Dkk1在胃癌诊断、治疗及预后中的应用

胃癌(gastric cancer,GC)是一种高侵袭性和高致死性的恶性肿瘤,是第五大常见癌症和第四大癌症死亡的主要原因^([1])。根治性手术是可手术GC患者的主要治疗方法,早期GC患者若及时治疗5年生存率可达90%以上[2-3]。但由于许多GC患者早期症状不典型,在诊治过程中常与胃炎或胃溃疡相混淆,导致大多数患者在首次诊断时通常已处于中晚期阶段,失去了最佳治疗时机,直接影响GC患者的预后。因此,早发现、早诊断、早治疗是降低GC高发病率和高死亡率的重要手段。

基于DKK3调控探讨藏红花素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:探究藏红花素通过调控dickkopf WNT信号通路抑制因子3 (Dickkopf3,DKK3)对Aβ25-35诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法:Aβ25-35诱导小鼠海马神经细胞系HT22细胞模拟细胞损伤,CCK8增殖实验检测藏红花素最佳干预浓度。qPCR检测DKK3沉默质粒(DKK3 siRNA)以及DKK3过表达质粒(DKK3-OE)的DKK3 mRNA表达,随后进行细胞转染。细胞分为正常组、Aβ25-35组、Aβ25-35+藏红花素组(1.0μmol/L)、Aβ25-35+DKK3 siRNA组、Aβ25-35+siRNA对照组、DKK3-OE组、空白质粒对照组、DKK3-OE+藏红花素组(1.0μmol/L)组。采用流式细胞数检测细胞凋亡,Tubulin β染色观察细胞神经突触形态,Western blot检测细胞Aβ、DKK3、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:0.5~2.0μmol/L藏红花素可显著上调HT22细胞活力(P<0.05)。与正常组相比,Aβ25-35组和DKK3-OE组细胞凋亡显著增加,突触长度、分支数显著减少,Aβ、DKK3、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,β-catenin、Bcl-2蛋白蛋白表达显著降低(P<0.01)。与DKK3-OE组相比,藏红花素干预则能逆转以上结果。与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+藏红花素组和Aβ25-35+DKK3 siRNA组细胞的凋亡显著降低,突触长度、分支数显著增加,Aβ、DKK3、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达显著降低,β-catenin、Bcl-2蛋白蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:藏红花素对Aβ25-35诱导神经细胞损伤具有保护作用,其作用与通过抑制DKK3调控GSK-3β/β-catenin信号通路表达有关。

阻断DKK1通过促进CD4^(+)T细胞Th1型极化改善抗肿瘤免疫应答

目的:探讨恶性肿瘤中Dickkopf-1(DKK1)表达对CD4^(+)T细胞极化的影响及其作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。方法:利用生物信息学方法分析DKK1在多种类型肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平,分析DKK1表达与肿瘤患者预后及肿瘤微环境免疫浸润间的相关性。利用流式细胞术检测DKK1蛋白对CD4^(+)T细胞表型变化的影响。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠皮下移植瘤模型,观察阻断DKK1对小鼠移植瘤生长和移植瘤组织中免疫细胞浸润与表型的影响。结果:DKK1 mRNA表达水平在多种肿瘤组织中显著高于癌旁组织,DKK1高表达与多数肿瘤患者的不良预后相关且在多数肿瘤中DKK1对CD4^(+)T细胞抗肿瘤免疫应答功能有重要负性调节作用(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,DKK1蛋白刺激可显著降低CD4^(+)T细胞中T-bet、IFN-γ及CD107a表达水平(均P<0.01)。在小鼠皮下黑色素瘤模型中发现,阻断DKK1可以显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.01),有效改善抗肿瘤免疫应答,表现为Th1细胞(T-bet+CD4^(+))占比显著升高(P<0.001),效应性CD8^(+)T细胞(CD44+CD62L-)占比显著升高(P<0.01),Th2细胞(GATA3^(+)CD4^(+))与Treg细胞占比显著下降(均P<0.01)。结论:阻断DKK1可有效促进CD4^(+)T细胞向Th1型极化,DKK1具有作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。

