STUDIES ON SEPARATION AND DETERMIINATION OF THE LIGNANS IN DIPHYLLEIA SIENSIS LI BY RP-HPLC

A simple,sensitive and accurate RP-HPLC method for the separation and determination of eight lignans in Diphylleia sinensis was described.The method has been applied to the analysis of different samples.

Two new flavonoid diglycosides from Cephalotaxus sinensis

Two new acetylated flavonoid diglycosides, scutellarein-5-O-[α-L-rhamnopyranosyl-（1 → 4）-β-D-6-O-acetylglucopyranoside]（1）, apigenin-5-O-[α-L-rhamnopyranosyl-（1→ 2）-β-D-3,6-di-O-acetylglucopyranoside] （2）, were isolated from the leaves of Cephalotaxus sinensis. Their structures were determined by chemical and spectroscopic methods including HR-FAB-MS,^1H-^1H COSY, HSQC and HMBC experiments.

山荷叶中木脂素成分的研究

从陕西产山荷叶(Diphylleia sinensis Li.)根茎中分得9个木脂素和1个黄酮化合物,通过光谱分析证明化合物Ⅸ为新木脂素,即苦鬼臼素-1-乙基醚(picropodophyllin-1-ethyl ether),其它化合物分别为鬼臼毒素(podophyllotoxin,Ⅰ)、异苦鬼臼酮(isopicropodophyllone,Ⅱ)、去氢鬼臼毒素(dehydropodophyllotoxin,Ⅲ)、山荷叶素(diphyllin,Ⅳ)、苦鬼臼素(picropodophyllin,Ⅴ)、鬼臼酯酮(podophyllotoxone,Ⅵ)、4′-去甲基鬼臼毒素(4′-demethylpodophyllotoxin,Ⅶ)、苦鬼臼素葡萄糖甙(picropodophyllin slucoside,Ⅷ)和山奈酚(kaempferol,Ⅹ)。其中化合物Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ和Ⅷ为首次从山荷叶属植物中分得。

桃儿七和南山荷叶内生真菌的生物活性研究

通过研究桃儿七(Sinopodophyllum hexandrum)与南方山荷叶(Diphylleia sinensis)的内生真菌的生物活性,探讨内生真菌作为生物活性物质资源开发利用的价值。测定内生真菌发酵液的抗细菌、抗真菌、抗卤虫活性后,发现大多数菌株的发酵液都具有不同的生物活性。高活性菌株集中于镰孢霉属、柱孢属、木霉属、色串孢属。桃儿七内生真菌抗真菌活性较强,南方山荷叶内生真菌抗细菌和抗卤虫活性较强。桃儿七和南方山荷叶内生真菌是寻找有价值的活性成分的良好资源。

HPLC法分离和测定山荷叶中的鬼臼毒素

目的：建立高效液相色谱法分离和测定山荷叶中鬼臼毒素的方法。方法：色谱柱ＷｈａｔｍａｎＰａｒｔｉＳｈｅｒｅＣ１８，流动相甲醇－０１ｍｏｌ·Ｌ１磷酸氢二钾（５０∶５０），检测波长２９０ｎｍ。结果：鬼臼毒素的线性范围００２６～０１３０μｇ，ｒ＝０９９９７，回收率为１０１４％，ＲＳＤ＝１２％。结论：方法准确、快速、简便。可用于其它鬼臼类植物中鬼臼毒素的测定。

三种江边一碗水的比较鉴别(Ⅰ)

目的:抽样鉴定市场中江边一碗水来源,为拟定质量标准和鉴别真伪提供参考。方法:对市场中6批江边一碗水性状和显微特征进行比较鉴别。结果:江边一碗水分别为小檗科植物南方山荷叶Diphylleia sinensisLi.、八角莲Dysosma versipellis(Hance)M.Cheng及六角莲Dysosma pleiantha(Hance)Woods.的干燥根茎。结论:3种来源的江边一碗水的性状、显微鉴别特征区别明显。

