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Dkk1在胃癌诊断、治疗及预后中的应用
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作者 庞培杰 殷鑫 +1 位作者 贾映东 刘天宇 《四川医学》 CAS 2024年第1期85-89,共5页
胃癌(gastric cancer,GC)是一种高侵袭性和高致死性的恶性肿瘤,是第五大常见癌症和第四大癌症死亡的主要原因^([1])。根治性手术是可手术GC患者的主要治疗方法,早期GC患者若及时治疗5年生存率可达90%以上[2-3]。但由于许多GC患者早期症... 胃癌(gastric cancer,GC)是一种高侵袭性和高致死性的恶性肿瘤,是第五大常见癌症和第四大癌症死亡的主要原因^([1])。根治性手术是可手术GC患者的主要治疗方法,早期GC患者若及时治疗5年生存率可达90%以上[2-3]。但由于许多GC患者早期症状不典型,在诊治过程中常与胃炎或胃溃疡相混淆,导致大多数患者在首次诊断时通常已处于中晚期阶段,失去了最佳治疗时机,直接影响GC患者的预后。因此,早发现、早诊断、早治疗是降低GC高发病率和高死亡率的重要手段。 展开更多
关键词 胃癌 Dkk1蛋白 生物标志物 诊断 治疗 预后
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基于DKK3调控探讨藏红花素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用
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作者 杨晓佳 吴敏 +1 位作者 江萌 刘立权 《中国中医药科技》 CAS 2024年第1期27-32,共6页
目的:探究藏红花素通过调控dickkopf WNT信号通路抑制因子3 (Dickkopf3,DKK3)对Aβ25-35诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法:Aβ25-35诱导小鼠海马神经细胞系HT22细胞模拟细胞损伤,CCK8增殖实验检测藏红花素最佳干预浓度。qPCR检测... 目的:探究藏红花素通过调控dickkopf WNT信号通路抑制因子3 (Dickkopf3,DKK3)对Aβ25-35诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法:Aβ25-35诱导小鼠海马神经细胞系HT22细胞模拟细胞损伤,CCK8增殖实验检测藏红花素最佳干预浓度。qPCR检测DKK3沉默质粒(DKK3 siRNA)以及DKK3过表达质粒(DKK3-OE)的DKK3 mRNA表达,随后进行细胞转染。细胞分为正常组、Aβ25-35组、Aβ25-35+藏红花素组(1.0μmol/L)、Aβ25-35+DKK3 siRNA组、Aβ25-35+siRNA对照组、DKK3-OE组、空白质粒对照组、DKK3-OE+藏红花素组(1.0μmol/L)组。采用流式细胞数检测细胞凋亡,Tubulin β染色观察细胞神经突触形态,Western blot检测细胞Aβ、DKK3、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:0.5~2.0μmol/L藏红花素可显著上调HT22细胞活力(P<0.05)。与正常组相比,Aβ25-35组和DKK3-OE组细胞凋亡显著增加,突触长度、分支数显著减少,Aβ、DKK3、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,β-catenin、Bcl-2蛋白蛋白表达显著降低(P<0.01)。与DKK3-OE组相比,藏红花素干预则能逆转以上结果。与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+藏红花素组和Aβ25-35+DKK3 siRNA组细胞的凋亡显著降低,突触长度、分支数显著增加,Aβ、DKK3、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达显著降低,β-catenin、Bcl-2蛋白蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:藏红花素对Aβ25-35诱导神经细胞损伤具有保护作用,其作用与通过抑制DKK3调控GSK-3β/β-catenin信号通路表达有关。 展开更多
关键词 阿尔兹海默症 藏红花素 DKK3 神经元 GSK-3β/β-catenin信号通路 细胞凋亡 体外实验
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阻断DKK1通过促进CD4^(+)T细胞Th1型极化改善抗肿瘤免疫应答
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作者 周啸宇 施涛 +3 位作者 张翼鹏 宋雪如 罗钰婷 魏嘉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期662-668,共7页
