柿叶提取物对高血糖大鼠血糖及肝糖原含量的影响

目的:通过研究柿叶提取物对高血糖大鼠的血糖及肝糖原含量的影响,初步探讨柿叶的降血糖作用及其机制。方法:采用四氧嘧啶制备高血糖大鼠模型,葡萄糖氧化法测定大鼠的空腹血糖,并通过对肝脏组织匀浆糖原含量生化测定和肝脏组织糖原染色及病理评分来初步评价药物对肝糖原含量的影响。结果:与高糖模型组比较,柿叶提取物组可显著降低空腹血糖(P<0.01),明显增加肝糖原含量(P<0.01),增高糖原染色评分。结论:柿叶提取物具有显著的降血糖作用,并能增加肝糖原的含量。

柿树乙醇脱氢酶活性与可溶性单宁含量的关系

研究了4种不同脱涩类型柿(Diospyros kaki Thunb.)果实和叶片中的可溶性单宁含量、乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性和ADH最适反应温度,以了解ADH在脱涩过程中的作用。结果表明:不完全甜柿和完全甜柿果实发育前期,可溶性单宁含量逐渐降低,ADH活性逐渐增高,到果实基本完成脱涩后,ADH活性又开始降低,在不完全甜柿中变化较大;涩柿和不完全涩柿在果实近熟期,可溶性单宁含量有所下降,但不能完成脱涩,且ADH活性较低。叶片发育过程中,可溶性单宁含量的变化与ADH没有相关性。ADH的最适反应温度在25℃左右。ADH与柿果实脱涩有一定关系。

湖北省柿子产业现状及发展对策

湖北省柿子种质资源丰富,拥有我国唯一原产的甜柿种质——罗田甜柿,是我国甜柿生产的最适宜区域之一。经过考察调研,基本摸清了湖北省柿子产业的生产现状及存在的问题,提出了促进湖北省柿子产业可持续发展的对策。

柿EST-SSR引物的开发及筛选

为丰富柿树SSR引物来源,利用从NCBI下载的9 474条柿属EST序列开发柿EST-SSR引物,并用于分析7个柿品种的遗传多样性。EST序列经去除低质量及冗余片段后拼接成1 390条重叠序列和4 097条无重复序列。共搜索到601条EST序列中含有540个SSR。SSR出现频率为10.96%,其中以2核苷酸为主(61.06%)。利用检出的SSR-ESTs序列设计SSR引物100对,对7个柿样品进行了PCR扩增,31对引物有扩增带,占设计引物的31%,其中14对引物有多态性,占可扩增引物的45.2%。同时发现引物68是临潼板柿的特异引物。引物68的P68-115、P68-160和P68-210处为临潼板柿的3个特异性标记位点,而引物28的P28-225是麻城秋艳的特异性标记位点。

基于IRAP技术的磨盘柿变异单株鉴定

以已知亲子关系的柿品种、柿近缘种和磨盘柿标准品种为对照,对采自北京市房山区磨盘柿产区的部分变异单株进行了IRAP分析。结果表明,19条逆转座子引物中的4个(rtdk13-f5,rtdk16-r10,rtdk4-p3和rtdk2-p6)可将供试11份变异单株完全区分;供试变异单株间的相似系数在0.90～0.98(平均0.94),与磨盘柿标准品种的相似系数为0.91,大于种间和品种间相似系数,与芽变类型及其母株间的相似系数接近;聚类分析结果表明,变异单株与磨盘柿标准品种紧密相聚,分支模式与种间及品种间明显有别。因此,供试11份变异单株已发生部分遗传物质改变,且可能为磨盘柿芽变。IRAP可区分遗传背景高度相似的种质间的微小变异,可望在果树芽变鉴定中应用。

柿叶黄酮的大孔吸附树脂分离提纯富集

目的研究8种不同类型吸附树脂对柿叶黄酮的吸附特性。方法测试它们对柿叶黄酮的吸附率、吸附速率、解吸率和产物得率及其黄酮含量。结果发现聚酰胺和AB8树脂对柿叶黄酮吸附量大,吸附快、解吸容易,吸附后产物黄酮含量高。结论聚酰胺和AB8树脂是一种性能良好的柿叶黄酮吸附剂,可用于从柿叶提取物中富集制备含量达70%以上的柿叶黄酮,为柿叶黄酮的开发提供新工艺。