小檗科鬼臼亚科种子大小变异式样及其生物学意义

分析了小檗科鬼臼亚科4个属代表植物桃儿七、川八角莲、南方山荷叶以及足叶草种子大小及其变异式样并对该变异式样的生物学意义予以了分析。结果显示：①在4种植物干种子中，以川八角莲最重，为3724±6．71mg，桃儿七次之，为36．56±4．54mg，足叶草最轻，为19．01±3．21mg，南方山荷叶较足叶草稍重，为23．22±3．26mg；②每种植物均存在一定比例的活力低下种子，其中以桃儿七最低，为1．0％，川八角莲最高，为6．0％，南方山荷叶与足叶草分别为4．5％及3．5％；③种子形态变异大小与传粉方式具有较大的关系，异花授粉植物种子形态变异较大，而自花授粉植物种子形态变异较小；④种子大小与植物生活环境有密切的关系，生活在稳定、荫蔽度高以及干旱生境中的种具有较大的种子，而生活在开旷、受干扰严重或潮湿生境中的种类具有较小的种子；桃儿七种子大小与海拔高度成负相关。⑤在种间，种子大小与植株产果数、果实大小以及果实内种子数量无明显的相关性，但一般与单株产种子数量成负相关；在种内，种子大小与果实内种子数成负相关，与果实大小成负相关。

中华山荷叶内生真菌的分离及其发酵产生药用成分的初步研究

目的 从采自云南省中甸县的中华山荷叶 (DiphylleiasinensisLi)的根状茎中分离出可产生鬼臼毒素或其类似物的内生真菌。方法 按常规无菌方法分离内生真菌 ,纯化后接种于PDA斜面备用 ,液体培养基为改良的MM培养基。用TLC和HPLC方法对发酵产物进行检测。结果 经TLC检测 ,发现 99SJ2 1的Rf值与标样的Rf值相同。经HPLC分析 ,发现 99SJ2 1的发酵产物在相同的设定条件下与标样在tR4 34min的波峰一致。经鉴定 ,99SJ2 1为纠缠青霉 (PenicilliumimplicatumBiourage)。 结论 99SJ2

从南方山荷叶分离出一株产鬼臼毒素类似物的内生真菌

从南方山荷叶 (Diphylleiasinensis)的根、根状茎及叶柄部位共分离出 5 4株内生真菌。通过薄层层析(TLC)对 5 4株内生真菌的液体发酵培养物进行了初步分析 ,再采用高效液相色谱 (HPLC)做进一步检测 ,得到 1株产鬼臼毒素类似物的内生真菌 (SJ2 1 ) ,经鉴定为纠错青霉 (Penicilliumimplicatum)。

中国粗榧枝叶提取物分离及其对反枝苋的除草活性

以对杂草反枝苋种子萌发及根、茎生长的抑制作用为指标,提取、分离、鉴定了中国粗榧C ephalotaxus sinensisL i.枝叶中的除草活性成分。中国粗榧枝叶乙醇提取物的酸水溶液用苯萃取,萃余相碱化并用氯仿萃取得总生物碱。以硅胶及氧化铝柱层析从中国粗榧总生物碱中分离出了3个生物碱类化合物H1、H2和H3,其结构依次鉴定为桥氧三尖杉碱、三尖杉碱及11-羟基三尖杉碱。在1.00mg/mL的供试浓度下,H1对反枝苋种子根、茎生长的抑制率分别为86.1%和82.4%,H3对反枝苋种子根、茎生长的抑制率分别为84.2%和77.1%,H2除草作用较弱。测定结果表明,萃取所得总生物碱为中国粗榧的主要活性成分。