LncRNA TERC调控H3K27me3、DKK1在地塞米松干预间充质干细胞成骨细胞分化中的相关研究

目的 研究地塞米松干预骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化后,过表达LncRNA TERC对组蛋白H3K27三甲基化(H3K27me3)及DKK1表达的影响,从而进一步验证其对成骨分化的作用。方法 (1)地塞米松干预BMSCs成骨分化,实验分为对照组(单纯成骨诱导组)及干预组(地塞米松干预成骨组),第14天使用茜素红染色检测的成骨分化能力,RT-PCR检测第3、7、14、21 d各组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因的表达。(2)地塞米松干预BMSCs成骨分化,构建TERC过表达载体,分别设置:空白对照组(地塞米松干预成骨组)、空白载体组、TERC过表达组。RT-PCR检测第3、7、14、21 d各组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因的表达,Western blot实验检测各组细胞中H3K27me3、DKK1的蛋白水平。结果 (1)地塞米松干预BMSCs成骨分化后,茜素红染色显示其成骨能力下降(P均<0.05),且RT-PCR显示,随着地塞米松干预时间的延长,BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因均下调(P均<0.05)。(2)TERC过表达转染实验中,TERC过表达组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因与其他两组比较均上调(P均<0.05),其他两组以上成骨基因表达水平比较,差异无统计学意义(P均>0.05);TERC过表达组细胞中H3K27me3的蛋白表达水平较其他两组显著上升(P均<0.05),DKK1的蛋白水平较其他两组显著下降(P均<0.05)。其他两组中以上基因蛋白表达水平相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 过表达LncRNA TERC能够显著调高地塞米松干预BMSCs向成骨细胞分化能力,并与H3K27me3及DKK1在地塞米松干预BMSCs向成骨细胞分化中存在有相关性。

血清DKK1在肝细胞癌诊疗中的应用研究进展

肝细胞癌(HCC)是临床常见的恶性肿瘤,正确的早期诊断、科学的疗效判断在HCC癌的诊治中具有重要作用。近年来越来越多的研究证实,分泌性蛋白DKK1与HCC发生发展密切相关。血清DKK1作为一种简单易行的检测方法,在HCC诊疗中的应用价值日趋凸显。本文近年来国内外关于使用血清DKK1进行HCC诊断和鉴别诊断、病情评估和判断、治疗疗效分析等三方面的研究文献进行系统整理,供同行参考借鉴。

云克对类风湿关节炎患者骨代谢及Wnt/DKK1相关因子表达研究

目的:观察云克对类风湿关节炎患者炎症介导骨代谢的治疗效果及安全性,以及对Wnt/DKK1信号通路相关蛋白的影响。方法:选取2020年11月至2021年12月就诊于贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科的60例类风湿关节炎患者为研究对象,按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组30例。对照组给予甲氨蝶呤片联合来氟米特片口服治疗,治疗组在对照组基础上加锝(99Tc)亚甲基二膦酸盐注射液(商品名:云克)治疗。治疗前及治疗后第3个月、第6个月、第12个月检测骨密度,以观察骨密度变化百分比;治疗前、治疗后第12周检测Wnt/β-catenin相关因子[β-连环蛋白(β-catenin)、Dickkopf-1相关蛋白(DKK1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(lLRP6)],细胞因子[白细胞介素(IL)-17、IL-6],骨代谢标志物[β-CTX、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tTRAP5b)]水平。结果:①治疗组ESR、DAS28-ESR评分、CRP、HAQ、VAS评分,在第4周至第12周均下降,且与对照组相比下降更为明显(P<0.05)。②治疗12周后,治疗组骨破坏标志物、炎症因子、Wnt信号通路抑制因子DKK1血清水平均较对照组低(P<0.05),治疗组Wnt通路活化因子β-catenin、LRP6较对照组血清含量高(P<0.05)。③治疗后,2组脊柱及髋部骨密度变化百分比比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组髋部及脊柱骨密度变化百分比均在第12个月与第3个月比较增长明显(P<0.05)。结论:云克可以改善类风湿关节炎患者临床症状,降低疾病活动度,调节骨代谢,可能通过Wnt/DKK1信号通路介导类风湿关节炎患者骨破坏进展,且安全性较好。