罗田甜柿Ty1-copia类逆转座子RNaseH-LTR序列的分离和特性分析

逆转座子序列信息的获得,对了解其在基因组中的行为及系统学研究有重要价值。本试验从罗田甜柿(Diospyros kaki Thunb.‘Luotian-tianshi’)基因组中分离出31个RNaseH-LTR(long terminal repeat,长末端重复)序列,并利用逆转座子间扩增多态性(inter-retrotransposon amplified polymorphism,IRAP)技术对部分序列相应的逆转座子家族在柿属植物中的转座活性及分布情况进行初步探讨。序列分析结果表明,至少有10个Ty1-copia类逆转座子家族得到扩增;其家族间普遍表现高度异质,碱基替换、插入或缺失突变,以及翻译成氨基酸后发生不同程度的终止密码子突变、氨基酸取代和移框突变等,是产生高异质性的原因;此外,其家族内部某些序列间的相似性极高,可能是寄主基因组与逆转座子间互惠关系的体现。应用部分逆转座子引物的IRAP分析结果表明,相应的逆转座子家族在柿属植物中普遍存在,其分布广泛,拷贝数高,转座活性强,具有进一步开发为多种逆转座子分子标记的潜力。

矿质元素与“恭城水柿”顶腐病发生研究

【目的】分析矿质元素与"恭城水柿"(Diospyros kaki Thunb.)顶腐病发生关系,为顶腐病防治提供理论依据。【方法】测定21个恭城水柿顶腐病发病柿园中果实、叶片及土壤N、K、Ca、Mg、Mn、B含量,运用多重比较、多元回归、通径分析等方法,系统分析矿质元素及其比值与顶腐病发生关系。【结果】随顶腐病发病程度加深,叶片钙浓度显著降低。发病率与叶片硼浓度呈显著负相关,相关系数为-0.480 1,与土壤p H极显著负相关,相关系数为-0.667 7,与土壤速效钾/交换性钙值存在极显著正相关,相关系数为0.564 1,与土壤水解性氮/交换性钙显著正相关,相关系数为0.506 8。土壤p H和叶片钙含量对顶腐病发生存在较大直接负作用,通径系数分别为-1.222、-0.824。【结论】恭城水柿顶腐病与生理性缺钙关系密切。同时,恭城当地酸化、高镁、高氮的土壤环境均不利于柿对钙吸收与转运,从而导致矿质营养失衡、进而易发生顶腐病。

罗田甜柿种质资源ISSR分子标记初步鉴定

分别采集湖北省罗田县、麻城市自然分布的28、8株罗田甜柿(Diospyros kaki Thunb cv.Oriental persimmon)古树优系及小涩柿、无核、宝盖、秋焰甜柿优系为研究材料,利用简单重复序列间扩增分子标记(Inter simple sequence repeat,ISSR)技术对40个甜柿优系进行初步认证及亲缘关系分析。结果表明:1从21条ISSR引物中筛选出了9条能够扩增出清晰、稳定条带的引物,9条引物共扩增出185条谱带,其中多态性条带有185条,多态性条带比率为100%;2应用NTSYS2.10e软件对扩增结果进行非加权组平均法(Unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)聚类分析,40个甜柿优系大致被分为两大类,遗传相似系数从0.39到0.92;3罗田甜柿古树基因资源丰富,每个基因型都有其独特的指纹图谱,遗传多样性高。罗田甜柿优系间的亲缘关系与地理来源有一定的相关性,麻城市与罗田县地理位置交界区域的罗田甜柿资源相对集中在A区,其他地理位置采集优系集中在B区。分析结果可为罗田甜柿种质资源开发、基因资源保存、后期品种审定及鉴别提供理论依据。

第五届国际柿学术研讨会总结报告

介绍了第五届国际柿学术研讨会(2012年10月20-26日,武汉-恭城)概况;主要基于该会议提供的资料和信息,总结了世界范围内柿学和柿业现状和发展趋势,分析了我国柿生产和科学研究取得的成就及其与先进国家间的差距,并对未来我国柿产业的发展提出了若干建议。

