中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂sivelestat对HFpEF小鼠心脏纤维化的作用

目的:观察中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)抑制剂sivelestat对射血分数保留型心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)小鼠心脏组织病理结构变化的影响。方法:8周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=5)、模型组(n=6)和治疗组(n=18)。采用高脂饮食加N^(G)-硝基-L-精氨酸甲酯(N^(G)nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)联合造模的方法建立HFpEF小鼠模型。治疗组分为3组(n=6),按照12.5、25和50 mg·kg^(-1)·d^(-1)的剂量腹腔注射sivelestat,对照组和模型组注射等体积的生理盐水,连续给药12周。使用小动物超声检测小鼠心功能的变化;计算小鼠肺脏重量(lung weight,LW)与胫骨长度(tibial length,TL)的比值(LW/TL)以评估肺水肿;进行运动疲劳测试评估运动不耐受程度;通过HE、小麦胚芽凝集素、二氢乙啶及天狼星红染色依次评估心脏整体病理变化、心肌细胞横截面积、氧化应激水平及心脏纤维化面积;通过Western blot检测纤维化相关蛋白的表达。结果:与模型组比较,不同浓度的sivelestat可显著改善HFpEF小鼠心脏舒张功能,表现为E波/A波比值(E/A)增加和E波/e'波比值(E/e')降低(P<0.05);LW/TL降低,肺充血及运动不耐受减轻(P<0.05);心脏重量(heart weight,HW)与TL的比值(HW/TL)降低,心脏整体和心肌细胞横截面积减小,心脏肥大显著减轻(P<0.05);此外,心肌纤维化及活性氧水平也显著降低(P<0.05)。结论:抑制NE可抑制HFpEF引起的小鼠心脏舒张功能障碍和心脏纤维化,从而对心脏具有保护效应。

弹性蛋白酶调节中性粒细胞炎性募集的功能研究

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测NE的抑制对中性粒细胞体内炎性募集、体外趋化、牢固黏附、细胞极化与伸展能力的影响;利用流式细胞术及鲁米诺化学发光系统检测NE的抑制对中性粒细胞吞噬及活性氧(ROS)释放能力的影响。结果:西维来司钠盐预处理显著减弱了中性粒细胞体内炎性募集(P<0.001);减弱了中性粒细胞在体外趋化过程中对催化剂方向性的感知(P<0.05),减慢了趋化速率(P<0.05),降低了趋化距离(P<0.05);减少了中性粒细胞在炎性内皮细胞表面形成牢固黏附的能力(P<0.000 1),抑制了中性粒细胞对细菌的吞噬能力(P<0.01);但对中性粒细胞的伸展、极化及ROS的释放均无显著影响。结论:NE的抑制显著损害了中性粒细胞在体内外的炎性募集级联反应及吞噬作用,但对中性粒细胞的伸展、极化、ROS释放等功能无显著影响。

纤维蛋白溶解酶和Dispase蛋白酶诱导兔眼玻璃体后脱离的实验研究

目的研究纤维蛋白溶解酶和dispase蛋白酶诱导玻璃体后脱离(PVD)的作用。方法24只健康成年的青紫兰兔随机分为4组,右眼均为实验眼,左眼为对照眼。A组实验眼玻璃体腔内注射纤溶酶1U,B组纤溶酶2 U,C组dispase蛋白酶0.0125U和D组dispase蛋白酶0.025U,对照眼均为眼用平衡盐BSS液0.1 ml。注药前后行眼底镜、裂隙灯和VOLK+90D前置镜以及B超和视网膜电图(ERG)检查,最后取眼球进行光镜、扫描电镜和透射电镜观察。结果电镜结果A组2只实验眼后极部发生不完全性PVD,发生率为33.3%;B、C两组实验眼中各有4只眼发生完全性PVD。发生率为66.7%;D组实验眼有5只眼发生完全性PVD,发生率为83.3%。纤溶酶各组实验眼注药后ERG振幅与术前及对照眼比较无显著性差异(P>0.05),光镜和透射电镜观察视网膜组织结构正常,均未发现明显异常改变。而Dispase蛋白酶各组透射电镜观察视网膜细胞和细胞器出现水肿和变性。ERG检测Dispase两组实验眼术后b波振幅较术前明显降低(P<0.01)。结论玻璃体腔注射纤溶酶2U较注射1U更能有效的诱导PVD且对视网膜无明显的毒性作用。而Dispase蛋白酶虽然可迅速有效的诱导PVD,但对视网膜有明显的毒性作用。