藏红花素介导DKK3调控GSK-3β/β-catenin通路对阿尔兹海默症大鼠的认知改善作用

目的:探讨藏红花素(crocin)对阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)小鼠认知能力的改善作用及机制。方法:SD大鼠海马区注射Aβ25-35建立AD模型,随机分为AD组、AD+L、M、H-crocin组(10、20、40 mg/kg)和AD+donepezil组(1 mg/kg盐酸多奈哌齐),腹腔注射治疗4周,另设置Sham组。采用避暗实验、水迷宫实验评估大鼠学习、记忆能力,ELISA测定大鼠血清Aβ含量,HE染色和Tunel染色确定大鼠海马区内病理改变及神经元细胞凋亡,免疫组化测定大鼠海马区Brdu、Dcx、NeuN表达,Western blot测定大鼠脑组织Aβ、DKK3、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与Sham组相比,AD组大鼠的学习、记忆能力下降,血清Aβ含量升高,且海马区的病理改变严重,神经元细胞凋亡增加,Brdu、Dcx、NeuN含量降低,Aβ、DKK3、pGSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达升高,β-catenin、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01)。与AD组相比,给予不同剂量crocin和donepezil治疗后,AD大鼠学习、记忆能力提高,血清Aβ含量降低,海马区的病理改变减轻,神经元细胞凋亡减少,Brdu、Dcx、NeuN含量升高,Aβ、DKK3、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达升高,β-catenin、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),crocin的剂量依赖效应显著。结论:crocin通过减少神经元细胞凋亡,介导DKK3调控GSK-3β/β-catenin通路来改善AD大鼠认知损伤。

Dickkopf-1基因在头颈部鳞状细胞癌中的表达及对细胞系表型变化的影响

目的通过数据库分析Dickkopf-1(DKK1)基因在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达和临床意义,DKK1对头颈部鳞癌细胞表型的影响。方法使用GEPIA分析DKK1在HNSCC中的表达及其与患者生存率间的关系,并通过qRT-PCR对DKK1在HNSCC细胞系中的表达进行验证。使用LinkedOmics数据库分析DKK1表达与HNSCC临床病理特征关系。使用siRNA转染下调HNSCC细胞系CAL-27细胞中DKK1表达并通过流式细胞术、细胞划痕实验和细胞侵袭实验评估DKK1对头颈部鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果DKK1在HNSCC中显著高表达;qRT-PCR体外验证DKK1在HNSCC细胞系中表达均升高,其中在SCC-4、SCC-9、SCC-25、CAL-27中表达显著升高。DKK1表达水平与HNSCC患者T分期和病理分期呈显著正相关,与HNSCC患者总生存率呈显著负相关。下调DKK1表达后,CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。结论DKK1与HNSCC的发生发展及预后密切相关,可能成为HNSCC新的生物学标志物和潜在治疗靶点。

基于骨耦联平衡探讨中药复方对CIA大鼠骨保护的作用机制

目的 探讨清热活血方(QRHXF)延缓胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠骨破坏的可能作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,依那西普组,QRHXF组,QRHXF+依那西普组,造模2周后,连续灌胃4周,通过足趾容积测量仪测定足趾容积,micro-CT检测大鼠骨关节破坏情况,ELISA检测血清白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平,荧光定量PCR和Western blot分别检测骨组织Dickkopf相关蛋白1(Dickkopf1,DKK1)、Wnt通路相关蛋白10b(Wnt10b)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,Runx2)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)mRNA与蛋白表达量。结果 与正常组比较,模型组大鼠足趾容积,骨表面积/骨体积,血清IL-1β、TNF-α含量,骨组织DKK1、CTSK mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),骨小梁数量、厚度、骨体积分数,Wnt10b、Runx2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,依那西普组、QRHXF组、QRHXF+依那西普组大鼠足趾容积、骨表面积/骨体积、血清IL-1β、TNF-α水平、DKK1、CTSK mRNA和蛋白表达均降低;骨小梁数量、厚度、骨体积分数、Wnt10b、Runx2 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05或P<0.01)。结论 QRHXF可以降低CIA大鼠炎症水平,延缓骨破坏进展,其机制可能与调控DKK/Wnt通路相关因子,促进成骨细胞分化,维持骨耦联平衡有关。

