基于网络药理学探究地锦草防治溃疡性结肠炎的作用机制

【目的】基于网络药理学并结合分子对接方法分析地锦草防治溃疡性结肠炎(UC)的活性成分和靶点,探究其潜在机制,进而保护动物肠道。【方法】利用TCMSP数据库获取地锦草的活性成分及对应药物靶点。通过GeneCards、DisGeNET、TTD、PharmGKB和DrugBank数据库获取疾病靶点。药物靶点和疾病靶点取交集获取潜在靶点,分别借助STRING和DAVID数据库对潜在靶点进行蛋白互作(PPI)分析及GO功能和KEGG通路富集分析。借助AutoDock 1.5.7软件进行分子对接验证,利用PyMOL软件将对接结果可视化。通过体内试验利用30只BALB/c小鼠制作葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的UC模型,设置对照组、模型组、地锦草低(5 mg/mL)、高(15 mg/mL)剂量组、美沙拉嗪组(52 mg/mL)。除对照组外,其余各组小鼠连续7 d自由饮用3%DSS诱导UC模型,各给药组小鼠每天灌胃1次,根据小鼠体重灌胃相应剂量的药物0.1 mL/10 g,对照组和模型组小鼠灌胃等体积无菌生理盐水,连续7 d,测其体重变化、疾病活动指数(DAI)评分和结肠长度,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL6)和IL10含量。【结果】地锦草主要活性成分有山柰酚、4’-5二羟基黄酮和鞣花酸等,对应的药物靶点256个,疾病靶点4265个,潜在靶点128个,核心靶点7个。GO功能富集涉及对活性氧的反应、对氧化应激的反应、炎症反应、膜筏、小窝、激酶调节剂活性等。KEGG信号通路涉及PI3K-Akt和TNF信号通路等。分子对接结果显示,山柰酚和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、4’,5-二羟基黄酮和PPARG、鞣花酸和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、鞣花酸和IL6具有较强结合潜力。体内试验结果表明,与对照组相比,模型组小鼠体重严重下降,严重的甚至出现水样血便,DAI评分极显著升高(P<0.01),结肠组织的黏膜层及黏膜下层出现大量炎性细胞浸润,甚至有小溃疡的出现,表明小鼠UC造模成功。与模型组相比,各给药组小鼠结肠组织黏膜层炎症细胞浸润减少,DAI评分极显著降低(P<0.01),结肠挛缩情况好转,TNF-α和IL6含量显著减少(P<0.05),IL10含量显著增加(P<0.05),抑制炎症发生。【结论】地锦草中的山柰酚、4’-5二羟基黄酮和鞣花酸等主要活性成分可能通过作用于AKT1、PPARG和IL6等核心靶点参与炎症相关信号通路及生物功能,抑制炎症,减轻肠道损伤,从而发挥防治UC的效用。

基于非靶向代谢组学的斑地锦叶片和乳汁成分分析

为比较斑地锦(Euphorbia maculata L.)叶片和乳汁所含活性成分的差异,通过液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)进行相关代谢物数据采集,基于非靶向代谢组学对斑地锦叶片和乳汁的化学成分进行分析,采用主成分分析、多元统计分析、正交偏最小二乘判别分析相结合的方法鉴定差异代谢物,通过文献检索归纳比较叶片和乳汁主要差异代谢物的药理活性。结果表明,在斑地锦叶片和乳汁中共鉴定出1229种代谢物,主要为生物碱(217种)、苯丙素及其衍生物类(178种)、脂类(147种)、萜类(137种),黄酮类(113种)等化合物。通过多元统计分析筛选出859种差异代谢物,有466种代谢物在乳汁中高表达,其中3-脱氢莽草酸(酚酸类)、山梨酸(萜类)、原儿茶酸(酚酸类)、肉桂醛(苯丙素及其衍生物类)、橙皮苷(黄酮类)、川芎内酯(萜类)、α-细辛脑(苯丙素及其衍生物类)、水杨酸(酚酸类)、D-樟脑(萜类)、蒙花苷(黄酮类)、反式阿魏酸(苯丙素及其衍生物类)、姜黄素(酚酸类)、二十碳五烯酸乙酯(脂类)、β-石竹烯(萜类)等14种代谢物首次在斑地锦中被报道。斑地锦黄酮类活性成分在叶片中的表达量均明显高于乳汁;没食子酸乙酯、原儿茶酸乙酯、反式阿魏酸在乳汁中的表达量均明显高于叶片,其中反式阿魏酸在乳汁中的表达量为叶片的57.74倍。综上,斑地锦叶片和乳汁中代谢物成分和含量具有显著差异。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定地锦草中8种成分的含量