目的:探讨恶性肿瘤中Dickkopf-1(DKK1)表达对CD4^(+)T细胞极化的影响及其作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。方法:利用生物信息学方法分析DKK1在多种类型肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平,分析DKK1表达与肿瘤患者预后及肿瘤微环境免疫浸... 目的:探讨恶性肿瘤中Dickkopf-1(DKK1)表达对CD4^(+)T细胞极化的影响及其作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。方法:利用生物信息学方法分析DKK1在多种类型肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平,分析DKK1表达与肿瘤患者预后及肿瘤微环境免疫浸润间的相关性。利用流式细胞术检测DKK1蛋白对CD4^(+)T细胞表型变化的影响。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠皮下移植瘤模型,观察阻断DKK1对小鼠移植瘤生长和移植瘤组织中免疫细胞浸润与表型的影响。结果:DKK1 mRNA表达水平在多种肿瘤组织中显著高于癌旁组织,DKK1高表达与多数肿瘤患者的不良预后相关且在多数肿瘤中DKK1对CD4^(+)T细胞抗肿瘤免疫应答功能有重要负性调节作用(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,DKK1蛋白刺激可显著降低CD4^(+)T细胞中T-bet、IFN-γ及CD107a表达水平(均P<0.01)。在小鼠皮下黑色素瘤模型中发现,阻断DKK1可以显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.01),有效改善抗肿瘤免疫应答,表现为Th1细胞(T-bet+CD4^(+))占比显著升高(P<0.001),效应性CD8^(+)T细胞(CD44+CD62L-)占比显著升高(P<0.01),Th2细胞(GATA3^(+)CD4^(+))与Treg细胞占比显著下降(均P<0.01)。结论:阻断DKK1可有效促进CD4^(+)T细胞向Th1型极化,DKK1具有作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。 展开更多
关键词 DKK1 CD4^(+)T细胞 Th1极化 肿瘤微环境 免疫治疗
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LncRNA TERC调控H3K27me3、DKK1在地塞米松干预间充质干细胞成骨细胞分化中的相关研究
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作者 韩锁 齐岩松 +4 位作者 贾鹏 孙官文 王剑 呼和 高锦 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2024年第4期67-72,77,共7页
目的 研究地塞米松干预骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化后,过表达LncRNA TERC对组蛋白H3K27三甲基化(H3K27me3)及DKK1表达的影响,从而进一步验证其对成骨分化的作用。方法 (1)地塞米松干预BMSCs... 目的 研究地塞米松干预骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化后,过表达LncRNA TERC对组蛋白H3K27三甲基化(H3K27me3)及DKK1表达的影响,从而进一步验证其对成骨分化的作用。方法 (1)地塞米松干预BMSCs成骨分化,实验分为对照组(单纯成骨诱导组)及干预组(地塞米松干预成骨组),第14天使用茜素红染色检测的成骨分化能力,RT-PCR检测第3、7、14、21 d各组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因的表达。(2)地塞米松干预BMSCs成骨分化,构建TERC过表达载体,分别设置:空白对照组(地塞米松干预成骨组)、空白载体组、TERC过表达组。RT-PCR检测第3、7、14、21 d各组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因的表达,Western blot实验检测各组细胞中H3K27me3、DKK1的蛋白水平。结果 (1)地塞米松干预BMSCs成骨分化后,茜素红染色显示其成骨能力下降(P均<0.05),且RT-PCR显示,随着地塞米松干预时间的延长,BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因均下调(P均<0.05)。