穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型PLA2R和IgG4表达的影响及其机制

目的 分析穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 receptor, PLA2R)和免疫球蛋白G亚型4(Immunoglobulin G4,IgG4)表达影响及可能机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、贝那普利组(10 mg/kg)、低和高剂量穿山龙总皂苷组(80 mg/kg、160 mg/kg),每组各8只。除对照组,其余4组采用Border法制备膜性肾病模型,造模成功后,贝那普利组灌胃给予贝那普利10 mg/(kg·d),低和高剂量穿山龙总皂苷组分别灌胃给予穿山龙总皂苷80 mg/(kg·d)、160 mg/(kg·d),对照组、模型组灌胃给予10 ml/(kg·d)生理盐水。连续给药4周后,检测24 h尿蛋白、白蛋白、血肌酐、血尿素氮、尿酸水平,HE染色观察肾脏病理改变,蛋白免疫印迹法检测肾脏中M型PLA2R、IgG4、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated phosphoinositide 3-kinase, p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶(Heme oxygenase-1,HO-1)表达水平。结果 与模型组比较,贝那普利组、高剂量穿山龙总皂苷组白蛋白水平明显升高,血肌酐、血尿素氮、尿酸水平明显降低,差异均有统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,贝那普利组、低剂量和高剂量穿山龙总皂苷组肾脏病理改变明显改善,24 h尿蛋白水平及肾脏中M型PLA2R、IgG4、p-PI3K、p-AKT表达水平明显降低,肾脏中Nrf2、HO-1表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与降低PLA2R、IgG4表达,抑制PI3K/AKT通路,激活Nrf2/HO-1通路相关。

穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364NF-κB p65活性、STAT3及VEGF mRNA表达的影响

目的观察穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α联合诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 NF-κB p65活性、STAT3表达及VEGF mRNA表达水平的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生的作用机制。方法制备穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)含药血清;取大鼠滑膜细胞株RSC-364经IL-17(10μg/L)和TNF-α(10μg/L)、穿山龙总皂苷含药血清、雷公藤多甙片含药血清单独或联合应用孵育,孵育24 h,提取各组细胞核蛋白用于TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测NF-κB p65的DNA结合活性;提取各组细胞总蛋白后应用Western blot方法观察STAT3蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA的表达情况。结果 IL-17+TNF-α诱导的细胞模型组中NF-κB p65的DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGFmRNA表达水平均显著高于空白对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05);与细胞模型组相比,雷公藤含药血清组、穿山龙总皂苷含药血清组的NF-κB p65 DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGF mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且2组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论本研究证实穿山龙总皂苷含药血清可以抑制NF-κB p65的DNA结合活性及STAT3蛋白的表达,考虑穿山龙总皂苷通过上述信号转导途径来调控血管新生关键因子VEGF的产生,进而抑制RA血管新生。

双相酸水解法提取薯蓣皂苷元的研究

目的建立双相酸水解法提取薯蓣皂苷元的最佳条件。方法以薯蓣皂苷元得率为指标,采用单因素法建立双相酸水解法从穿山龙中提取薯蓣皂苷元的最佳条件。结果按照穿山龙样品∶浓盐酸∶甲醇∶水∶石油醚(10∶21∶60∶19∶100)的比例加入反应体系,在沸水浴中加热回流提取6h,获得比传统方法更高的得率。结论双相酸水解法提取薯蓣皂苷元简便易行,周期短,提取率高。

星点设计-响应面分析法优选穿山龙总皂苷提取工艺

目的采用星点设计-响应面分析法优化穿山龙中薯蓣皂苷的醇提取工艺。方法选用乙醇为提取溶剂,以乙醇浓度、乙醇倍数、提取时间为自变量,薯蓣皂苷含量为因变量,采用响应面分析法优化穿山龙中薯蓣皂苷的提取工艺参数。结果确定了提取工艺的最佳条件为:乙醇浓度70%,提取时间3 h,乙醇倍数4.5倍。在此条件下穿山龙醇提取物中薯蓣皂苷的含量为3.092%,二项式拟合复相关系数R2=0.974 2。结论该工艺可用于穿山龙中薯蓣皂苷的提取,方法简单,预测性较好。