TACE联合射频消融后复发性肝癌患者血清E-cadherin、VEGF、DKK1变化及对生存预后的影响

目的:分析复发性肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)联合射频消融后血清上皮钙黏素(E-cadherin)、血管内皮生长因子(VEGF)、分泌型蛋白Dickkopf-1(DKK1)变化及对生存预后的预测价值。方法:选取2016年1月至2022年3月苏州市立医院收治的190例肝癌术后复发患者,均给予TACE联合射频消融治疗,根据生存预后分为死亡组(30例)、生存组(160例)。比较两组基线资料、治疗前、TACE后、射频后血清E-cadherin、VEGF、DKK1变化;采用Cox分析生存预后的相关影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析TACE后、射频后血清E-cadherin、VEGF、DKK1预测生存预后的价值;采用卡普兰—迈耶曲线(KM)生存曲线分析不同血清E-cadherin、VEGF、DKK1表达水平患者生存率。结果:死亡组BCLC分期高于生存组(P<0.05);死亡组TACE后、射频后血清E-cadherin低于生存组,VEGF、DKK1高于生存组(P<0.05);Cox分析显示,射频后血清Ecadherin是复发性肝癌患者生存预后的相关保护因素,BCLC分期、射频后血清VEGF和DKK1是复发性肝癌患者生存预后的相关危险因素(P<0.05);射频后血清E-cadherin、VEGF、DKK1预测生存预后的ROC下面积(AUC)大于TACE后,且血清Ecadherin+VEGF+DKK1的AUC大于单独的血清E-cadherin、VEGF、DKK1(P<0.05);血清E-cadherin高水平患者生存率高于低水平患者,VEGF、DKK1高水平患者生存率低于低水平患者(P<0.05)。结论:血清E-cadherin、VEGF、DKK1变化与复发性肝癌TACE联合射频消融后生存预后有关,联合检测射频后三者表达水平为临床预测生存预后提供参考依据。

DKK1与尿蛋白在子痫前期中的研究进展

子痫前期(Preeclampsia, PE)作为妊娠期特有并发症,大量潜在的生物标记物已被发现,协助于诊断并治疗PE病情。WNT信号通路是调控生物体内细胞生长、发育及分化的关键信号传导通路之一,在PE发病中起到关键作用。DKK1作为WNT信号通路的拮抗剂,其蛋白表达水平与子痫前期的发病率密切相关,并且现已证实DKK1参与肾脏的病变,成为子痫前期蛋白尿症状的影响因素之一。通过探究DKK1在母体血清中的表达情况,联合尿蛋白水平,探讨二者在PE发病中起到的作用。

甲状腺乳头状癌中Dickkopf-1蛋白的表达及与上皮-间质转化的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)和甲状腺乳头状增生(papillary thyroid hyperplasia,PTH)中Dickkopf-1(DKK1)的表达及与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的关系。方法采用生物信息学技术分析TCGA数据库中DKK1在PTC中的诊断价值;采用免疫组化EnVision法检测80例PTC和60例PTH组织中DKK1蛋白的表达,以及PTC组织中MMP-2、E-cadherin和vimentin的表达,并分析其与临床病理特征及相关性。结果生物信息学分析和免疫组化结果显示,DKK1对PTC诊断预测的曲线下面积(AUC)分别为0.674和0.874(P均<0.001),其灵敏度为95.0%,特异性为71.2%,诊断准确度为81.4%,误诊率为28.8%,漏诊率为5.0%,具有较高的诊断价值。PTC和PTH组织中DKK1的阳性率分别为28.8%(23/80)和95.0%(57/60),差异有统计学意义(P<0.001)。DKK1、MMP-2和E-cadherin表达与淋巴结转移相关(P<0.05),vimentin表达与淋巴结转移和患者年龄相关(P<0.05)。PTC组织中DKK1表达与E-cadherin表达呈正相关(rs=0.272,P<0.05),与MMP-2、vimentin表达均呈负相关(rs=-0.335、-0.336,P均<0.05)。结论DKK1可作为辅助PTC和PTH鉴别诊断的重要标志物;DKK1可能参与PTC的EMT过程,可作为预测PTC侵袭和淋巴结转移的潜在标志物。