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)用于同时测定地锦草中2种有机酸类和6种黄酮类成分的含量。方法:采用Hypersil GOLD C18(150 mm×3.0 mm,3μm),流动相为0.3%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL;质谱采用ESI源,负离子模式监测,喷雾电压为-3000 V,离子化温度为500℃,多反应监测模式(MRM)用于定量分析。结果:所测定地锦草中的8个成分在测定浓度范围内峰面积和浓度均呈良好的线性关系(r≥0.9910),加样回收率在96.1%~99.9%,精密度、重复性和稳定性良好并符合方法学考察要求。结论:该方法简便、快速、准确、可靠,可用于地锦草中8种成分的含量测定。

蒙药地锦草总黄酮提取工艺研究

对蒙药地锦草总黄酮提取工艺进行了研究。结果表明：乙醇提取法优于水提取法；用６倍量的７５％乙醇浸泡１２ｈ后回流提取１．５ｈ，共提取３次为最佳方案；提取液经石油醚脱色正丁醇萃取即得精制总黄酮。

高效液相色谱法测定地锦草中槲皮素的含量

目的 :建立地锦草中槲皮素高效液相色谱测定方法。方法 :色谱柱Kromasil C18(4.6mm× 2 5 0mm ,5μm) ,流动相为乙腈 0 .4 %磷酸 (40∶6 0 ) ,检测波长 370nm ,流速 1.0mL·min-1。结果 :槲皮素在 0 .0 36 4～ 0 .12 74μg线性关系良好 (r =0 .9999) ,回收率 10 0 .7% ,RSD 2 .5 %。 结论 :为地锦草及其制剂提供了分析方法 ,该法简便 ,结果可靠。

地锦草总黄酮抗氧化作用的研究

地锦草总黄酮呈剂量依赖性的抗Ｏ－２·和·ＯＨ－的氧化作用。在ＶＢ２－Ｍｅｔ－ＮＢＴ体系中对Ｏ－２的ＳＣ５０＝０．５８μｇ／ｍｌ，ＩＣ５０＝０．３５μｇ／ｍｌ；在Ｖｉｔ·Ｃ－Ｃｕ２＋－Ｃｙｔｏ·Ｃ体系中对·ＯＨ－的ＳＣ５０＝２．４μｇ／ｍｌ，ＩＣ５０＝２．１μｇ／ｍｌ；在Ｖｉｔ·Ｃ－Ｆｅ２＋－ＤＲ体系中对ＭＤＡ的ＳＣ５０＝１５１．８μｇ／ｍｌ。地锦草的消肿、清热，伤口愈合等药效作用的发挥。

RP-HPLC法同时测定地锦草片中3种黄酮苷元的含量

目的建立同时测定地锦草片中槲皮素、木犀草素和山柰酚含量的HPLC法。方法采用KromasilC18柱（250mm×4．6mm，5μm），以甲醇一体积分数为0．1％的磷酸溶液（体积比为52：48）为流动相，流速为1.0mL·min^-1，检测波长为360nm，柱温30℃。结果槲皮素、木犀草素和山柰酚的线性范围分别为1．50-30．0mg·L^-1（r=0．9999）、2．24-44．8mg·L^-1（r=0．9998）和0．220-4．40mg·L^-1（r=0．9998）；平均加样回收率（n=9）分别为100．1％、100．5％和98．8％。结论方法简便、结果准确、重现性好，可用于地锦草片的质量控制。