基于痛风性关节炎ABCG2尿酸转运靶点的穿山龙调控机制研究

目的:首次引入ABCG2尿酸转运蛋白,探讨其在痛风性关节炎中的作用机制和穿山龙总皂苷的干预作用。方法:通过Real-time PCR和Western blot方法,检测高尿酸血症小鼠肾脏ABCG2转运蛋白的mRNA和蛋白表达水平。结果:模型组m ABCG2的mRNA和蛋白表达量均明显降低(P<0.001)。穿山龙总皂苷低剂量组可明显回调该基因的mRNA表达(P<0.001),穿山龙总皂苷高、中剂量组均可回调ABCG2 mRNA表达(P<0.05,P<0.001)。穿山龙总皂苷高、中、低剂量组均可回调ABCG2蛋白的表达(P<0.001,P<0.05和P<0.05)。结论:穿山龙总皂苷可通过对肾脏尿酸转运体ABCG2的调控来促进尿酸的排泄实现对高尿酸血症的降尿酸作用。

穿山龙药理及临床研究

穿山龙的主要成分为薯蓣皂苷,具有调节免疫等多种药理作用。现代已作为甾体激素药物和抗冠心病皂苷类药物的重要工业原料。主要药理作用有抗炎、平喘、抗肿瘤、降低血糖、降血尿酸等作用。临床主要用于治疗支气管哮喘、风湿性关节炎、肿瘤、糖尿病等。

穿山龙总皂苷对胶原性关节炎大鼠炎性细胞因子的影响

目的观察穿山龙总皂苷(total saponin from Rhizoma Dioscorea nipponica,TSRDN)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清中炎性细胞因子的影响,初步探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)可能的作用机制。方法建立CIA大鼠模型。于初次免疫后第14天,将造模成功的大鼠随机分为CIA模型组,穿山龙总皂苷高、中、低剂量组,雷公藤组。其中穿山龙总皂苷高、中、低剂量组分别经胃灌服100 mg.kg-1.d-1,50 mg.kg-1.d-1、25 mg.kg-1.d-1剂量的穿山龙总皂苷,雷公藤组灌服12 mg.kg-1.d-1剂量的雷公藤多苷,正常对照组、CIA模型组灌服等体积溶媒。用药后21 d,记录各组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数;测定血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;观察关节滑膜病理变化。结果经穿山龙总皂苷灌胃治疗21 d后,与模型组相比,治疗组大鼠后肢体积、足垫厚度、关节炎指数有降低趋势(P>0.05),大鼠滑膜增生减轻,炎细胞浸润减少,软骨及骨组织侵蚀破坏减轻,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.01)。结论穿山龙总皂苷能明显降低CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平,减轻滑膜组织的病理损伤,表明其对治疗类风湿关节炎有一定作用。

中药穿山龙对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞影响的实验研究

目的：观察穿山龙对哮喘豚鼠肺内Eos及炎性因子IL-5、IL-3、GM-CSF水平的影响。方法：健康豚鼠50只随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组、穿山龙＋醋酸泼尼松组及穿山龙组（n=10）。采用卵白蛋白致敏激发法建立哮喘豚鼠模型,观察药物对豚鼠诱喘时间、喘息持续时间的影响以及激发前后呼吸频率的变化;低倍镜下观察各组BALF中Eos及肺组织中Eos浸润情况;ELISA法测定IL-5、IL-3、GM-CSF的含量。结果：穿山龙各治疗组能明显延长卵白蛋白对豚鼠的诱喘时间、减短喘息持续时间及减慢哮喘发作后的呼吸频率;穿山龙各治疗组豚鼠BALF及肺组织中Eos数量明显低于模型组;穿山龙各治疗组肺组织匀浆中IL-5、IL-3、GM-CSF浓度明显低于模型组（P〈0.05-P〈0.01）。结论：穿山龙能减少哮喘豚鼠肺组织Eos的浸润,减低细胞因子IL-5、IL-3、GM-CSF的含量,从而减轻哮喘气道炎症。

穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜组织AP-1表达的影响

目的观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节滑膜组织激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)mRNA表达水平及活性的影响,旨在探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法将造模成功的36只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组,另设正常对照组,每组12只。造模成功以后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35 d。应用原位杂交方法检测滑膜组织中AP-1的两个亚单位c-fos和c-jun的mRNA表达水平;凝胶电泳迁移率实验检测滑膜组织核蛋白提取物AP-1的DNA结合活性。结果与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜组织中c-fos和c-jun的mRNA表达水平以及滑膜细胞核蛋白提取物中AP-1的DNA结合活性均显著增高(P<0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组的c-fos和c-jun的mRNA表达水平以及滑膜细胞核蛋白提取物中AP-1的DNA结合活性均显著降低(P<0.01)。结论穿山龙总皂苷可能通过抑制转录因子AP-1来调控血管新生相关基因的表达,抑制血管新生来起到治疗RA的作用。

穿山龙降糖制剂的降糖药理作用研究

目的:本实验筛选穿山龙提取物降血糖有效部位,为制备穿山龙降糖制剂做基础准备。方法:应用大鼠模型,通过测定空腹血糖、糖化血红蛋白、空腹血清胰岛素等指标,确定穿山龙降血糖有效部位。结果:治疗前后各组大鼠体重呈逐渐下降趋势,正常组呈增长趋势;治疗前后正常组大鼠空腹血糖呈水平变化,穿山龙组血糖表现为下降趋势、二甲双胍组大鼠空腹血糖呈先下降后上升趋势,模型组大鼠空腹血糖呈逐渐增长趋势;治疗8周后,模型组、穿山龙组、二甲双胍组与正常组比较,均有统计学意义(P<0.01);治疗8周后,模型组、二甲双胍组空腹血清胰岛素水平与正常组比较,穿山龙组空腹血清胰岛素水平与正常组比较,均有统计学意义(P<0.05)。结论:穿山龙降血糖有效部位具有较好的治疗效果,可制备成穿山龙降糖制剂。

Caspases在哮喘大鼠肺内的表达及中药穿山龙对其干预作用的研究

目的:观察Caspase-3,Caspase-9在哮喘大鼠肺组织中的表达及中药穿山龙对其的干预作用。方法:健康大鼠50只随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组、穿山龙+醋酸泼尼松组及穿山龙组,采用卵白蛋白致敏及激发法建立哮喘大鼠模型;实验第15天起各组均于雾化吸入2h后灌胃给药,每天1次,连续给药7天;于末次雾化激发后24h,处死各组大鼠并收集标本。镜下观察各组大鼠肺组织病理形态学改变中及EOS浸润情况,采用RT-PCR及Western blot法测定肺组织中凋亡因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平。结果:穿山龙各治疗组大鼠肺组织病理形态学改变显示炎症程度较模型组明显减轻(P<0.01);穿山龙各治疗组大鼠肺组织中凋亡因子caspase-3和caspase-9 mRNA及其蛋白表达较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:中药穿山龙能明显减轻哮喘气道炎症,其机制可能与通过促进凋亡因子Caspase-3和Caspase-9的表达,来调控哮喘大鼠肺组织中EOS的凋亡有关。