柿树寄主的桑寄生科7种不同属种桑寄生药用植物中槲皮苷含量分析

目的：测定柿树寄主的桑寄生科7种不同属种的桑寄生药用植物中槲皮苷含量。方法：采用HPLC法对柿树寄主的桑寄生科7种不同属种桑寄生药用植物槲皮苷含量进行测定，样品采用甲醇超声提取方法制备，用Inertsil ODS-SP 色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm），甲醇-0.1%磷酸溶液（52：48）为流动相，流速1.0 mL·min-1，检测波长254 nm。结果：槲皮苷的线性范围0.21-350.00 mg·L-1（ r =0.9999），平均回收率为98.86%，RSD=2.31%。桑寄生科7种不同属种药用植物茎枝中槲皮苷含量为0.3589-3.6770 mg·g-1，叶中槲皮苷含量为5.0091-76.3813 mg·g-1。结论：桑寄生科不同属种桑寄生药用植物槲皮苷的含量各不相同，主要存在于叶中，而茎枝中的含量较低。

柿树乙醇脱氢酶在果实发育期及不同器官间的分布特点

为研究不同类型柿果实的脱涩与乙醇脱氢酶(ADH)之间的关系,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对4种类型的5个柿品种不同部位和果实不同发育时期的ADH进行了同工酶分析。结果表明:成熟期的果实中,不同脱涩类型柿果实的ADH均表现2条谱带,完全甜柿和不完全甜柿果实的ADH酶带谱型一致,不完全涩柿果实的ADH酶带中独有一条更靠近负极的谱带,而完全涩柿中则没有检测到ADH同工酶带;果实发育过程中,2个完全甜柿出现酶带的时期较早,分别在7月中旬和8月中旬,不完全甜柿和不完全涩柿则在果实发育后期(8月底和9月中旬)出现酶带,而完全涩柿果实从始至终都没有出现ADH同工酶带。不同器官的ADH同工酶电泳结果表明,果实成熟时在不同器官中共检测到5条ADH同工酶谱带,其中酶带b、酶带d、酶带b和c分别是柿果实、叶片、枝皮的特征性酶带,说明ADH同工酶具有器官特异性。本试验初步研究了柿果实发育过程中ADH在不同器官的分布特点,为进一步研究ADH在柿不同脱涩类型果实脱涩机制中的作用及其相关基因表达提供参考。

颐和园古柿树组织培养快繁体系的建立

以北京颐和园的古柿树当年新生的嫩芽切段为外植体进行组培快繁研究。结果表明,不定芽启动培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5g/L PVP。将无菌苗转接到最适分化培养基(1/2MS+5.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.5g/L PVP)上,组培苗分化效率较高,但小苗矮小。将分化较好的组培苗转接到壮苗培养基(1/2MS+2.0mg/L ZT+0.1mg/L IAA+0.5g/L PVP),待组培苗长至2～3cm转到生根培养基(1/2MS+0.6mg/L NAA+0.3mg/L IBA+0.5g/L PVP),暗培养9～10d后转接到生根培养基(1/2MS+0.5g/L PVP),生根率为30%。而将组培苗茎段预先用250mg/L的IBA或IAA浸泡2min,生根率可提高到40%。生根组培苗经炼苗后移栽成活率可达60%。

罗田甜柿总三萜的提取条件分析

为了确定罗田甜柿(Diospyros kaki Thunb.)成熟果实中总三萜含量和提取条件,以湖北省罗田县的罗田甜柿果实为试材,从不同的溶剂、乙醇体积分数、提取时间、温度、料液比、提取次数来确定提取罗田甜柿成熟果实中总三萜的最佳条件,结果表明,通过单因素试验确定提取条件为70%乙醇作为溶剂,提取时间3 h,温度85℃,料液比1∶11(m∶V,g∶m L),提取2次,总三萜提取量最高可达51.13 mg/100 g(FW)。

热激处理对甜柿外植体活性氧代谢的影响

以宝华甜柿(Diospyros kaki c.v.‘Baohuatianshi’)为材料,在对试验材料进行热激处理后,检测了活性氧代谢相关生理指标的变化情况。结果表明,经过热激处理后,与对照相比,外植体内超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力出现了提高,丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)的含量则有所降低。说明热激处理能够降低活性氧含量,保护了细胞膜结构的完整性,抑制了褐变发生。

