Dispase Ⅱ和胰酶消化法分离大鼠皮肤角朊细胞的对比研究

引言国内外学者均用酶消化法分离表皮和真皮．消化酶有ＤｉｓｐａｓｅⅡ，胰酶和胶原酶，因胶原酶价钱昂贵，故多数单位不使用它．目前尚无学者对比研究ＤｉｓｐａｓｅⅡ和胰酶，观察其对收集的角朊细胞数、活力、细胞增殖及成纤维细胞（Ｆｂ）污染的影响，故我们希望通过...

应用DispaseⅡ与淋巴细胞分层液获取高纯度基底细胞

目的 尝试应用DispaseⅡ分离酶获得含有完整基底细胞的表皮 ,再经淋巴细胞分层液收集活性强、生长快的基底细胞。探讨这样的细胞能否加快生长 ,缩短培养周期。方法 取植皮术后所剩中厚皮 ,经Dis paseⅡ处理后 ,用镊子分开表皮与真皮 ,表皮经胰酶进一步消化后 ,把细胞悬液通过淋巴细胞分层液将收集到的细胞作为实验组。以Tr法分离的表皮细胞作为对照组 ,两组间就细胞数、生长速度 ,克隆形成率与成膜时间进行比较。结果 所得数据经统计学处理显示 :实验组细胞的生长速度、克隆形成率与成膜时间比对照组明显加快。两组间有显著差异 (P <0 0 0 1)。结论 应用DispaseⅡ与淋巴细胞分层液能获得纯度高、活性强、增殖快的基底细胞。可以缩短培养周期 ,具有重要的临床意义。

芦荟超氧化物歧化酶同工酶Ⅱ的分离纯化及部分性质

从芦荟叶中提取的SOD溶液,通过丙酮沉淀、热变性、DEAE 琼脂糖柱层析、SephacrylS 9200凝胶过滤,获得芦荟超氧化物歧化酶同工酶Ⅱ电泳纯产品.该同工酶经凝胶过滤测定全分子量为35kD及SDS PAGA测得亚基分子量为17kD,由2个亚基组成.经等电点聚焦电泳测得该SOD的等电点为pH7 6.

重组L-门冬酰胺酶Ⅱ的提取纯化工艺

采用渗透振扰破壁法、硫酸铵分级沉淀、乙醇分级沉淀、DEAE-纤维素层析等步骤提取和纯化重组L-门冬酰胺酶,并优化了提纯过程的条件,提取总回收率高于50%,产品纯度经高效毛细管电泳检测为单一峰,具有工业生产前景。

不同消化酶对羊驼皮肤黑素细胞分离的影响

本研究旨在探讨羊驼皮肤黑素细胞的分离、培养及鉴定方法,为进一步研究色素沉积提供合适的细胞模型。取1～3岁的青年羊驼皮肤,用胰酶、胰酶∶EDTA、DispaseⅡ酶3种不同的消化酶消化羊驼皮肤,再用胰酶∶EDTA消化,分离得到羊驼黑素细胞,接种于多种促进黑素细胞生长的营养成分DMEM/F12培养基中,通过观察黑素细胞的生长、细胞接种数和细胞贴壁数检验黑素细胞的纯度。结果表明,DispaseⅡ组处理的羊驼皮肤,分离得到的黑素细胞明显多于其它2个组(P<0.01)。综上所述,选用DispaseⅡ酶作为分离羊驼皮肤的消化酶,可获得较纯的黑素细胞。

转录激酶P-TEFb通过相位分离调控基因转录延伸

为了保证生命机体的正常运作,细胞内维持着有序调控并高效运转的生物化学反应,其中一个重要的反应便存在于由RNA聚合酶Ⅱ（PolⅡ）介导的基因转录过程中.PolⅡ复合体最大亚基RPB1的C端有一段高度重复序列（简称CTD）,由转录激酶P-TEFb对PolⅡ的CTD结构域进行高度磷酸化修饰的生化反应是实现PolⅡ高效转录延伸的必要条件.