地锦草提取物对小鼠血液过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

目的 :观察地锦草提取物对小鼠血液过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响。方法 :地锦草提取物给小鼠连续灌胃 2 3 d,1次 / d,1ml/次。结果 :与空白对照组比较 ,地锦草提取物可明显提高小鼠血液 CAT和 GSH- PX活性 ,并呈剂量依赖性。结论 :结果表明 ,地锦草提取物具有较强的清除自由基及抗氧化。

地锦草总黄酮预防四氯化碳所致急性肝损伤的实验研究

目的研究地锦草总黄酮(total flavonoids ofEuphorbiae hum ifusae,TFEH)对四氯化碳造成的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法四氯化碳造成小鼠急性肝损伤模型,测定血清谷丙转氨酶(serum glutam ic pyruvic transam inase,SGPT)、肝组织谷丙转氨酶(liver glutam ic pyruvic transam inase,GPT)、超氧化物歧化酶(superoxidase d ismutase,SOD)活性及丙二醛(m alonaldehyde,MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量,采用光镜观察肝脏组织学变化。结果与四氯化碳模型组比较,经TFEH预防性治疗后,GPT、LGPT活性和MDA含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),而GSH含量和SOD活力明显增高(P<0.05)。通过病理学切片观察,TFEH明显改善肝组织的病理变化。结论TFEH对四氯化碳造成的小鼠急性肝损伤具有保护作用。

高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量。方法DiamonsilC18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0．01％磷酸（10：90）；检测波长：273nm柱温：30℃；流速：1mL·min^-1，进样量：5μL。结果没食子酸在0．0t82～0．1824μg线性关系良好，回归方程为Y=2969．4X-4．252，r=0．9999。平均加样回收率为98．36％，RSD为2．83％。结论本方法简便、快速、重复性好，可用于测定地锦草中没食子酸的含量。

肠炎宁片的薄层色谱研究

目的建立肠炎宁片的薄层色谱方法。方法采用不同方法及展开系统,以对照药材为对照,分别对地锦草、黄毛耳草、樟树根、香薷进行薄层色谱方法研究。结果地锦草以正己烷-醋酸乙酯(5∶1)、黄毛耳草以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸(5∶3∶1)、樟树根以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇(5∶3∶0.5)为展开剂,香薷采用聚酰胺薄膜以丙酮-36%醋酸(2∶1)展开剂,均获理想分离效果,且阴性无干扰。结论方法简便、快速、重复性好,可作为肠炎宁片的薄层鉴别方法。

微波消解-原子吸收光谱法分析并比较不同时期地锦草中的微量元素

地锦草为大戟科地锦(Euphorbia humifusa Willd.)的干燥全草,本文采用微波消解技术对采集于不同时期的地锦草进行消解,然后利用火焰原子吸收分光光度法(FAAS)测定了不同时期地锦草中8种微量元素的含量,并且对各微量元素含量在不同时期的变化进行了研究分析。实验结果表明,不同时期地锦草中的微量元素与季节有关,元素Fe在6月的地锦草中含量最高,元素K在8月的地锦草中含量最高,地锦草中Mn在9月时含量最高,元素Na在10月份含量最高,地锦草中Ca含量在11月时最高,地锦草中的Zn,Cu和Mg含量在12月时最高,微量元素Na及Ca的变化比较跳跃,而Cu和Zn含量的变化比较缓和。研究结果可为中药地锦草采集时间的选择提供科学的依据。

5种地锦药材中总黄酮及3个酚酸类成分测定研究

目的建立地锦草药材真伪鉴别标准。方法采用高效液相色谱法及紫外-可见分光光度法对其酚酸类成分及总黄酮进行测定,并用spss软件对数据进行聚类分析。结果建立了地锦草药材3个酚酸类成分(没食子酸、槲皮素、山柰素)的测定方法,使用聚类分析基本可以将其分为四类。结论初步将地锦草药材的两个正品来源和其他3种地锦类植物相互区分开。为地锦类植物的质量评价和开发药材资源,鉴定药用植物真伪提供了技术支持和科学依据。

