亚隔孢壳属Didymella真菌研究进展

亚隔孢壳属Didymella真菌可引起多种植物病害,造成作物产量损失。该属病原菌引起的植物病害症状通常表现为叶部和茎部的病斑并产生分生孢子器。亚隔孢壳属在分类学上和茎点霉属Phoma及其相关属有着密切的联系,其作为一个多系类群,同时还包含部分未鉴定的种。文中从亚隔孢壳属的建立、分类学的发展、分子系统学研究进展、病原菌快速检测方法,以及亚隔孢壳属引起病害的综合防治研究等方面进行综述。根据已发表的84个亚隔孢壳属物种构建系统发育树表明各物种间的亲缘关系,并概述了上述亚隔孢壳属物种的分类地位变化,为系统研究亚隔孢壳属的多样性提供参考,并对今后的研究方向进行初步探讨。

茶叶斑病病原菌的鉴定及生长特性研究

本研究从贵州余庆茶叶产区的茶树叶部病害样品中分离纯化出多个相似的分离物,观察其菌落、分生孢子器和分生孢子等形态。测定了LSU、ITS和TUB等核酸序列,采用PAUP软件及最大简约法,进行多基因系统发育树分析。依据柯赫氏法则,完成代表性菌株CGMCC3.20149在室内和自然条件下的茶树叶片致病性研究。同时,还探究了菌株CGMCC3.20149在不同培养基上的生长速率。结果表明,CGMCC3.20149菌株的菌落、分生孢子器和分生孢子等形态与荸荠点霉秆枯病菌Didymella bellidis一致;CGMCC3.20149菌株与模式菌株D.bellidis PD 94/886和D.bellidis CBS 714.85在系统发育树上聚为一支,自举支持率为100%;通过损伤方式接种,CGMCC3.20149菌株可引起茶树叶片产生病斑;在OA培养基上的生长速率最快,达(0.76±0.01)cm/d,PDA培养基上的生长速率次之,为(0.73±0.02)cm/d,MEA培养基上的生长速率则最慢,为(0.62±0.01)cm/d;不同的碳素营养和氮素营养均影响菌丝的生长速率、菌素丰度、色素形成;25℃是菌株体外最适宜的生长温度;菌株在pH 6~9的范围内生长较好。

脆红李叶斑病病原菌的鉴定及抑菌药剂的筛选

为明确脆红李叶斑病的病原菌,采用组织分离法分离纯化病原菌,通过形态学特征结合多基因联合序列分析鉴定病原菌;采用孢子喷洒法和针刺接种法测试其致病性。结果表明:从脆红李叶斑病病叶分离得到4株形态一致的真菌菌株,其代表菌株LY12的菌落呈圆形,菌丝白色至浅黄色;分生孢子器球形,黑色;分生孢子无色,单孢,多为椭圆形;采用ITS、TUB2和LSU 3段基因联合构建系统发育树,菌株LY12与荸荠茎点霉(Didymella bellidis)聚为一支;根据形态学特征和系统发育分析,确定LY12为荸荠茎点霉(Didymella bellidis);致病力测试发现,该病原菌可以侵染川渝地区青脆李、半边红、青柰、金脆李和脆红李的叶片、枝条和果实,叶片受害最严重,也可侵染尤力克柠檬、爱媛38杂柑、塔罗科血橙3个柑橘品种的叶片和果实;室内药剂筛选结果表明,24种杀菌剂中,50%啶酰菌胺水分散粒剂、38%唑醚·啶酰菌胺悬浮剂、25%嘧菌酯悬浮剂、75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂等11种杀菌剂对病原菌菌丝生长有较强的抑制作用,病原菌对50%啶酰菌胺水分散粒剂最敏感,EC50为0.1531µg/mL。

