肝细胞编码BSEP的ABCB11基因mRNA的表达丰度明显增高(2-ΔΔCt:2.955±0.479比1.333±0.529,P<0.05)。结论茵陈水提物对MDR3基因突变导致的PNAC有一定保护作用,可能与拮抗炎症反应,降低TNF基因的mRNA表达和改善编码BSEP的ABCB11基因的mRNA表达有关。

乳腺癌超声图像特征与P53、PIK3CA蛋白表达状态相关性的研究

目的通过观测乳腺癌的超声图像特征,分析其与P53、PIK3CA蛋白表达的相关性。方法回顾性分析2022年1月—2023年10月本院经病理证实为乳腺癌的101例女性患者的临床资料,在获取病理前均行超声检查。二维超声用于观察乳腺癌大小、形态、边界、纵横比、后方回声以及有无微钙化,彩色多普勒超声用于观察病灶内部以及周边的血流情况。采用SP免疫组化法检测P53、PIK3CA蛋白的表达情况,分析其与超声图像特征的相关性。结果101例乳腺癌患者的临床病理资料显示,P53、PIK3CA的蛋白表达情况与乳腺癌病理亚型均具有相关性(χ^(2)=9.259、P=0.026,χ^(2)=7.927,P=0.048)。在超声图像特征中,血流强度、病灶后方回声衰减与P53蛋白表达具有相关性;病灶最长直径、病灶形态与PIK3CA蛋白表达具有相关性。P53蛋白表达阳性患者病灶血流信号丰富组(χ^(2)=8.191,P=0.004)和存在后方回声衰减组(χ^(2)=11.279、P<0.001)均高于阴性者,PIK3CA蛋白表达阳性患者声像图中的最长直径小于阴性者(t=2.132,P=0.036),而PIK3CA蛋白表达阳性患者病灶形态不规则比例(χ^(2)=4.551、P<0.033)高于阴性者。多因素Logistic回归表明,富血供是P53蛋白表达的影响因素,OR值为2.35[95%CI(1.11,5.74)];病灶形态不规则是PIK3CA蛋白表达的影响因素,OR值为4.58[95%CI(1.35,18.48)]。结论乳腺癌超声图像特征与P53、PIK3CA蛋白表达具有相关性,可以为临床诊疗乳腺癌提供重要的价值。

阿托伐他汀钙下调肌微管素相关蛋白3诱导自噬抑制结肠癌HCT116细胞增殖迁移

目的:探讨阿托伐他汀钙(ATO)诱导自噬抑制结直肠癌(CRC)HCT116细胞增殖与迁移的机制。方法:采用免疫组化检测结直肠癌组织及癌旁组织中肌微管素相关蛋白3(MTMR3)及P62的表达,用0、12.5、25、50、100μmol/L浓度ATO处理结直肠癌HCT116细胞系24 h,采用MTT法检测HCT116细胞活力,使用12.5、25、37.5μmol/L ATO处理HCT116细胞后,进行克隆集落形成实验及细胞划痕实验,并用Western blot法检测其MTMR3及自噬相关蛋白LC3和P62蛋白的表达。ATO联合si-MTMR3、ATO联合自噬抑制剂氯喹及单独氯喹处理结肠癌细胞HCT116,检测HCT116细胞活力、集落形成及迁移能力,并使用Western blot法检测MTMR3、LC3和P62蛋白表达。结果:MTMR3和P62在CRC组织中高表达,经ATO处理的HCT116细胞,药物浓度越高,细胞活力、集落形成和迁移能力越低,其MTMR3及P62蛋白表达亦明显下降,自噬相关蛋白LC3II/I比值逐渐升高,自噬抑制剂氯喹可逆转ATO对HCT116细胞的抑制作用,si-MTMR3与ATO对HCT116细胞有协同抑制作用,并且si-MTMR3可诱导自噬的发生。结论:ATO能抑制结肠癌HCT116细胞的增殖及迁移,其机制可能与通过抑制MTMR3的表达、诱导细胞自噬有关。

整合素相关蛋白α2β与ανβ3在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的 研究整合素相关蛋白α2β与ανβ3在宫颈鳞癌组织中的水平表达,并探讨其对疾病进展的意义。方法 收集2017年11月至2018年10月住院且手术切除的68例宫颈鳞癌患者的组织石蜡标本作为观察组,同时期住院行全子宫切除的52例子宫肌瘤患者的正常宫颈组织石蜡标本作为对照组。通过免疫组织化学法检测2组细胞膜上整合素相关蛋白α2β与ανβ3的表达水平,分析宫颈鳞状细胞癌的生物学行为与宫颈鳞状细胞癌细胞膜上α2β、ανβ3表达的关系。联合2个指标探讨整合素相关蛋白与宫颈癌临床分期及淋巴结转移的相关性。结果 观察组细胞膜上整合素α2β和ανβ3蛋白阳性表达率均显著高于对照组(P<0.05);2组细胞膜上整合素相关蛋白(α2β和ανβ3)表达在组织学分类、临床分期、淋巴结转移和浸润深度方面差异有统计学意义(P<0.05),在肿瘤大小方面差异无统计学意义(P>0.05)。α2β联合ανβ3阳性表达率与宫颈癌临床分期及淋巴结转移均呈正相关(r=0.941、0.931,P<0.05)。结论 整合素相关蛋白α2β与ανβ3表达在宫颈鳞状细胞癌组织患者标本中呈异常升高,其在疾病的发生发展中可能具有一定作用。同时,整合素相关蛋白与宫颈鳞状细胞癌的临床分期和淋巴结转移密切相关,可作为宫颈鳞癌局部浸润、远处转移的预测因素。

梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3和Toll样受体4表达与Th1/Th2相关细胞因子的相关性研究

目的探究梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)表达与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)相关细胞因子的相关性。方法选取2021年2月至2022年4月川北医学院附属三台医院收治的197例梅毒患者作为研究对象。将进行驱梅治疗后血清转阴者纳入转阴组(n=88),未进行驱梅治疗者纳入梅毒组(n=45),接受驱梅治疗后血清固定者纳入固定组(n=64)。另选取同期进行体检的健康人作为对照组(n=53)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、TLR4 mRNA相对表达水平;采用酶联免疫吸附试验法检测Th1/Th2相关细胞因子的表达水平;采用Pearson法分析TLR4、NLRP3 mRNA与Th1/Th2相关细胞因子的相关性。结果各组PBMCs中TLR4、NLRP3 mRNA表达水平比较,梅毒组>转阴组>对照组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)水平比较,对照组>转阴组>梅毒组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组IL-1β、IL-4、IL-10及IL-18水平比较,对照组<转阴组<梅毒组<固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);梅毒血清固定患者TLR4、NLRP3 mRNA表达与IFN-γ、IL-2呈正相关,与IL-1β、IL-4、IL-10、IL-18呈负相关(P<0.05)。结论梅毒血清固定患者NLRP3、TLR4 mRNA表达水平显著降低,且与Th1/Th2相关细胞因子密切相关。

自噬相关基因微管相关蛋白1A/1B轻链3B在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关基因微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中提供的临床和RNA-seq数据,以预测MAP1LC3B水平与结肠癌的关系。再利用免疫组织化学染色(IHC)、Western印迹等技术对人群样本(结肠癌组织40例,癌旁组织20例)中MAP1LC3B表达情况进行检测,验证其表达情况与临床病理参数包括肝转移与否、淋巴结转移与否及组织分化等的关系。结果:MAP1LC3B在结肠癌组织中的表达阳性率为72.5%,明显高于癌旁组织组,差异具有统计学意义(P=0.001);在MAP1LC3B阳性组中,21例(72.41%)合并肝转移(P=0.001),且患者的TNM分期多为Ⅴ期患者,占79.31%,与MAP1LC3B阴性组比较差异具有统计学意义(P=0.001),但MAP1LC3B的表达与结肠癌组织的分化程度(P=0.056)和淋巴结转移情况比较,差异无统计学意义(P=0.265)。与TCGA数据库等分析结果有所差异,但Kaplan-Meier生存分析表明,MAP1LC3B高表达与预后不良显著相关,差异有统计学意义(P<0.01),且MAP1LC3B表达水平与CD8+T细胞的功能最为密切。结论:自噬相关基因MAP1LC3B在结肠癌组织中异常表达,并参与介导了肿瘤的恶性生物学行为,影响患者预后。

宫颈癌患者癌组织Dickkopf相关蛋白3和分泌型卷曲相关蛋白5基因甲基化情况与预后的关系

目的观察宫颈癌患者癌组织Dickkopf相关蛋白3(Dickkopf-3,DKK3)、分泌型卷曲相关蛋白5(secreted frizzled-related protein 5,SFRP5)基因甲基化情况,探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法 123例宫颈癌患者,均行手术治疗,取手术切除的癌组织和癌旁正常宫颈组织,采用甲基化特异性PCR检测2种组织DKK3、SFRP5基因甲基化情况;比较不同分化程度、FIGO分期等临床病理特征者癌组织DKK3、SFRP5基因甲基化率;术后随访3年,采用Kaplan-Meier法分析DKK3、SFRP5基因甲基化者与无甲基化者3年无瘤生存率和总生存率;采用多因素Cox回归分析宫颈癌患者预后不良的危险因素。结果宫颈癌患者癌组织DKK3、SFRP5基因甲基化率(61.79%、70.73%)均高于癌旁组织(26.02%、30.89%)(χ^(2)=31.955,P<0.001;χ^(2)=39.051,P<0.001)。低中度分化(72.50%、77.50%)、FIGO分期Ⅲ期(71.43%、77.92%)、有盆腔淋巴结转移(82.89%、85.71%)的宫颈癌患者癌组织DKK3、SFRP5基因甲基化率分别高于高度分化(41.86%、58.14%)、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(45.65%、58.70%)、无盆腔淋巴结转移者(53.41%、64.77%)(P<0.05)。DKK3、SFRP5基因甲基化的宫颈癌患者3年无瘤生存率(69.74%、72.41%)、总生存率(82.89%、83.91%)均低于DKK3、SFRP5基因无甲基化者(89.36%、88.89%,95.74%、97.22%)(P<0.05)。有盆腔淋巴结转移(HR=1.606,95%CI:1.140~2.264,P=0.003)、DKK3基因甲基化(HR=1.280,95%CI:1.063~1.542,P=0.004)、SFRP5基因甲基化(HR=1.365,95%CI:1.079~1.727,P=0.005)是宫颈癌患者预后不良的危险因素。结论宫颈癌患者癌组织DKK3、SFRP5基因甲基化率升高,低中度分化、FIGO分期Ⅲ期、有盆腔淋巴结转移者癌组织DKK3、SFRP5基因易发生甲基化,预后较差。