Dispase蛋白酶诱导兔眼玻璃体后脱离的实验研究

目的:研究dispase蛋白酶诱导玻璃体后脱离的效果和安全性。方法:24只健康成年的青紫兰兔随机分为A,B,C,D4组,每组6只兔右眼均为实验眼,左眼为对照眼。A～D组实验眼玻璃体腔内分别注射dispase蛋白酶25,50,125和250U/L,对照眼均为眼用平衡盐BSS液0.0001L。注药前后行检眼镜、裂隙灯和VOLK+90D前置镜以及B超和视网膜电图(electroretinogram,ERG)检查,最后取眼球扫描电镜和透射电镜观察。结果:电镜结果A组实验眼无PVD发生;B,C2组实验眼中各有4眼发生完全性PVD,发生率为67%;D组实验眼有5眼发生完全性PVD,发生率为83%;透射电镜观察对照眼及A,B2组实验眼视网膜组织结构正常。C,D组视网膜细胞和细胞器出现水肿和变性。ERG检测A,B2组术后b波振幅与术前比较无明显降低(P>0.05);而C,D2组实验眼术后b波振幅较术前明显降低(P<0.01)。结论:浓度50U/L的dispase蛋白酶可有效地诱导PVD且对视网膜无明显的毒性作用。更高浓度的dispase蛋白酶虽然可迅速有效的诱导完全性PVD,但对视网膜有毒性作用。

中性粒细胞弹性蛋白酶在支气管扩张中的生物学功能及中药干预研究进展

中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)是中性粒细胞原代颗粒中的一种主要蛋白酶,参与支气管扩张复杂病理的发生、发展,具有调节炎症反应、控制感染、增加黏液分泌、降解细胞外基质和细胞因子及损害免疫系统等多种生物学功能,与疾病预后有关,可作为临床治疗结果的预测因子和可能的治疗靶点。尚未有大量高级别临床研究证明内源性及外源性NE抑制剂对支气管扩张的疗效。中医药发挥其多靶点、多途径、精准施治等作用干预NE介导的支气管扩张,在改善临床症状、减少急性加重次数、减轻气道炎症反应等方面具有优势。该文综述NE在支气管扩张中的主要生物学功能,以及中医药干预NE介导的气道炎症的进展,期望为临床和科研提供有价值的参考依据。

中性粒细胞弹性蛋白酶在急性呼吸窘迫综合征中的研究现状

中性粒细胞弹性蛋白酶是中性粒细胞嗜天青颗粒中的主要蛋白酶,在抵御感染中发挥重要作用。然而,大量释放的中性粒细胞弹性蛋白酶可能导致过度炎症反应,加剧肺组织损伤,诱发急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的发展。西维来司他钠作为一种特异性中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂,在缓解中性粒细胞弹性蛋白酶诱发的病理过程中具有明显的潜力,并在临床急性呼吸窘迫综合征的治疗中受到广泛的关注。本文将深入探讨中性粒细胞弹性蛋白酶的生物学特性及其在急性呼吸窘迫综合征病理生理中的作用机制,以及西维来司他钠在急性呼吸窘迫综合征临床管理中的应用,为深入理解该药物在急性呼吸窘迫综合征治疗中的作用机制提供重要线索。

中性粒细胞相关蛋白酶减轻急性心肌梗死早期损伤的研究

目的:明确中性粒细胞弹性蛋白酶及蛋白酶3(neutrophil elastase/proteinase 3, NE/PR3)在心肌梗死早期损伤阶段中的作用。方法:ELISA试剂盒检测急性心肌梗死患者及健康对照组外周血中NE/PR3含量;基于冠状动脉左前降支结扎术构建心肌梗死模型,通过WB及RT-QPCR检测心肌梗死后0、1、3、7d时心脏组织中NE/PR3的表达变化;小型动物心脏超声仪进行心功能检测、免疫组化染色以及Western blot检测纤维化相关蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)变化明确敲除NE/PR3的影响。结果:心肌梗死患者外周血中NE/PR3含量以及中性粒细胞的占比均明显升高;在心肌梗死小鼠的心脏组织中表达量明显升高,且主要在梗死后1d时最为明显;NE/PR3基因缺失小鼠心肌梗死早期的纤维化程度增加、提高了心肌梗死后小鼠存活率、减少早期心脏破裂率并改善损伤早期心功能。结论:敲除中性粒细胞弹性蛋白酶NE/PR3可通过促进早期成纤维细胞活化转换为肌成纤维细胞促进心脏修复从而减少了早期心脏破裂等危险事件的发生及心脏损伤。