杭白菊叶斑病菌的生物学特性

2018—2019年调查桐乡石门镇杭白菊产区的叶斑病病原菌种类,分离获得了病原真菌Didymella sp.,研究发现,该病原菌最适宜在PDA或PSA培养基、培养温度25~30℃、pH值4~7条件下生长;该病原菌对以棉子糖、甘露糖作为碳源,以酵母提取物(Yeast)、苯丙氨酸(Phe)和牛肉粉为氮源时的利用率最高。

啶酰菌胺等8种杀菌剂对烟草叶斑病菌的生物活性

采用生物测定方法分析了烟草叶斑病菌Didymella segeticola在菌丝生长阶段对8种杀菌剂(啶酰菌胺、苯醚甲环唑、丙环唑、氟硅唑、多菌灵、咪鲜胺、菌核净和代森锰锌)的敏感性,同时通过离体叶片法测定了8种杀菌剂对烟草叶斑病的保护和治疗作用。结果表明:供试8种杀菌剂对D.segeticola菌丝生长表现出不同的抑制活性,同时对其引起的病害具有一定的保护和治疗作用。抑菌活性最强的是啶酰菌胺,其平均EC_(50)值为(0.0470±0.0120)mg/L;其次依次为苯醚甲环唑[(0.0790±0.0050)mg/L]、咪鲜胺[(0.29±0.08)mg/L]、丙环唑[(0.69±0.12)mg/L]、菌核净[(1.08±0.33)mg/L]、多菌灵[(1.22±0.29)mg/L]、氟硅唑[(1.38±0.07)mg/L];代森锰锌的抑菌活性最弱[(22.80±10.51)mg/L]。进一步研究表明,氟硅唑、苯醚甲环唑、丙环唑、啶酰菌胺、菌核净和多菌灵对烟草叶斑病保护作用较强,25 mg/L药剂质量浓度处理下防效均>82%;100 mg/L代森锰锌处理下防效为70.51%。啶酰菌胺和氟硅唑对叶斑病具有较好的治疗活性,25 mg/L下防效均>80%;其次为咪鲜胺、苯醚甲环唑、多菌灵和菌核净;代森锰锌的治疗作用较差,100 mg/L下的防效仅为63.31%。研究结果可为烟草叶斑病防治药剂筛选提供参考和依据。

4种甜瓜蔓枯病菌形态特征及其致病力比较

从江苏和海南甜瓜种植区的病株中分离得到4种甜瓜蔓枯病病原物，在25℃、16h光照／8h黑暗条件下，4种病原菌分离物在PSA上培养后进行形态观察。结果表明：4种病原菌在PSA培养基上菌落形状相似，初为圆形后转变为同心圆；气生菌丝起初均为乳白色，后期为青灰色或者黑色，气生菌丝生长旺盛；其中C的基内菌丝较其它3种发达，可以直接产生大量的分生孢子，其余3种只能形成极少分生孢子；4种病原菌产生的孢子大小、形态基本一致，无色无隔或单隔为主；4种病原菌的菌丝生长速度差异不显著；在12h紫外灯／12h黑暗周期下处理4—6d，4种病原菌都能产生大量的分生孢子。此外，以感病品种白皮脆为供试材料，利用孢子悬浮液喷雾接种方法对这4种病原菌进行致病力的测定。结果表明，4种病原菌均具有较强的致病力，但它们之间的致病力差异不显著。

甜瓜蔓枯病菌子实体法分离及A型菌株产孢条件研究

为解决甜瓜蔓枯病菌(Didymellabryoniae)组织分离法中枯萎病菌污染和单孢分离法操作复杂的问题,采用挑取单个子实体分离纯化获得甜瓜蔓枯病菌A型菌株。该菌株在12h荧光/12h黑暗的常规光照条件下,不能形成分生孢子器,但经过一定时间的暗处理和间歇紫外灯(12h紫外灯/12h黑暗)照射后则能够产生大量分生孢子。研究了光照、温度、pH值、培养基、碳源、氮源对产孢量的影响。综合各种因素,A型菌株产生分生孢子的最佳条件为:7d暗培养和4d间歇紫外灯处理的光照条件下,只含有磷酸二氢氨的马铃薯平板培养基,25℃时产生的分生孢子量最多。