(2)TERC过表达转染实验中,TERC过表达组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因与其他两组比较均上调(P均<0.05),其他两组以上成骨基因表达水平比较,差异无统计学意义(P均>0.05);TERC过表达组细胞中H3K27me3的蛋白表达水平较其他两组显著上升(P均<0.05),DKK1的蛋白水平较其他两组显著下降(P均<0.05)。其他两组中以上基因蛋白表达水平相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 过表达LncRNA TERC能够显著调高地塞米松干预BMSCs向成骨细胞分化能力,并与H3K27me3及DKK1在地塞米松干预BMSCs向成骨细胞分化中存在有相关性。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨分化 地塞米松 LncRNA TERC H3K27me3 DKK1
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血清DKK1在肝细胞癌诊疗中的应用研究进展
5
作者 宗绍其 郭冰洁 殷子斐 《黑龙江医学》 2024年第10期1272-1274,共3页
肝细胞癌(HCC)是临床常见的恶性肿瘤,正确的早期诊断、科学的疗效判断在HCC癌的诊治中具有重要作用。近年来越来越多的研究证实,分泌性蛋白DKK1与HCC发生发展密切相关。血清DKK1作为一种简单易行的检测方法,在HCC诊疗中的应用价值日趋... 肝细胞癌(HCC)是临床常见的恶性肿瘤,正确的早期诊断、科学的疗效判断在HCC癌的诊治中具有重要作用。近年来越来越多的研究证实,分泌性蛋白DKK1与HCC发生发展密切相关。血清DKK1作为一种简单易行的检测方法,在HCC诊疗中的应用价值日趋凸显。本文近年来国内外关于使用血清DKK1进行HCC诊断和鉴别诊断、病情评估和判断、治疗疗效分析等三方面的研究文献进行系统整理,供同行参考借鉴。 展开更多
关键词 肝细胞癌 DKK1 血清 诊断 治疗
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云克对类风湿关节炎患者骨代谢及Wnt/DKK1相关因子表达研究
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作者 唐芳 蒋总 +3 位作者 秦瑶 马武开 兰维娅 刘正奇 《风湿病与关节炎》 2024年第7期16-21,共6页
目的:观察云克对类风湿关节炎患者炎症介导骨代谢的治疗效果及安全性,以及对Wnt/DKK1信号通路相关蛋白的影响。方法:选取2020年11月至2021年12月就诊于贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科的60例类风湿关节炎患者为研究对象,按照随机... 目的:观察云克对类风湿关节炎患者炎症介导骨代谢的治疗效果及安全性,以及对Wnt/DKK1信号通路相关蛋白的影响。方法:选取2020年11月至2021年12月就诊于贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科的60例类风湿关节炎患者为研究对象,按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组30例。对照组给予甲氨蝶呤片联合来氟米特片口服治疗,治疗组在对照组基础上加锝(99Tc)亚甲基二膦酸盐注射液(商品名:云克)治疗。治疗前及治疗后第3个月、第6个月、第12个月检测骨密度,以观察骨密度变化百分比;治疗前、治疗后第12周检测Wnt/β-catenin相关因子[β-连环蛋白(β-catenin)、Dickkopf-1相关蛋白(DKK1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(lLRP6)],细胞因子[白细胞介素(IL)-17、IL-6],骨代谢标志物[β-CTX、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tTRAP5b)]水平。结果:①治疗组ESR、DAS28-ESR评分、CRP、HAQ、VAS评分,在第4周至第12周均下降,且与对照组相比下降更为明显(P<0.05)。②治疗12周后,治疗组骨破坏标志物、炎症因子、Wnt信号通路抑制因子DKK1血清水平均较对照组低(P<0.05),治疗组Wnt通路活化因子β-catenin、LRP6较对照组血清含量高(P<0.05)。③治疗后,2组脊柱及髋部骨密度变化百分比比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组髋部及脊柱骨密度变化百分比均在第12个月与第3个月比较增长明显(P<0.05)。结论:云克可以改善类风湿关节炎患者临床症状,降低疾病活动度,调节骨代谢,可能通过Wnt/DKK1信号通路介导类风湿关节炎患者骨破坏进展,且安全性较好。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 云克 WNT DKK1 骨代谢 随机对照试验
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Dkk-Wnt信号通路在牙齿发育中作用的研究进展 被引量:3
