地高辛标记核酸探针斑点杂交法检测轮状病毒疫苗中残余MA－104细胞DNA含量的研究

本文报导用地高辛标记核酸探针和分子斑点杂交技术检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株活疫苗中残余ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ含量的方法。提取和纯化ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ，将其ＡｌｕＩ酶切片段用随机引物法引导ＤＮＡ标记为探针。待检样品抽提核酸后点膜进行斑点杂交。此法灵敏度高，可检出０．１４ｐｇ的ＤＮＡ，特异性强，与非同源性ＤＮＡ无杂交。用此法检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株制备的疫苗，ＭＡ－１０４细胞残余ＤＮＡ含量低于１４ｐｇ低于ＷＨＯ限量标准，结果表明此重配株用于研制疫苗是安全的。

地高辛标记探针检测Vero细胞狂犬病疫苗残余Vero细胞DNA含量

地高辛标记Vero细胞DNA ,并制备成DNA探针。以此探针进行点杂交 ,确定探针的工作浓度、特异性及灵敏度。并用此法监测Vero细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化工艺的Vero细胞DNA去除率 ,测定精制Vero细胞狂犬病疫苗半成品中残余Vero细胞DNA含量。结果表明 ,该法特异性强 ,重复性好 ,快速简便 ,灵敏度高 ,检测值可达 5pg/剂量 ,可用于精制Vero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的质量控制和半成品检定。

轮状病毒基因重配株血清型鉴定方法的研究

Ａ组轮状病毒中根据基因９的不同目前至少已发现有１３个不同Ｇ血清型，其中能引起人类致病的有Ｇ１－Ｇ４，Ｇ８，Ｇ９和Ｇ１２型。建立可靠的血清型鉴定技术对于轮状病毒疫苗的研制和分子流行病学的研究具有重要意义。本文首次报导了一种鉴定轮状病毒Ｇ血清型的新方法，利用已知有关轮状病毒ＶＰ７基因的序列资料，设计合成了一套鉴定轮状病毒Ｇ血清型的寡核苷酸探针，利用地高辛标记上述探针。待检品经反转录ＰＣＲ扩增后与上述一套寡核苷酸探针分别进行杂交得以确定其血清型。这一方法与目前常用的套式ＰＣＲ方法相比更适合于大量样品的操作而且结果可靠。用这一方法对本实验室组建的四株基因重配疫苗株进行实验，其结果与套式ＰＣＲ方法完全一致。