西甜瓜蔓枯病菌致病力测定与品种抗病性分析

【目的】研究不同西、甜瓜蔓枯病菌株的致病力差异和不同西、甜瓜品种的抗病性,为指导广西西、甜瓜生产提供科学依据。【方法】采用离体叶片接种法对104个西、甜瓜蔓枯病菌株进行致病力差异分析,并对14个西、甜瓜品种进行抗病性测定。【结果】不同蔓枯病菌菌株致病力存在差异,104个菌株中强致病力菌株、中等致病力菌株和弱致病力菌株分别占31.73%、57.69%和10.58%。不同西、甜瓜品种对同一蔓枯病菌菌株的感病性也存在差异,强致病力菌株WTMK-76对不同西、甜瓜品种病情指数为38.14～86.92,中致病力菌株BHMK-59对不同西、甜瓜品种病情指数为26.88～76.40。10个西瓜品种中以绿美人的抗病性最强,黑美人次之;4个甜瓜品种中以广蜜1号的抗病性最强。【结论】不同的蔓枯病菌菌株致病力存在差异,但菌株致病力强弱与菌株分布的地理位置无关;不同西、甜瓜品种抗病力也存在差异,其中以绿美人、黑美人和广蜜1号的抗病性最强,这3个西、甜瓜品种可在广西推广种植。

西瓜品种资源的蔓枯病抗性鉴定与评价

对收集引进的42份西瓜品种资源进行了大田成株期及室内苗期蔓枯病抗性的人工接种鉴定。各品种苗期和成株期抗病性的鉴定结果表明,这些品种中没有免疫和高抗的品种,苗期和成株期抗病性表现一致,较好的品种有5个,其中中抗的品种有3个,分别是从美国引进的Au-producer、All-sweet scarlet和Au-Jubilant;耐病品种2个,分别是Sugarlee和SSDL。其中,有8个品种表现较强的综合抗病性,兼具优质、高糖、高产、耐贮及早熟等优良农艺性状,可以作为抗病、优质、早熟西瓜新品种选育的亲本材料。

西瓜蔓枯病分子诊断技术研究

本文测定西瓜上的西瓜蔓枯病菌(D idym ella bryoniae)、西瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)及西瓜枯萎病菌(Fu-sarium oxysporumf.sp.niveum)的rDNA的ITS序列,比对近缘种及西瓜上不同病菌的ITS序列同源性,设计出特异性上游引物XM-2和下游引物XM-R2。经过对XM-2/XM-R2引物的PCR扩增条件的优化,可以扩增出一条344bp的西瓜蔓枯病菌特异性DNA条带。上述方法可以检测到pg以上的蔓枯病菌基因组DNA,并且可以准确扩增出西瓜蔓枯病自然病样中特异性的DNA片段。本文建立了一项西瓜蔓枯病分子检测技术,该方法准确、快速、可靠,可用于西瓜蔓枯病田间的快速诊断。

进境高粱种子中葡萄茎枯病菌的检疫鉴定

从进境的美国高粱样品中分离到一株与葡萄茎枯病菌Didymella glomerata相似的菌株4358-17。其菌落形态和显微特征均与葡萄茎枯病菌一致。多个位点(LSU、ITS、TUB2、ACT)序列比对显示菌株4358-17与GenBank登录号为KT389718、FJ427004、FJ427115、FJ426896的葡萄茎枯病菌相似性均达到100%。系统发育分析结果表明菌株4358-17与葡萄茎枯病菌株聚集在同一个分支上,支持率为99%。菌株4358-17接种高粱和小麦叶片,4d后接种部位出现明显症状。根据上述试验结果,将进境美国高粱样品中分离的菌株4358-17鉴定为葡萄茎枯病菌。

