应用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因水稻

应用地高辛标记的PCR-ELISA(Dig-PCR-ELISA)技术进行转基因水稻检测研究。针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S 启动子(p35S)、胭脂碱合成酶(NOS)终止子(Tnos),筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(hpt,hpt)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、抗草丁膦除草剂基因(bar),建立Dig-PCR-ELISA检测方法;能进行半定量检测,敏感性试验表明,Dig-ELISA检测比常规电泳检测可提高敏感性达1 000倍,可检测含量达0.1％的GMO样品。全过程可在24 h内完成。

用地高辛标记的PCR-ELISA技术快速检测转基因鱼

取含有小鼠重金属螯合蛋白 (mMT)基因启动子及人生长激素 (hGH)基因的鱼样品 ,以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示 ,mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为2 4 0bp和 130bp ,与设计相符。PCR产物的核酸测序结果证实其扩增产物具特异性。地高辛 PCR(Dig PCR)标记反应显示 ,2个基因均产生 1条Dig标记的特异产物带。Dig PCR ELISA检测敏感性试验显示 ,对mMT启动子和hGH基因的检测敏感性可达 10 - 3,与常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳检测方法相比 ,检测敏感性可提高至 10 0～ 10 0 0倍。试验证明 ,针对mMT和hGH基因所建立的Dig PCR

辣椒轻斑驳病毒检测方法的比较

为寻求一种灵敏、经济、快捷检测辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle Tobamovirus,PMMoV)的检测方法,以辣椒轻斑驳病毒侵染的甜椒叶片为材料,采用DIG标记的核酸斑点杂交、RT-PCR和DAS-ELISA3种方法检测不同系列稀释倍数的辣椒叶片总RNA和叶片提取液,测试3种方法的稀释限点。结果表明,RT-PCR灵敏度最高,地高辛斑点杂交灵敏度次之,DAS-ELISA灵敏度最低。在3种方法中地高辛斑点杂交方法与其他两种方法相比灵敏度较高,不需要任何特定仪器,而且适合大量样品的检测,所以此方法有很好的应用前景。