反相高效液相色谱法分析穿山龙中薯蓣皂苷元的含量

目的:建立测定穿山龙中薯蓣皂苷元含量的反相高效液相色谱法,从而为控制穿山龙的质量提供参考。方法:采用双相酸水解法提取穿山龙中的薯蓣皂苷元;使用 Agilent Zorbax 色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水(94:6)为流动相,检测波长为203 nm,流动相流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为40℃。结果:样品中的薯蓣皂苷元可以与各干扰组分达到基线分离;用本法测定薯蓣皂苷元的线性范围为1.055～21.10 μg;重复性试验(n=6)RSD=1.7%;平均回收率(n=6)达到96.8%,RSD=1.5%;试验中测得穿山龙中薯蓣皂苷元的平均含量(n=6)为1.61%,RSD=1.7%。结论:本方法具有供试品溶液制备简便,检测灵敏,线性范围宽,重复性好等优点,适合于穿山龙中薯蓣皂苷元的含量测定。

正交试验法优选穿山龙总皂苷的提取工艺

目的 优选穿山龙总皂苷的提取工艺。方法 采用正交试验法 ,以总皂苷提取率和总皂苷中薯蓣皂苷元的含量为指标进行试验。结果 加入碱的量对指标均具有非常显著性差异 ,而浸渍时间均无显著性差异。优选的最优工艺为 :加入 5 %的碱 ,密闭 12h ,浸渍 2 4h。结论 该工艺简单 。

穿山龙治疗急性痛风性关节炎有效部位的实验研究

目的:确定穿山龙治疗大鼠急性痛风性关节炎的有效部位。方法:应用微晶尿酸钠诱导大鼠急性痛风性关节炎和氧嗪酸钾诱导小鼠高尿酸血症模型,依据抗炎、镇痛、降尿酸等药效学指标的筛选,确立穿山龙抗急性痛风性关节炎的有效部位。结果:30%乙醇洗脱液可显著降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平、明显改善大鼠关节滑膜组织的病理形态学改变、减少扭体次数。结论:穿山龙水提取物的30%醇洗脱部分为其治疗急性痛风性关节炎的有效部位。

中药穿山龙新的药理作用及其有效部位的实验研究

目的:本实验首次通过探索性、创新性研究探讨中药穿山龙降低血尿酸的药理活性并筛选其有效部位。方法:对穿山龙的不同溶剂提取物进行筛选,结果显示穿山龙水提取物降低血尿酸的作用最为显著,采用D101型大孔吸附树脂柱进一步分离,将洗脱部分通过药效学指标筛选,得出穿山龙降尿酸有效部位。结果:水提取物30%乙醇洗脱部分可显著降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平。结论:穿山龙水提取物的30%醇洗脱部分为降低血尿酸的有效部位。

穿山龙总皂甙对佐剂性关节炎大鼠病理改变的影响

目的:观察穿山龙总皂甙治疗对佐剂性关节炎大鼠(AA)的大体形态及镜下关节病理结构改变的影响。方法:将AA大鼠随机分为对照组、实验组和阳性药物组,连续灌胃给药8天,观察AA大鼠大体表现,计算关节肿胀度、关节炎指数,镜下观察胸腺、脾和关节病理变化。结果:不同剂量(20mg/kg.d-1、40mg/kg.d-1、80mg/kg.d-1)的穿山龙总皂甙均能明显改善AA大鼠的关节炎症状,其关节肿胀度、关节炎指数与对照组比较有显著差异(P<0.01)。病理结果显示高、中、低剂量组大鼠关节滑膜组织增生及炎性细胞浸润均较对照组明显减少,关节软骨破坏有所减轻。结论:穿山龙总皂甙有良好的抗炎作用。