南方山荷叶大、小孢子发生与雌、雄配子体发育

首次报道了南方山荷叶大、小孢子发生和雌、雄配子体形成。主要结果如下:花药4室,花药壁发育为基本型,由7层细胞组成,由外到内依次为表皮、药室内壁、3层中层和2层绒毡层;药室内壁有带状加厚现象,绒毡层细胞多具双核,为腺质型绒毡层;多孢原,发生于表皮下;小孢子母细胞减数分裂为同时型,小孢子四分体多为四面体型,少数为十字交叉形、直线形、左右对称形或"T"形;成熟花粉粒为2-细胞型,偶见3-细胞型;成熟花粉粒呈圆形,具单萌发孔。雌蕊1枚,子房单心皮,纵切面呈瓶状;1室,边缘胎座,具4～5枚发育不同步的横生胚珠。胚珠具双珠被,厚珠心;珠孔由两层珠被共同形成,在一直线上或呈"之"字形。多孢原,位于珠心表皮下。直线形四分体,合点端的1个大孢子发育为功能大孢子,胚囊发育为蓼型。成熟胚囊中,3个反足细胞大而明显,但宿存时间短,较早退化。

中药“鬼臼”药源植物南方山荷叶的研究进展

南方山荷叶为小檗科鬼臼亚科植物山荷叶属Diphylleia南方山荷叶Diphylleia sinensis H.L.Li.的干燥根茎,曾作为传统中药鬼臼药源之一收载于历代本草专著中。本文基于实验室前期研究基础及文献资料,综述了近年有关南方山荷叶的生药学、化学成分、内生真菌、药理作用、含量分析等方面的研究进展,并对南方山荷叶的研究方向作了展望,以期为该药材的进一步研究提供准确可靠的信息,为今后的深入开发研究提供科学依据。

南方山荷叶中甸居群繁殖生物学研究

对分布于云南中甸地区南方山荷叶进行的繁殖生物学研究结果表明 :南方山荷叶有性生殖良好 ,性成熟个体的花在开花前一年 7月末 8月初开始分化并以休眠芽的形式度过冬天及早春 ;花在次年春天开放并在植株露出地面 1 0 d之后进行传粉 ;每个体有花 3～ 2 8朵 ,每花有胚珠 1～ 1 7枚 ,每个体有胚珠 40～ 2 0 2枚 ;在自然条件下南方山荷叶传粉方式为异花授粉 (但自交可育 ) ,其传粉昆虫为叶蜂类和甲虫类 ;天然居群具有较高的结实率 ( 58.3%～1 0 0 .0 % ) ,每个体有果实 3～ 2 6枚 ,每果实有种子 0～ 1 1粒 ,平均结籽率为 60 .41 % ,每个体平均种子产量 47.0 5。南方山荷叶常可通过根状茎进行营养繁殖形成无性系植株。人工繁殖时既可用种子繁殖 ,亦可用切割根状茎来进行营养繁殖。

“江边一碗水”总木脂素的抗肿瘤作用及一般毒性的研究

为评价"江边一碗水"总木脂素对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用和相关毒性,用SPF级雄性小鼠腋下接种肝癌H22瘤株建立了移植性肝癌H22小鼠模型,观察了不同剂量的"江边一碗水"总木脂素给药10 d后对荷瘤小鼠的肿瘤抑制率、体重、免疫器官指数及血尿常规、肝肾功等的影响.结果表明:50,100,200 mg/kg"江边一碗水"总木脂素的抑瘤率分别为44.9%,54.8%和62.1%."江边一碗水"总木脂素对H22小鼠体重、免疫器官指数、造血系统、肝肾功能等生理生化指标无明显影响.故"江边一碗水"总木脂素具有较显著的抗肿瘤作用和较低的毒性,是其抗肿瘤的药效物质基础.

窝儿七中化学成分活性的研究

采用96孔板微量稀释法对从窝儿七中分离纯化得到的化合物的抑菌活性进行研究,测定获得了化合物对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苹果腐烂病菌、芍药炭疽病菌、烟草赤星病菌、小麦赤霉病菌的最小抑菌浓度(MIC).结果表明窝儿七中得到的山奈酚、山奈酚糖苷、鬼臼毒素、鬼臼毒素糖苷、鬼臼毒酮、山荷叶素及山荷叶素糖苷对测试的8种菌均有一定的抑制作用.其中鬼臼毒素与鬼臼毒素糖苷对绿脓杆菌抑制作用最好,MIC为6.25μg/mL.并对分离得到的化合物鬼臼毒素的镇痛作用进行研究,以阿司匹林为阳性对照,生理盐水为阴性对照,通过热板法测定小鼠痛阈值,表明鬼臼毒素有一定的镇痛作用,与阿司匹林相比其镇痛作用时间短,但镇痛作用见效快.