中性蛋白酶高温酶解条件下猪粪资源化利用中养分的变化规律

以酶工程及酶动力学为技术依托及科学依据,将猪粪加玉米秸秆组合作为底物,添加2%中性蛋白酶,在生化反应釜中80℃酶解3 h,底物含水量降低至56.01%,同比下降2.34%;大分子有机质含量降低至63.79%,酶解后,A、B处理的底物有机质含量分别降低了14.19%、15.06%;植物可利用大量元素提高至6.87%,符合NY 525—2012有机肥标准;速效磷、速效钾、全盐、总腐殖酸呈下降趋势;蛔虫卵死亡率达到92%,种子发芽指数达到54%,达到有机肥腐熟标准。

枯草芽孢杆菌对环境耐受性和产中性蛋白酶能力研究

为了探究枯草芽孢杆菌对环境耐受性及产中性蛋白酶的能力,试验模拟饲料加工温度、胃肠道酸性环境、胆盐对枯草芽孢杆菌进行环境耐受性评定,在单因素(pH值、时间、温度、接种量、碳源、碳源添加量和金属离子)试验基础上采用正交试验以中性蛋白酶活力为评定指标,对枯草芽孢杆菌培养条件进行优化。结果表明:枯草芽孢杆菌对温度、胃肠道酸性环境和胆盐均具有一定耐受性;单因素试验中最佳pH值为5,培养时间为24 h,培养温度为30℃,接种量为2%,碳源为淀粉,淀粉添加量为3%;金属离子Mg^(2+)、Fe^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)和Zn^(2+)对产酶均具有抑制作用,不在培养基中添加金属离子。正交试验优化后枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶活力最佳培养条件为pH值6,淀粉添加量3%,培养温度35℃,培养时间24 h,枯草芽孢杆菌种子菌液接种量3%,在最优条件下,酶活力可达40.05 U/mL。说明枯草芽孢杆菌可耐受动物胃肠道环境且培养条件优化后中性蛋白酶酶活力显著提高。

蛋白酶3和髓过氧化物酶-抗中性粒细胞胞浆抗体检测面临的问题及可能的解决方法

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)自1982年被发现以来,蛋白酶3(PR3)和髓过氧化物酶(MPO)已被确定是ANCA最重要的两种靶抗原,其检测方法从最初的间接免疫荧光法发展到目前的酶联免疫吸附试验和化学发光法。PR3-ANCA主要识别4个由PR3糖基化修饰的不连续构象表位。而MPO-ANCA主要识别位于MPO重链的3个构象表位和多个基于二级结构的线性表位。目前PR3-和MPO-ANCA的检测方法存在靶抗原自身抗原性改变和抗原表位遮蔽等问题,导致检测灵敏度和准确性的缺陷。采用基因工程方法制备在PR3抗原C末端和MPO抗原羧基端生物素定点标记的抗原,有助改善上述问题。

中性粒细胞弹性蛋白酶在支气管扩张症中的研究进展

支气管扩张症(BE)主要是中性粒细胞驱动的慢性气道炎症,中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)是中性粒细胞储存并释放水解功能最为强大的蛋白酶,通过损伤气道黏膜屏障、抑制气道免疫反应以及调节炎症等多种途径参与BE的发病机制。NE是目前BE最具潜力的生物标志物,针对NE靶向疗法正在开发过程中。本文就NE的特性、参与BE的作用机制、作为潜在生物标志物及治疗靶点的应用前景方面进行综述,期望为BE诊断、评估及个性化治疗提供新的视野。

改良根治术与保乳手术治疗早期乳腺癌的疗效及对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和基质金属蛋白酶-9影响对比