经阴道彩色多普勒超声、动态对比增强磁共振成像联合血清DKK1、CA724、NLR对子宫内膜癌的诊断价值研究

目的探讨经阴道彩色多普勒超声(TVCDU)、动态对比增强磁共振成像(DCE-MRI)联合血清Dickkopf-1(DKK1)、糖类抗原724(CA724)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对子宫内膜癌(EC)的诊断价值研究。方法回顾性分析2018年01月至2021年12月于我院行手术治疗并经病理检查证实的68例EC患者(EC组)及52例子宫内膜息肉(EP)患者(EP组)的临床资料。比较两组间TVCDU、DCE-MRI定量参数以及血清DDK1、CA724、NLR水平的差异。建立受试者工作特征(ROC)预测分析模型,比较TVCDU、DCE-MRI、血清DKK1、CA724、NLR单独及联合诊断EC的诊断效能。结果TVCDU显示EC组子宫内膜病灶内部回声不均匀、与邻近肌层分界不清晰,子宫内膜厚度、血流丰富所占比例显著高于EP组(P<0.05),而血流阻力指数(RI)、搏动指数(PI)、平均血流速度(TAP)水平显著低于EP组(P<0.05)。DCE-MRI显示EC组的子宫内膜病灶主要表现为不规则增厚或肿块,T_(2)WI表现为等或稍高信号影,DCE主要表现早期强化后迅速下降,EC组的子宫内膜病灶的最大直径、DCE定量参数容积转运常数(Ktrans)、转运速率常数(Kep)、血管外细胞外容积分数(Vc)显著高于EP组(P<0.05)。EC组血清DKK1、CA724及NLR水平显著高于EP组(P<0.05)。ROC分析结果显示:TVCDU、DCE-MRI联合血清DKK1、CA724、NLR水平对EC鉴别诊断的准确性、敏感度、特异度最高。结论TVCDU、DCE-MRI联合血清DKK1、CA724、NLR水平有助于提高EC的鉴别诊断效能,进一步为临床提供真实客观的影像学和实验室证据。

新疆绝经后2型糖尿病女性DKK1基因rs1896367、rs2241529位点的基因多态性及突变与骨代谢的关系

目的:探讨新疆地区绝经后2型糖尿病(T2DM)女性DKK1基因rs1896367、rs2241529位点的基因多态性及突变与骨代谢指标的关系。方法:选取新疆地区绝经后T2DM女性136例,根据病史,糖耐量试验(OGTT)及双能X线(BMD)分为4组:A组(糖耐量正常伴骨量正常组26例),B组(糖耐量正常伴骨量异常组28例),C组(T2DM伴骨量正常组27例),D组(T2DM伴骨量异常组55例)。测定并记录空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三脂(TG)、钙(Ca)、磷(P)等临床生化指标;Sequenom飞行时间质谱法测定DKK1基因rs1896367、rs2241529位点的基因多态性;双能X线吸收法(dual energy X-ray, DEXA)测定腰椎(L1-4)、股骨颈的骨密度(bone mineral density, BMD)。结果:1) DKK1基因rs1896367位点:与A组相比,B组、C组、D组的基因型及等位基因的频率分布有统计学差异(P < 0.05);DKK1基因rs2241529位点:与A组相比,C组、D组的基因型及等位基因的频率分布有统计学差异(P < 0.05);2) LDL-C测定:DKK1基因rs1896367、rs2241529位点突变型(AG + AA;AG + GG) (3.389 ± 1.038;3.445 ± 1.045)低于野生型(GG;AA) (4.835 ± 0.035;4.835 ± 0.035),(P<0.05);3) 多元线性回归结果:绝经年限、甘油三脂是BMD (L1-4)及BMD (股骨颈)影响因素(P < 0.05)。结论:1) 在新疆绝经后T2DM女性中,DKK1基因rs1896367、rs2241529位点的基因多态性与糖、骨代谢有关。2) 多元线性回归方程结果显示:绝经年限增高、及甘油三脂的降低是BMD降低的危险因素。