山荷叶中木脂素的薄层扫描测定

在高效硅胶薄层板上,用二氯甲烷-乙醚分离了山荷叶中6种苯基四氢萘丁内酯类木脂素:鬼臼酮、异苦鬼臼酮、苦鬼臼酮、苦鬼臼素、鬼臼毒素、4’-去甲基鬼臼毒素和2种苯基萘丁内酯:去氢鬼臼素、山荷叶素。用2.5％硫酸铈铵的20％硝酸溶液喷雾显色,氨气薰数分钟后,薄层扫描法测定,各木脂素的线性范围在0.48～2.52μg,并用此法测定了不同产地的山荷叶及相近属植物鬼臼和山荷叶中木脂素的含量,方法简便、快速、灵敏度高。

光谱分析法测定窝儿七中微量元素

应用原子发射光谱分析法对窝儿七中的微量元素进行了定性分析。根据定性分析结果,建立了连续测定窝儿七中微量元素镁、锌、锰、钙、铜、铁的原子吸收光谱法,得到了这6种元素的标准工作曲线方程及线性范围。测定结果的相对标准偏差小于0.8%,加标回收率为98.2%～103.0%。

窝儿七化学成分研究

目的研究窝儿七乙酸乙酯萃取部位的化学成分。方法采用硅胶柱色谱法、重结晶、制备薄层色谱法、凝胶色谱法、RP-HPLC制备柱色谱法等手段进行分离纯化,通过理化方法和波谱数据进行分析和结构鉴定。结果从窝儿七乙酸乙酯萃取部位中分离鉴定了10个化合物,分别为β-谷甾醇(1)、鬼臼毒素(2)、山荷叶素(3)、4'-去甲基鬼臼毒素(4)、苦鬼臼毒素(5)、鼠李柠檬素(6)、山柰酚(7)、槲皮素(8)、鼠李素(9)和闭木花酮(10)。结论化合物6、9和10为首次从该属植物中分离得到。

HPLC法测定窝儿七中5种成分的含量

目的建立HPLC测定窝儿七中5种成分含量的方法。方法色谱柱为Cosmosil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃;甲醇-4mL·L^(-1)磷酸溶液梯度洗脱;流速1mL·min^(-1);检测波长300nm。结果 4′-去甲基鬼臼毒素(1)、鬼臼毒素(2)、槲皮素(3)、山柰酚(4)和山荷叶素(5)的线性范围分别为4.5~224.0(r=0.999 2),20.0~1 000.0(r=0.999 4),1.6~78.0(r=0.999 3),4.2~210.0(r=0.999 7)和102.2~256.2(r=0.999 4),平均回收率分别为99.8%(RSD=1.4%),99.8%(RSD=1.7%),99.8%(RSD=1.5%),99.9%(RSD=2.3%)和98.1%(RSD=1.7%)。结论该方法灵敏、准确、重复性好,为窝儿七的质量控制提供参考依据。

三种江边一碗水的比较鉴别(Ⅱ)

目的:鉴定市场中的江边一碗水来源,为拟定质量标准和鉴别真伪提供参考。方法:采用薄层色谱法对市场中6批江边一碗水进行比较鉴别。结果:江边一碗水分别为小檗科植物南方山荷叶Diphylleia sinensis Li.、八角莲Dysosma versipellis(Hance.)M.Cheng及六角莲Dysosma pleiantha(Hance)Woods.的干燥根茎。根据其生药学特征,分别编制了三种江边一碗水的原植物、性状、显微鉴别和薄层色谱鉴别检索表。结论:采用薄层色谱鉴别和编制检索表鉴别三种来源的江边一碗水,方法简便、可靠。