目的对比改良根治术与保乳手术治疗早期乳腺癌(EBC)的疗效及对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法以2014年1月至2017年4月河北省秦皇岛市第一医院收治的145例EBC患者作为研究对象,按照不同的治疗方式分为保乳手术组70例与改良根治术组75例。两组术后均随访1、5年。对比两组患者的手术指标及手术前后血清NGAL、MMP-9水平变化情况,采用创伤后应激障碍问卷(PCL-C)评估创伤后应激障碍(PTSD),比较两组患者乳房美容效果满意度及术后1、5年的局部复发率、生存率、远处转移率。结果保乳手术组患者术中出血量少于改良根治术组,手术时间、切口长度、住院时间短于改良根治术组(P<0.05);两组的清除淋巴数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术前两组患者的血清NGAL、MMP-9水平比较差异无统计学意义,术后3、5 d时,保乳手术组的NGAL、MMP-9水平均低于术前及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。出院时,保乳手术组的PTSD阳性率、PCL-C总评分均低于改良根治术组,乳房美容效果满意度高于改良根治术组(P<0.05)。两组患者术后1、5年的局部复发率、总生存率、远处转移率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与改良根治术相比,保乳手术改善早期乳腺癌患者的效果明显,可改善患者的手术情况,降低创伤后应激反应,提高患者的乳房美容效果满意度,且对近远期患者的预后并无不利影响,同时并未增加外周血NGAL、MMP-9的表达,安全性较高。

胃蛋白酶原联合中性粒细胞与淋巴细胞比值对慢性萎缩性胃炎患者并发胃癌的预测价值

目的 探究胃蛋白酶原(PG)联合中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对慢性萎缩性胃炎(CAG)患者并发胃癌的预测价值。方法 回顾性选取延安大学医学院在2015年3月至2019年3月间收治的460例CAG患者纳入研究,检测患者PG、NLR水平。对患者进行至少5年的随访,观察患者胃癌情况,并将其分为发生组和未发生组。单因素及多因素分析CAG患者发生胃癌的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线下面积分析PG、NLR联合检测对患者发生胃癌的预测价值。结果 单因素分析显示,发生组年龄、幽门螺旋杆菌(Hp)感染阳性占比、伴不典型增生占比、伴肠上皮化生占比、NLR水平高于未发生组,PG水平低于未发生组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析显示,伴不典型增生(OR=3.741,95%CI:1.539~9.091)、伴肠上皮化生(OR=4.211,95%CI:1.911~~9.277)、NLR水平(OR=3.823,95%CI:2.186~6.683)是CAG患者发生胃癌的独立危险因素,PG水平(OR=0.212,95%CI:0.102~0.441)是独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线显示,PG、NLR及二者联合预测CAG患者发生胃癌的灵敏度分别为67.70%、77.40%、90.30%,特异度分别为79.30%、72.70%、67.80%,AUC分别为0.791、0.814、0.902(P<0.05)。结论 NLR水平是CAG患者发生胃癌的独立危险因素,PG水平是独立保护因素,PG和NLR水平联合测定可较好的预测患者胃癌发生情况。

中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂在脓毒症相关ARDS中作用的研究进展

脓毒症相关急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是脓毒症严重并发症之一,其患病率和死亡率居高不下。中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)在其病理生理过程中发挥了重要作用,参与了肺泡-毛细血管屏障破坏、氧化应激和炎症反应、自噬和细胞死亡等多个过程。西维来司他钠作为唯一上市的特异性NE抑制剂(NEI),在减轻炎症反应和保护肺组织中显示出巨大的潜力。该文主要对NE及NEI在脓毒症相关ARDS中的作用机制进行概述,并简要探讨脓毒症相关ARDS和西维来司他钠的潜在治疗方案,以期为临床治疗提供参考。