穿山龙水溶性总皂苷对类风湿患者成纤维样滑膜细胞核因子κB p65的抑制作用

【目的】观察穿山龙水溶性总皂苷对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞核因子κB(NF-κB)p65及其抑制因子IκB-α蛋白水平和mRNA含量的影响。【方法】培养类风湿患者成纤维样滑膜细胞,分为穿山龙水溶性总皂苷低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组,10、20、30 mg/L),模型组,同时设立空白对照组;经药物干预后,采用Western blot法测定NF-κB和IκB-α蛋白水平,采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测成纤维细胞中NF-κB和IκB-αmRNA的表达。【结果】经穿山龙干预后的关节炎患者成纤维样滑膜细胞的NF-κB活化受到显著抑制,蛋白及基因表达水平较模型组显著下降(P<0.05),IκB-α蛋白及基因表达显著提升(P<0.05)。【结论】穿山龙水溶性总皂苷可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的核转录因子的表达,这可能是穿山龙治疗类风湿关节炎的机理之一。

基于连作障碍条件下穿山龙皂苷类活性成分的含量变化

目的采用高效液相色谱法对不同连作条件下穿山龙中的皂苷类活性成分进行含量测定,探讨不同连作条件对于穿山龙皂苷类活性成分含量的影响。方法采用RP-HPLC,色谱柱:Agilent TC-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱;流速1.0 mL/min,柱温:35℃,检测波长:203 nm,计算皂苷类成分含量,并采用SPSS等软件对所得结果进行分析。结果吉林通化种植基地的穿山龙中,除了甲基原薯蓣皂苷为连作一茬3年时含量最高,其他三种皂苷类成分原薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、薯蓣皂苷均为正茬4年时最高,而后随着连作年限的增加,含量逐渐减少,并且原薯蓣皂苷与薯蓣皂苷含量呈正相关。结论穿山龙随着连作年限的增加,其皂苷类活性成分的含量也随之下降,说明连作障碍对其皂苷类活性成分的含量积累造成了影响,但正茬4年时其皂苷类成分总含量最高,提示正茬4年为采收最佳时间,这为该药材的质量控制及GAP规范种植提供了依据和示范。

穿山龙总皂苷对高尿酸血症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸代谢的影响

目的:探究穿山龙总皂苷对高尿酸血症(HUA)大鼠肠道菌群及短链脂肪酸的影响。方法:30只SD大鼠随机分为3组,分别为空白组(Control)、模型组(Model)、穿山龙总皂苷组(TSRDN),每组10只。空白组正常饲养,其余组连续35 d给予10%酵母饲料和5%氧嗪酸钾溶液进行HUA模型复制,从第15~35天,穿山龙总皂苷组按照480 mg/kg的剂量灌胃给予穿山龙总皂苷溶液。结果:连续造模14 d即可复制HUA模型,SUA、SBUN水平升高(P<0.01)。连续给药干预21 d,穿山龙总皂苷能够显著降低SUA、SBUN水平(P<0.01)。HUA大鼠肠道菌群中的厚壁菌门和拟杆菌门的丰度相对较高(P<0.01)。穿山龙总皂苷能显著升高HUA大鼠肠道菌群厚壁菌门、乳酸杆菌属、梭菌属、瘤胃菌属、鼠李糖乳杆菌种、约氏乳杆菌种、罗伊氏乳杆菌种的丰度(P<0.05,P<0.01)。利用GC-MS技术检测大鼠粪便中SCFA的含量变化,结果显示穿山龙总皂苷能显著提升HUA大鼠粪便中丙酸、丁酸的含量(P<0.01)。结论:穿山龙总皂苷可以调控菌群代谢产物SCFA的含量变化,促进有益菌在肠道内繁殖,同时抑制有害菌的生长。

穿山龙总皂甙对小鼠免疫功能的影响

目的 :研究穿山龙总皂甙对小鼠免疫功能的影响。方法 :采用小鼠绵羊红细胞溶血素抗体生成试验模型和小鼠二硝基氟苯所致迟发型超敏反应试验模型 ,观察药物对体液和细胞免疫功能的影响。结果 :1g.kg-1穿山龙总皂甙灌胃给药可明显降低小鼠绵羊红细胞溶血素抗体生成和二硝基氟苯所致迟发型超敏反应 ,与溶媒组比较 P<0 .0 5,作用强于 2 mg.kg-1强的松。结论