人类髓核细胞分离培养方法的优化选择

背景:关于人类髓核细胞的分离培养方法不一,所用消化酶组分及消化时间差异较大,如何提高人类髓核细胞获得效率的问题尚未解决。目的:优选人类髓核细胞获取的消化酶组分和消化方法。方法:髓核组织标本取自吉林大学中日联谊医院骨科成人椎间盘3例。无菌条件下取突出至椎管内的急性创伤后椎间盘组织,可见到外周白色的纤维环和中心胶冻样的髓核组织。按不同混合酶组分划分为2组,Ⅰ组成分为0.2%Ⅱ型胶原酶;Ⅱ组成分为先用0.25%胰酶消化30min,再用0.2%Ⅱ型胶原酶。每组再按消化时间分为2,4h,过夜3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位2mL并计数,采用含胎牛血清的DMEM培养液体外培养细胞。观察不同组分酶对分离所得髓核细胞数量、活性及增殖能力的影响,采用锥虫蓝染色计数细胞总数及活细胞比值,MTT法测定髓核细胞生长曲线。结果与结论:采用2种不同酶组分进行消化,发现消化时间2,4h时,Ⅱ组消化细胞较Ⅰ组多,但差异无显著性意义(P>0.05)。孵育过夜时,Ⅰ组和Ⅱ组的存活细胞率较消化2,4h明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。在作用4h时,组织块消失,计数细胞数量最多。提示以Ⅱ型胶原酶为主要成分的Ⅰ组对分离髓核细胞有利,消化时间以4h为宜,该条件具有操作简单,效率较高,成本较低等优点,可以认为0.2%Ⅱ型胶原酶消化髓核组织块4h为获取髓核细胞的最佳条件。

多种酶消化法分离培养气管上皮细胞方法的比较

目的比较4种不同的酶消化法在培养气管上皮细胞中的异同,改进气管上皮细胞的培养技术,为组织工程气管提供理论种子细胞。方法Dispase冷消化法(使用0.1%Dispase4℃消化18h后使用0.25%的胰酶37℃消化10min)、胰酶冷消化法(0.25%胰酶4℃消化18h)、Dispase温消化法(0.25%Dispase37℃消化10min后使用0.25%胰酶37℃消化5min)及胰酶温消化法(0.25%的胰酶37℃消化10min),用4种消化法分离、培养兔气管上皮细胞,测定分离细胞的数量、纯度及成活率。结果4种方法所得细胞数量分别为:(430600.00±628.49、430780.00±580.52、430900.00±200.00、430640.00±931.67),差异无统计学意义(P<0.05)。Dispase冷消化法较其他3种方法得到的气管上皮细胞纯度高,细胞状态好。结论Dispase冷消化法较其他3种方法所得细胞纯度高、细胞成活率高,是一种较好的气管上皮细胞体外分离培养方法。

三步酶消化法高效分离兔原代关节软骨细胞及体外培养观察

目的 观察设计的三步酶消化法分离原代关节软骨细胞的效果,并对体外培养不同代次细胞的生物学活性进行评价。方法 三步酶消化法设计为以培养液配制的1g/L胰蛋白酶及1g/LEDTA混合液、1g/L透明质酸酶和2g/LⅠ型胶原酶顺序消化关节软骨分离细胞,检测细胞收获效率和存活率;体外传代培养观察细胞形态、生长及胞外基质中Ⅰ型和Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚集体等的变化。结果 (1)关节软骨经三步酶消化基质逐步解离和降解,细胞得以完全释放和分离,每克软骨的细胞收获量平均为50 3×106 个细胞,细胞存活率平均为98. 8%。(2)原代和第一代细胞附壁生长呈三角形或多角形,生长融合时呈卵圆形,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝异染反应均呈阳性,原代细胞外基质有高的硫酸糖胺多糖含量为(92±10)μg/cm2;第三代后细胞逐渐变为梭形,Ⅱ型胶原免疫组化为阴性,甲苯胺蓝异染反应明显减弱,第四代细胞外基质的硫酸糖胺多糖含量为(48±12)μg/cm2。结论 (1)三步酶消化法可使关节软骨基质完全消化降解,具有高细胞收获率、高细胞存活率和操作简便等特点。(2)原代和第一代软骨细胞具有良好的生物学活性,而第三代以后的细胞生物学活性低下。

24种脂肪嗜热芽孢杆菌限制性内切酶的分离和鉴定

从脂肪嗜热芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)鉴定了24种II型限制性内切酶,其中2种具有新的识别和酶切序列,其余22种为已知酶的同切酶。大多数脂肪嗜热芽孢杆菌所产生的限制性内切酶热稳定性好,但也有个别的酶在50℃时就很不稳定。

RNA聚合酶Ⅱ启动子近端暂停的动态调控

转录暂停是一种进化上保守的、从细菌到人类普遍存在的关键转录调控机制.在多数后生动物中,转录起始后, RNA聚合酶Ⅱ在发育和应激反应相关基因的启动子近端区域暂停,一旦受到环境或发育信号的刺激, RNA聚合酶Ⅱ从启动子近端向基因体释放,进行有效延伸. RNA聚合酶Ⅱ启动子近端暂停是转录的关键限速步骤之一,并作为转录早期检验点确保转录进程的正确运作.转录暂停和延伸调控异常与肿瘤及多种人类疾病密切相关.本文系统地从RNA聚合酶Ⅱ启动子近端暂停的建立、维持和释放等方面综述了对于这一重要转录限速步骤的调控,着重讨论了相分离通过浓缩和传递转录相关因子在调控Pol Ⅱ暂停和延伸过程中的作用,并展望了针对转录暂停和释放这一过程设计靶向性治疗策略的潜力.