舌鳞状细胞癌中DKK1的表达及分子机制

目的应用生物信息学和分子生物学实验探讨Dickkopf相关蛋白1(DKK1)在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的表达及分子机制。方法从TCGA-TSCC数据库下载患者信息,利用NetworkAnalysed网站筛选正常组织和癌组织间的差异表达基因,通过Kaplan-Meier分析和Lasson回归法寻找关键基因及临床预后,应用GO和KEGG分析差异表达基因的功能和通路,应用UALCAN数据库和免疫组化实验分析DKK1蛋白在TSCC中的表达,并分析其与临床病理特征的关系,应用Western blot实验检测DKK1在TSCC细胞中的表达,利用siRNA敲低Cal27细胞中DKK1蛋白的表达。结果NetworkAnalysed、Kaplan-Meier分析和Lasson回归法筛选出的3个关键基因DKK1、CYP19A1和IRX4在TSCC中高表达,且高表达组的患者生存率差。UALCAN数据库分析显示DKK1的mRNA水平在TSCC组织中高于正常组织,其高表达与TSCC患者的临床分期、组织学分级和淋巴结转移相关。免疫组化实验显示,DKK1蛋白在临床分期Ⅲ+Ⅳ期TSCC组织中的阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期TSCC组织。与癌旁组织相比,DKK1蛋白在TSCC组织中的表达水平升高。Western blot实验显示DKK1蛋白在TSCC细胞Cal27中的表达高于正常口腔上皮细胞HOEC。在TSCC细胞Cal27中敲低DKK1的表达后,β-catenin、p-p65和p65蛋白表达量减少。结论DKK1在TSCC组织和细胞中高表达且发挥重要作用,其可能作为TSCC早期诊断和药物治疗的新靶点。

多层螺旋CT参数联合ProGRP、DKK1在肺癌诊断中的价值分析

目的:探讨多层螺旋CT参数联合胃泌素释放肽前体(Progastrin releasing peptide,ProGRP)、分泌蛋白DKK1(Dickkopf-1,DKK1)在肺癌中的诊断价值。方法:随机收集2020年7月至2021年7月我院接受的87例肺癌患者为研究组,另选取在本院体检健康人员100例为对照组。分别采用电化学发光法、酶联免疫吸附法测定受检者ProGRP、DKK1水平,记录多层螺旋CT影像参数,包括表面通透性(Permeability surface,PS)、血容量(Blood volume,BV)、平均通过时间(Mean transit time,MTT)值,分析多层螺旋CT联合ProGRP、DKK1在肺癌诊断中的应用价值。结果:相比对照组,研究组多层螺旋CT参数PS、BV、MTT值较高(P<0.05),相比Ⅰ~Ⅱ期,Ⅲ~Ⅳ期患者多层螺旋CT参数PS、BV、MTT及血清ProGRP、DKK1水平升高(P<0.05),肺癌患者多层螺旋CT参数PS、BV、MTT及血清ProGRP、DKK1与临床病理分期均呈正相关,且多层螺旋CT参数PS、BV、MTT与ProGRP、DKK1水平呈正相关(P<0.05)。与多层螺旋CT参数、ProGRP、DKK1单项检查相比,三项联合对肺癌的临床诊断价值较高(P<0.05)。结论:多层螺旋CT参数与ProGRP、DKK1水平及肺癌TNM分期间存在线性关联,为肺癌发展诊断提供重要量化参考。