内切酶接头引物对柿属SSAP分子标记扩增的影响

SSAP(sequence-specificam plification polymorphism,序列特异扩增多态性)是种质遗传多样性分析和系统进化研究的有力工具之一。根据10个SSAP引物组合对28份柿属基因型的扩增结果探讨内切酶因素对SSAP逆转座子分子标记扩增的影响。结果表明,在以MseI和EcoRI组合消化的SSAP反应系统,且均以3个碱基作为末端选择性碱基的前提下,MseI与逆转座子引物组合的SSAP扩增性能优于EcoRI与逆转座子引物组合。研究结果为有目的和高效选择内切酶引物进行植物种质资源SSAP分析提供参考。

柿不同部位微量元素的测定

用火焰原子吸收光谱法来测定锦屏产柿不同部位微量元素Fe、Cu、Co及Cd的含量,结果表明,Fe在柿树的树皮、根皮、叶子和蒂4个部位中含量最高,其次为蒂中的Cu,根皮中的Co.其中Co在柿树皮中没有检测出,Cd在4个部位中均未检测出来.作为药材,柿树这4个部位是安全的,值得开发.

柿树内生细菌的分离与鉴定

[目的]了解柿树内生细菌的多样性及分布规律。[方法]采用平板分离法对柿树内生细菌进行首次分离、筛选和鉴定。[结果]从柿树根、幼茎和叶中共分离出内生细菌11株,不同组织中内生细菌的数量存在差异;经菌落形态特征和显微形态观察鉴定分属于4个属,即短小杆菌属(Curtobacterium)1株、芽孢杆菌属(Bacillus)7株、乳杆菌属(Lactobacillus)1株、假单胞菌属(Pseudomonas)2株。[结论]柿树内生细菌具有生物多样性。

柿叶化学成分研究

目的：研究柿叶中化学成分。方法：利用各种色谱方法对柿叶进行提取、分离和纯化,根据波谱数据分析及文献比对鉴定化合物结构,并经体外活性筛选,考察化合物清除DPPH和ABTS能力。结果：从柿叶中分离得到12个单体化合物,分别鉴定为：2-（（R）-1-羟乙基）-3-甲基马来酰亚胺（1）、2-（2-羟乙基）-3-甲基马来酰亚胺（2）、羟基酪醇（3）、原儿茶醛（4）、原儿茶酸（5）、C-藜芦酰乙二醇（6）、3-（4-羟基-3-甲氧苯基）-1,2-丙二醇（7）、乙酰对羟基苯乙醇（8）、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸（9）、2,4-二羟基-6-甲基苯乙酮（10）、香豆酸甲酯（11）、4-烯丙基儿茶酚（12）。化合物3、5、7、12对DPPH和ABTS的清除率的IC50分别为0.7-36.0和3.6-6.1μg/mL。结论：其中,化合物1为新构型化合物,化合物1、2、6-8、10为首次从该属植物中分离得到,化合物1-3、6-8、10-12为首次从该植物中分离得到。药理活性结果表明化合物3、5、7、12具有较强的抗氧化活性。

柿SCoT-PCR体系优化及品种遗传多样性分析

选用国家柿种质资源圃中24个牛心柿和22个野柿为实验材料，采用L16（4^5）正交试验设计，建立了最优SCoT-PCR反应体系（20μL反应体系中，含Mg^2＋ 2．0mmol／L，dNTPs0．2mmol／L，Taq聚合酶l.0U，引物0．5μmol／L，DNA模板80ng），并对不同引物的退火温度进行了优化，以探讨SCoT标记在柿亲缘关系鉴定和品种分类方面的应用。结果显示：（1）10条SCoT引物对46份材料共扩增出176个位点，其中多态性位点170个，多态率达96．6％；46份材料的遗传相似系数在0．619～O．852之间。（2）UPGMA聚类分析显示，SCoT标记能将46份材料完全区分开，其中：红花雄野毛柿、红花雌野毛柿单独被聚为一组，独立于牛心柿和野柿之外，与形态特征观察结果一致；璧山牛心柿与野柿聚为一组，在形态特征上璧山牛心柿也更趋于野柿，且璧山牛心柿为四倍体，与其他牛心柿（六倍体）不同，璧山牛心柿应属于野生柿。研究表明，SCoT标记是研究柿种质资源遗传多样性的有效手段；46份材料存在着较高的遗传多样性，在一定程度上反映了品种的地理分布情况，也说明地理因素对柿的亲缘关系有很大影响。