花生网斑病原菌孢子差异及其致病力分析

花生网斑病(peanut web blotch),由花生亚隔孢壳菌(Didymella arachidicola)引起,病原菌又称花生茎点霉(Phoma arachidicola)或派伦霉(Peyronella arachidicola),在我国南北的各大花生产区均有发生,已成为生产上严重的叶部病害。为筛选产孢效率高、致病力强的菌株,研究病原菌进化机制和环境适应性,从来自不同地区的花生网斑病叶片样本中分离病原菌菌株,研究分生孢子及致病力差异。结果表明,18个菌株中YY187的产孢时间最短,22℃黑暗条件下燕麦琼脂培养基培养7 d即可产孢;菌株YY187和NY206产生的分生孢子器数量显著多于其它菌株;采用孢子悬浮液接种花生叶片,供试所有菌株均可造成叶片发病,其中菌株LY128和YY187在供试18个菌株中致病力相对较强。因此,综合评价产孢效率更高、致病力更强的本地菌株YY187适合作为花生抗网斑病研究的材料。

利用ISSR初步分析广西西甜瓜蔓枯病菌的遗传多样性

[目的]应用简单序列重复区间（Inter-simple sequence repeats,ISSR）分子标记技术对广西不同地方的西甜瓜蔓枯病菌进行ISSR分析,以了解其遗传多样性,为西甜瓜蔓枯病病原研究及制定合理的防治措施提供理论依据.[方法]选用20条引物,对采集于南宁市的15株西甜瓜蔓枯病菌和北海、桂林、柳州的4株西甜瓜蔓枯病菌进行ISSR-PCR分析,采用Powermarker V3.25软件分析其遗传结构.[结果]从20条随机引物中筛选出16条多态性较高的引物,共产生位点数233个,多态位点数115个,平均多态位点9.6个,平均多态百分率为49.4％.每条引物能扩增出7～20条谱带,扩增的片段大部分在300～3000 bp.基于Nei＇s遗传距离的聚类分析结果显示,供试材料可分为两个类群,两个来源于南宁市兴宁区的菌株单独归为一类,其余17株菌株基本聚在同一大类群中.[结论]来自广西不同地方的西甜瓜蔓枯病菌的遗传相似性较高,ISSR多态性与地理来源无显著相关性.

实时荧光PCR检测瓜类蔓枯病菌的方法研究

【目的】建立瓜蔓枯病菌(Didy mella bryoniae)的实时荧光PCR方法,为瓜蔓枯病菌快速分子检测奠定基础。【方法】通过Genebank网上已公布序列,选取瓜蔓枯病菌beta-tubulin(tub2)基因作为目的基因,设计了特异性引物和Taq Man探针,并对该引物和探针的反应条件进行优化。【结果】采用研究所设计的引物和探针对瓜上的其他菌株及近似菌株进行检测,该引物和探针可高度灵敏地检测到瓜蔓枯病菌。采用实时荧光PCR方法,25μL体系中只要有8.9 pg的核酸量就可以被检测到,检测灵敏度达到356 fg/μL,比普通PCR灵敏度高10倍。【结论】采用研究所设计的引物和探针对田间采集的病株和未知样品的检测,验证了引物和Taq Man探针的特异性。

甜瓜蔓枯病病原菌分离与分生孢子的产孢诱导

实验成功分离甜瓜蔓枯病病原菌.菌丝体在马铃薯蔗糖培养基(PSA)上不易产孢,在易产孢的燕麦培养基(OA)、玉米培养基(MA)和马铃薯燕麦葡萄糖培养基(POGA)上,仅能产生极少量分生孢子器.而采用热激和紫外照射却能高效诱导出大量的分生孢子器.在以分生孢子器扩繁菌种时,发现易产孢的3种培养基上产生大量的分生孢子器,而在PSA上仍然不能.