基于生物信息学探索DKK1在肺腺癌发生中的作用

背景与目的肺癌是我国最常见的恶性肿瘤,肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌的主要类型,严重威胁着人民的生命健康,目前关于血清分泌型蛋白1(Dikkopf 1,DKK1)在LUAD中的作用研究较少,本研究旨在通过生物信息学方法探究DKK1在LUAD发生发展中的作用及潜在的预后价值。方法应用基因型组织表达(genotype-tissue expression,GTEx)、癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和肿瘤与免疫系统交互网站(tumor-immune system interactions database,TISIDB)等多个数据库,对DKK1在LUAD中的表达、临床病理特征、免疫细胞浸润、预后和甲基化等进行分析,同时应用LinkedOmics数据库分析DKK1的共表达基因及其功能富集。收集2016年至2017年于新疆医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的59例石蜡包埋的LUAD患者病理样本,通过免疫组织化学试验(immunohistochemistry,IHC)进行表达预后验证。结果生信分析结果显示DKK1在LUAD组织的表达水平高于正常组织,晚期癌症中的表达高于早期阶段,实验验证后发现59例LUAD中阴性表达15例(25.4%),弱阳性表达18例(30.5%),强阳性表达26例(44.1%)。DKK1的不同表达情况与甲基化、预后以及多种免疫细胞的活动相关。功能富集显示DKK1可能参与表皮发育、细胞-基质连接等过程,京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析表明DKK1与ABC转运蛋白相关。生物信息学分析及临床病例标本显示DKK1高表达与LUAD患者较差的预后有关。结论DKK1在LUAD中高表达,与患者预后不良有关,并且DKK1与肿瘤免疫细胞浸润和通路密切相关。DKK1可能是LUAD潜在的预后标志物和免疫治疗新靶点。

Wnt/β-catenin信号通路在牙损伤修复中的作用

目的通过构建牙本质-牙髓损伤小鼠模型,探讨Wnt/β-catenin信号在其修复中的作用。方法选择雌性昆明小鼠40只,鼠龄6~8周,体质量18~22 g。将其随机分为Control组、Model组、LiCl组和DKK1组,每组10只。Control组常规饲养至实验结束,Model组、LiCl组和DKK1组均建立牙本质-牙髓损伤模型并通过牙周膜分别注射0.9%氯化钠溶液(生理盐水)、LiCl(激活Wnt/β-catenin信号通路)和DKK1(抑制Wnt/β-catenin信号通路)干预。损伤后7 d处死小鼠,通过苏木精-伊红(HE)染色,从形态学上观察牙损伤后的情况;Western blot和实时定量聚合酶链式反应(PCR)分别检测Wnt10a、胞内-β连锁蛋白(β-catenin)、支架蛋白Axin2及牙本质涎磷蛋白(DSPP)的mRNA和蛋白水平改变。结果实验成功构建了牙本质-牙髓损伤小鼠模型。使用LiCl和DKK1进行干预,HE染色结果显示LiCl组损伤部位得到良好的修复,Model组的牙本质、牙髓损伤修复不明显,DKK1组的损伤部位则几乎未修复。Western blot和实时定量PCR结果显示,Control组与Model组相比,Wnt10a mRNA、β-catenin mRNA、DSPP mRNA和Axin2 mRNA表达水均下降(Control组:1.003±0.096、1.003±0.100、1.014±0.200、1.000±0.033;Model组:1.724±0.172、1.971±0.261、2.090±0.116、1.827±0.066),且β-catenin mRNA和Axin2 mRNA下降显著(P<0.05);Li Cl组与Model相比,Wnt10a mRNA、β-catenin mRNA、DSPP mRNA和Axin2 mRNA表达水平均上升(LiCl组:3.497±0.475、2.463±0.242、3.563±0.181、2.576±0.326),而DKK1组均下降(1.096±0.141、1.220±0.245、1.163±0.272、1.169±0.047),差异均有统计学意义(P<0.05)。与Control组相比,Model组Wnt10a、β-catenin、DSPP和Axin2蛋白表达水平均下降(Model组:0.511±0.030、0.565±0.029、0.461±0.049、0.315±0.049;Control组:0.609±0.036、0.834±0.038、0.663±0.013、0.480±0.174),差异均有统计学意义(P<0.05);与Model组相比,Wnt10a、β-catenin、DSPP和Axin2蛋白表达水平在LiCl组上升(0.719±0.041、0.740±0.097、0.557±0.016、0.712±0.092),在DKK1组下降(0.418±0.035、0.019±0.010、0.138±0.017、0.453±0.013),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在牙本质-牙髓损伤中激活Wnt/β-catenin通路可加快牙本质形成,促进牙损伤的修复。

