利用直扩PCR试剂盒检测小麦多效抗病基因

为了明确直扩PCR在小麦多效抗病基因检测中的效果,促进廉价、快捷的直扩PCR技术在小麦分子育种中的应用,本研究通过对聚合三个多效抗病基因Sr2、Lr34、Lr67的BC2单株进行直扩PCR检测,筛选到了三个基因聚合的杂合单株,证明了直扩PCR的有效性,并讨论了直扩PCR的优缺点和影响因素,为直扩PCR技术在作物分子育种中的推广应用提供参考。

AmpFlSTR~ Identifiler~ Plus试剂盒快速直接PCR扩增初探

目的探索可应用于法医实践的快速直接PCR扩增方法,以缩短扩增时间,提高STR分型速率。方法联合运用AmpF詛STRR○IdentifilerR○Plus试剂盒与TaKaRa快速PCR检测试剂构建快速直接PCR体系,以FTA血卡为模板,采用优化后的扩增程序在快速PCR仪上进行扩增,分型结果与常规直接扩增方法相比较。结果 AmpF詛STRR○IdentifilerR○Plus试剂盒与TaKaRa的快速PCR检测试剂针对血卡的联合扩增,所得STR分型结果与常规方法一致,扩增用时由常规直接扩增所需的175 min缩短为55 min。结论采用快速直接PCR方法进行扩增,可得到与常规直接扩增一致的DNA分型,扩增时间明显缩短,DNA分型速率大幅提高。

Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用

目的验证Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的法医学应用价值。方法取FTA卡、滤纸上保存的建库血样和各类涉案生物性检材1948份,用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型检测,同时采用SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒进行平行试验。对4个试剂盒相同基因座的分型进行比对,以确认Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的灵敏度和准确性。结果 Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒的检测成功率为97.79%,同一样本在相同基因座与SinofilerTM、Identifiler、PowerPlex16试剂盒的STR分型结果相同。结论利用Expressmarker 22 STR荧光检测试剂盒进行STR分型,信息量大、结果准确可靠,可应用于法庭科学。

FTA卡血样快速直接PCR扩增方法比较初探

目的探索FTA卡血样快速直接PCR扩增方法,比较相关方法的应用价值。方法将DNA TyperTM19试剂盒分别与3种快速试剂(Roche、TaKaRa、Fermentas)组合,以FTA卡血样为模板构建扩增体系,按照经优化的循环参数进行快速直接扩增,并与Typer19试剂盒常规方法相比较,对方法进行评价。结果 Typer19试剂盒分别与3种快速PCR检验试剂进行组合,均可实现快速直接扩增,STR分型结果均与常规方法一致,扩增用时60min,较常规扩增所需的215min缩短了约70%,但Typer19试剂盒与Roche试剂组合基因座间峰高有部分不平衡;与TaKaRa试剂组合扩增个别基因座出现双肩锋;与Fermentas试剂组合扩增峰高明显不平衡,且个别基因座存在双肩峰。结论应用DNA TyperTM19试剂盒与快速试剂组合直接PCR扩增方法,可有效缩短扩增时间,可根据效果在相关实践中选择使用。

细菌核酸提取方法对荧光定量PCR检测差异分析

目的观察和分析常见食源性病原菌及粪便中病原菌DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果的影响。方法以弯曲菌、副溶血弧菌和沙门菌为模型菌株,分别采用水煮法、细胞裂解法、试剂盒法(过滤法和磁珠法)提取病原菌DNA并进行荧光定量PCR检测并对试验结果作差异比较分析;应用细胞裂解法和过滤法分别提取24份随机抽样的粪便标本DNA,针对细菌16SrDNA特异序列进行荧光定量PCR检测,比较2种DNA提取方法对于病原菌检测结果的差异性。结果在不同菌种、不同浓度的条件下,细胞裂解法提取细菌纯培养物DNA的Ct值均低于其他三种方法(P<0.05),水煮法、过滤法、磁珠法的Ct值之间的比较结果呈现多样性。细胞裂解法提取粪便标本的病原DNA为模板进行细菌16S rDNA特异序列的荧光定量PCR检测结果阳性18份,阴性6份,试剂盒过滤法提取24份粪便标本检测结果皆为阳性。结论在对纯培养的3种食源性病原菌进行荧光定量PCR鉴定时,为节省时间和成本可应用细胞裂解法或水煮法提取模板DNA,与2种商业试剂盒(过滤法和磁珠法)相比效果较好;对粪便标本病原菌进行荧光定量PCR检测时,试剂盒提取粪便标本病原DNA的扩增效果优于细胞裂解法。

5种免提取试剂盒检验滤纸血痕结果的比较

目的探讨5种免提取试剂盒对滤纸血痕样本检验的效果。方法陈旧滤纸血痕(存放时间12～14个月)及新鲜滤纸血痕(存放时间小于1个月)各920份,分别随机分为5组。应用AGCU 17+1、Goldeneye 20A、Powerplex16HS、Identifiler Plus、Identifiler Direct 5种免提取试剂盒进行检验,对比各组检验结果。结果陈旧滤纸血痕5种试剂盒的检验成功率为98.91%～100%,各组间无差异(P>0.05);新鲜滤纸血痕,Identifiler Plus和Identifiler Direct试剂盒检验成功率高于AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒(P<0.01);将样本做陈旧化处理后再用成功率较低的3种试剂盒进行检验,成功率分别升至100%、99.46%、99.46%;Identifiler Plus试剂盒扩增循环27次效果优于28次。结论本文5种试剂盒均可用于滤纸血痕的直接扩增检验,但使用AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒需将新鲜血痕做陈旧化处理;Identifiler Plus试剂盒需将循环次数降为27次。