两种病原真菌在河南危害烟草的首次报道

在河南省嵩县烟田发现了茎黑腐病症状;茎枯病症状发现于洛宁县烟田。为明确两种病害的病原种类,试验采用常规组织分离法获得致病菌株,对所得菌株进行了形态学鉴定、DNA序列分析和致病性测定。结果表明,菌株Ⅰ号菌落呈放射状型,并逐渐变为花瓣型,雄器钟状或不规则,为钟器腐霉(Pythium vexans),侵染烟草引起茎黑腐病,在河南省为首次报道。菌株Ⅱ号菌落初期白色,菌落中部逐渐变为青黑色,分生孢子双胞或单胞,子囊棍棒状,子囊孢子纺锤形,双胞,隔膜处有缢缩,有性时期为菊花疫病菌(Didymella ligulicola),无性时期为菊花壳二孢(Ascochyta chrysanthemi),侵染烟草为首次报道。

西瓜甜瓜蔓枯病病菌差异性初步研究

初步研究了西、甜瓜蔓枯病病菌差异性,为深入了解西、甜瓜蔓枯病病原提供理论依据。采用离体叶片接种法对 19 个西、甜瓜蔓枯病菌株进行致病力差异性研究,并对不同菌株核糖体基因内转录区序列（rDNA-ITS）比较分析。结果发现：不同西、甜瓜蔓枯病菌株致病力存在显著性差异,病情指数为 85.11~4.58;但不同菌株间的 ITS 序列比较差别不大,保守程度高,菌株间的分化和变异不明显。

不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后若干生理指标的变化

对不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后测定叶片中叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白含量和3种防御酶(PPO、PO、PAL)的活性。结果表明:叶绿素含量在接种后呈现先增加后减小趋势,抗病甜瓜增幅大,叶绿素含量高于感病甜瓜;可溶性糖含量在接种后先降低后升高、再降低再升高,抗病甜瓜可溶性糖含量高于感病甜瓜;可溶性蛋白含量在接种后逐渐升高,感病甜瓜峰值出现早于抗病甜瓜;3种酶活性在接种后都有不同程度提高,其中抗病甜瓜酶活性增幅高于感病甜瓜。几种酶活性变化可以用于甜瓜蔓枯病抗性鉴定。

甜瓜蔓枯病菌原生质体制备及再生体系研究

【目的】建立高效的病原菌原生质体制备和再生体系,明确甜瓜蔓枯病菌的致病机理。【方法】采用单因素分析法,利用2种混合酶20 g·L^(−1) Driselase和8 g·L^(−1) Lysing enzymes,以不同菌龄、摇培转速、不同酶解时间、温度、渗透压稳定剂的种类及pH、再生培养基为研究条件;对甜瓜蔓枯病菌原生质体的制备及再生体系进行优化。【结果】结果表明:以培养36 h左右的菌丝体为材料,以0.7 mol·L^(−1) NaCl作为渗透压稳定剂(pH=7),用20 g·L^(−1) Driselase和8 g·L^(−1) Lysing enzymes在30℃、140 r·min^(−1)条件下酶解4 h,原生质体的产量可达9.65×10^(7)个·mL^(−1);以琼脂含量为0.6%的SR培养基作为再生培养基,甜瓜蔓枯病菌的再生率可达22.53%;原生质体的再生率在存放10 h内下降迅速,10 h后下降速度逐渐平缓。【结论】确定了蔓枯病菌的高效原生质体制备与再生体系,为该菌株遗传转化体系的建立奠定基础。

20种植物提取液对甜瓜蔓枯病的抑菌作用

采用生长速率法测定20种植物不同组织部位的乙醇提取液对甜瓜蔓枯病菌的抑菌效果,其中地锦全草乙醇提取物具有显著的抑制作用,当浓度为6 mg/mL时,抑制率为73.6%,其他植物提取物均无明显抑菌效果。对甜瓜蔓枯病的田间试验结果表明,喷雾7 d后的防效为46.0%。将乙醇提取物用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇依次进行萃取,并对各萃取物进行生物测定,结果表明,有效活性成分主要存在于正丁醇相中;当浓度为6 mg/mL时,抑制率为58.1%。抑菌谱测定结果表明,地锦乙醇提取物和正丁醇萃取物对8种病原菌具有一定的抑菌作用。