原发性骨质疏松症患者血清中sFRP4 DKK1表达及临床意义

目的:分析原发性骨质疏松症患者血清中sFRP4、DKK1表达及临床意义。方法:选取本院2019年1月至2021年1月期间收治的82例原发性骨质疏松症患者作为研究组,另选取同期健康体检者75例作为对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清sFRP4、DKK1水平,采用电化学发光法检测血清β胶原降解产物(β-CTX)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(P1NP)、骨桥蛋白(OPN)以及N端骨钙素(N-MID)水平,使用骨密度仪检测股骨BMD值以及腰椎L_(1~4)BMD值。采用Pearson法分析血清sFRP4、DKK1水平与骨代谢指标以及骨密度之间的相关性;采用Logistics回归分析原发性骨质疏松症的影响因素;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清sFRP4、DKK1水平对原发性骨质疏松症的诊断价值。结果:研究组血清sFRP4(62.98±10.79)μg/L和DKK1(14.28±3.97)μg/mL表达水平显著高于对照组(46.87±8.88)μg/L和(11.43±3.04)μg/mL(P<0.05),研究组β-CTX(4.52±1.02)ng/mL、P1NP(47.28±4.26)ng/mL、OPN(26.64±5.11)ng/mL以及N-MID(89.87±8.02)ng/mL显著高于对照组(3.55±0.92)ng/mL、(30.84±4.53)ng/mL、(19.01±4.12)ng/mL和(81.95±9.50)ng/mL(P<0.05),研究组股骨BMD(0.58±0.16)g/cm^(3)和腰椎L_(1~4)BMD(0.64±0.18g/cm^(3))显著低于对照组(0.82±0.19)g/cm^(3)和(0.83±0.23)g/cm^(3)(P<0.05)。根据pearson相关性分析得知,sFRP4和DKK1的表达水平呈正相关性(P<0.05),sFRP4和DKK1表达水平与股骨BMD和腰椎L_(1~4)BMD呈负相关(P<0.05),与β-CTX、P1NP、OPN和N-MID呈正相关(P<0.05)。根据Logistic回归分析得知,sFRP4、DKK1高表达是影响原发性骨质疏松症发生的危险因素(P<0.05)。血清sFRP4诊断原发性骨质疏松症的AUC为0.874,DKK1诊断原发性骨质疏松症的AUC为0.809,二者联合诊断原发性骨质疏松症的AUC为0.921,优于血清sFRP4和DKK1各自单独诊断(Z联合vs sFRP4=2.851、Z联合vsDKK1=4.365,P均<0.05)。结论:血清sFRP4和DKK1在原发性骨质疏松症患者中显著升高,与患者的骨代谢和BMD密切相关,二者联合可更好的诊断原发性骨质疏松症。

Dkk-Wnt信号通路在牙齿发育中作用的研究进展

哺乳动物的牙齿发育是外胚层上皮与间充质间相互调控和信号交流的结果,其中Dkk-Wnt信号通路是近年来牙胚发育研究领域的热点。Dkk-Wnt信号通路已被证实在牙体形成细胞功能的发挥、牙齿模式化、形态发生、牙冠钙化过程中扮演重要作用。牙齿发生发育分子机制的深入研究,将为牙再生组织工程技术以及相关技术的临床转化提供理论基础。本文就近十年对Wnt信号通路在牙齿发育中所起作用的研究作一综述。