血清中性粒细胞弹性蛋白酶与育龄期女性复发性单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的关系

目的探讨血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)与育龄期女性复发性单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的关系。方法纳入2021年1月至2022年4月天津市第一中心医院就诊的100例单纯疱疹病毒感染患者,所有患者均在入院后接受统一的抗病毒治疗方案,测定所有患者治疗前及治疗1、2、3、4个月时血清NE水平。将55例治疗有效患者纳入有效组,45例治疗无效患者纳入无效组。比较分析两组患者的基线资料,通过单因素分析及多因素logistic回归模型,分析血清NE与单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的关系。结果无效组患者的性生活频次、血清NE、C反应蛋白(CRP)高于有效组,白细胞介素-2(IL-2)水平低于有效组,差异有统计学意义(P<0.05)。无效组患者治疗前及治疗1、2、3、4个月血清NE水平均高于有效组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,性生活频次、CRP、治疗前NE、治疗1个月NE、治疗2个月NE、治疗3个月NE及治疗4个月NE是影响单纯疱疹病毒感染抗病毒治疗效果的相关因素(P<0.05)。经限制性立方样条模型(RCS)分析,单纯疱疹病毒感染患者治疗前血清NE水平与抗病毒治疗无效的关联呈非线性曲线型剂量反应关系,当治疗前血清NE水平>113.865ng/ml时,患者抗病毒治疗无效风险随指标水平升高而逐渐增加。结论单纯疱疹病毒感染患者血清NE水平与抗病毒治疗效果有关,治疗前血清NE水平高可能提示患者抗病毒治疗无效的风险较高。

中性蛋白酶液体制剂的研究

为了提高中性蛋白酶的热稳定性并增强其在工业应用中的性能和经济性,本研究通过单因素和响应面优化实验,筛选出了中性蛋白酶最佳保护剂为15‰Na 2 SO 4、4%蛋白胨和90 U/mL蛋白酶,在40℃下储存139 h相对酶活达到92.08%。通过升温加速实验建立了复合保护剂中性蛋白酶(JW-3-CP)的温度加速模型,验证了模型预测值在25℃时与实验测量值吻合良好,显示出良好的准确性。JW-3-CP储存90 d相对酶活为(93.37±0.56)%、浊度为0.90±0.12,与未添加保护剂的中性蛋白酶相比相对酶活提高4.57倍。

中性蛋白酶及碱性蛋白酶制备玉米粗肽的醒酒活性比较

本文旨在使玉米蛋白增值,为工业化生产玉米醒酒肽提供依据。采用气相色谱、氨基酸自动分析仪等仪器,研究了玉米蛋白水解物——粗肽的醒酒活性。结果表明:中性蛋白酶的低水解度粗肽(2h、酶底比0．5％、料液比1:25)能使小鼠血醇浓度降低54．06％,但该粗肽的蛋白回收率太低。碱性蛋白酶的中水解度粗肽(4h、酶底比0．5％、料液比1:20)的醒酒活性高,并存在剂量效应关系,其剂量为800 mg／kg．bw时,小鼠血醇浓度降低了62．80％,且该粗肽的蛋白回收率高,具有开发价值。

枯草芽孢杆菌高产中性蛋白酶发酵条件的优化

通过单因素试验和正交试验对枯草芽孢杆菌10075菌株发酵产中性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化,达到提高菌株中性蛋白酶产量的目的。结果表明,发酵培养基的最佳组分:添加麦芽糖8.0%、蛋白胨4.0%、MgSO4 0.08%;最适发酵条件为发酵温度37℃、初始pH 7.0、发酵时间42 h,酶活力由最初的98.36 U/mL提高到353.45 U/mL。

中性蛋白酶对抑制韧性饼干自然断裂的影响

在韧性饼干的生产过程中添加中性蛋白酶,在相同的配方和工艺、不同储藏温度条件下比较中性蛋白酶的添加量对饼干自然破碎率的影响,确定了适宜的中性蛋白酶添加量范围。

中性蛋白酶发酵工艺优化研究

采用正交试验，对枯草芽孢杆菌ＨＤ４０１中性蛋白酶深层发酵工艺进行了优化，结果表明：较优发酵培养基为玉米粉５％、豆饼粉３％、麸皮４％、Ｎａ＿２ＨＰＯ＿４０．４％、ＫＨ＿２ＰＯ＿４０．０３％；在发酵中期流加蚕蛹水解液５％、植酸钙０．２％、吐温－８００．１％，对发酵后期有较大的调控作用。采用优化工艺，在２Ｌ发酵罐中进行验证试验，酶活达１３２００ｕ／ｍｌ，比原工艺提高了１６４％。