用正交设计法优化地锦草中总黄酮的超声提取工艺

目的:优化地锦草中总黄酮的超声提取工艺。方法:将地锦草药材粉碎成超微粉末,采用单因素实验考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数对提取效果的影响,以总黄酮含量和浸膏得率为指标,采用L9(34)正交试验设计筛选最优提取工艺条件。结果:最优提取工艺条件为加12倍量的70%乙醇,提取2次,每次1.5h,提取得到总黄酮含量为(6.53±0.04)mg/g,浸膏得率为(15.27±0.55)%(n=3)。结论:该工艺合理、稳定,可用于提取地锦草中的总黄酮。

地锦草槲皮素提取工艺研究

目的对地锦草的提取工艺进行研究。方法采用正交试验法,以槲皮素的含量为考察指标进行试验。结果用地锦草重量10倍量的体积分数为75%的乙醇作为提取溶剂,提取2 h,共提取3次为最佳方案。结论提取方法操作简单、方便,为地锦草槲皮素提取工艺的进一步研究提供了依据。

正交试验优选地锦草中没食子酸的提取工艺

目的通过试验优选大戟科植物地锦草中有效成分没食子酸的提取工艺。方法采用正交试验法，以提取时间、加水量和提取次数为研究考察的主要影响因素，每个因数选取三个水平进行实验设计，以没食子酸的含量为指标进行考察。结果影响地锦草水提取物中有效成分没食子酸含量的因素，按影响大小的顺序依次为提取溶液的用量、提取次数和提取时间，即水的用量为地锦全草的20倍量，总共需要煎煮3次，每次1．5小时为宜。结论在采用水煎煮法提取地锦全草中的有效成分没食予酸的工艺过程中，水的用量是最为重要的因素，这为地锦草中有效成分没食予酸提取工艺的进一步深入研究提供了依据。

维吾尔药材地锦草HPLC指纹图谱的研究

目的:建立地锦草高效液相色谱指纹图谱。方法:Shim-pack ODS C18(150 mm×4.6 mm.i.d.,5.0μm)为色谱柱,甲醇-0.1%磷酸水系统为流动相(梯度洗脱),检测波长为272 nm,柱温为30℃。结果:测定了产于新疆的10批地锦草的指纹图谱,标定了13个共有指纹峰,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。经计算机模拟相似度计算软件计算,相似度大于0.9。结论:建立的HPLC指纹图谱分析方法可作为地锦草的鉴别方法之一,为地锦草的质量控制提供了依据。

正交设计研究蒙药多叶棘豆总黄酮提取工艺

为多叶棘豆总黄酮提取工艺提供依据 ,采用正交设计优选了其最佳参数 .结果表明 ,最佳提取工艺组为A2 B2 C2 ,即加药材 8倍量的 75 %乙醇 ,回流提取 2次 ,每次

地锦草提取物对小鼠血液SOD和MDA的影响

通过小鼠口服地锦草提取物的试验 ,观察其对小鼠血液超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛 (MDA)含量的影响 .结果表明 ,地锦草提取物可明显提高小鼠血液SOD活性 ,降低MDA含量 ,提示地锦草是一种较强的抗氧化植物 .

地锦草提取物对小鼠肝组织GSH-PX和CAT活性的影响

目的:观察地锦草提取物对小鼠肝组织GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)和CAT(过氧化氢酶)活性的影响.方法:地锦草提取物给小鼠连续灌胃28d,1次/d,1ml/次.结果:与空白对照组比较,地锦草提取物可明显提高小鼠肝组织GSH-PX和CAT活性.结论:实验表明,地锦草提取物具有较强的清除自由基及抗氧化、防衰老作用.