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作者 吴也可 韩向龙 白丁 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2012年第5期298-301,共4页
哺乳动物的牙齿发育是外胚层上皮与间充质间相互调控和信号交流的结果,其中Dkk-Wnt信号通路是近年来牙胚发育研究领域的热点。Dkk-Wnt信号通路已被证实在牙体形成细胞功能的发挥、牙齿模式化、形态发生、牙冠钙化过程中扮演重要作用。... 哺乳动物的牙齿发育是外胚层上皮与间充质间相互调控和信号交流的结果,其中Dkk-Wnt信号通路是近年来牙胚发育研究领域的热点。Dkk-Wnt信号通路已被证实在牙体形成细胞功能的发挥、牙齿模式化、形态发生、牙冠钙化过程中扮演重要作用。牙齿发生发育分子机制的深入研究,将为牙再生组织工程技术以及相关技术的临床转化提供理论基础。本文就近十年对Wnt信号通路在牙齿发育中所起作用的研究作一综述。 展开更多
关键词 WNT dkks 牙齿发育 牙模式化 形态发生
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垂体腺瘤中Wnt通路抑制因子作用的研究进展
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作者 杨惠岚 安振梅 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期663-667,共5页
Wnt信号通路与多种肿瘤的发生相关,研究表明Wnt通路抑制因子的异常甲基化可使Wnt信号通路异常激活,从而诱导肿瘤的形成。垂体腺瘤作为颅内常见的肿瘤之一,临床症状主要由垂体激素过度分泌(或)缺乏和(或)肿瘤占位效应引起,其发病机制至... Wnt信号通路与多种肿瘤的发生相关,研究表明Wnt通路抑制因子的异常甲基化可使Wnt信号通路异常激活,从而诱导肿瘤的形成。垂体腺瘤作为颅内常见的肿瘤之一,临床症状主要由垂体激素过度分泌(或)缺乏和(或)肿瘤占位效应引起,其发病机制至今不完全清楚,部分研究表明垂体腺瘤的发生与Wnt通路抑制因子的异常甲基化相关。本文对垂体腺瘤中Wnt通路抑制因子作用的研究进行综述,为垂体腺瘤中去甲基化治疗提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 Wnt通路抑制因子 DNA甲基化 垂体腺瘤 s FRP dkks
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DDK家族蛋白和Wnt信号通路在肾细胞癌中的作用 被引量:2
9
作者 徐亮 许云飞 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2016年第2期122-127,共6页
Wnt信号通路在肾癌的发生、发展以及转归中都发挥着重要作用。本研究总结了这种通路在肾细胞癌中异常激活的可能机制。讨论Dickkopfs在调节这种通路中的作用。DKK蛋白家族由4个成员组成(DKK1~DKK4),充当Wnt信号通路的抑制剂。并非所... Wnt信号通路在肾癌的发生、发展以及转归中都发挥着重要作用。本研究总结了这种通路在肾细胞癌中异常激活的可能机制。讨论Dickkopfs在调节这种通路中的作用。DKK蛋白家族由4个成员组成(DKK1~DKK4),充当Wnt信号通路的抑制剂。并非所有成员都抑制Wnt信号通路。它们的功能意义需要进一步的证明,为DKK在肾脏癌变过程中对Wnt信号通路的调节提供新的认识。由于这种重要的致瘤作用,β-连环蛋白(β-catenin)和Wnt信号通路将成为治疗肾细胞癌的潜在目标。 展开更多
关键词 肾细胞肿瘤 dkks WNT信号通路 Β连环蛋白
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知母皂苷B对大鼠海马注射β-AP(25~35)致tau蛋白磷酸化的影响 被引量:15
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作者 钟雷 谭洁 +1 位作者 欧阳石 徐江平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1106-1109,共4页
目的观察大鼠双侧海马注射β淀粉样肽[β-AP(25 ̄35)]后,海马内p53、Wnt途径抑制剂DKK和磷酸化tau蛋白表达变化,并用此动物模型观察知母皂苷B的作用。方法用RT-PCR法检测p53和DKKmRNA表达的变化,用免疫组化法检测磷酸化的tau蛋白。结果A... 目的观察大鼠双侧海马注射β淀粉样肽[β-AP(25 ̄35)]后,海马内p53、Wnt途径抑制剂DKK和磷酸化tau蛋白表达变化,并用此动物模型观察知母皂苷B的作用。方法用RT-PCR法检测p53和DKKmRNA表达的变化,用免疫组化法检测磷酸化的tau蛋白。结果AD模型组海马内神经元的tau蛋白过度磷酸化,而p53和DKKmRNA的表达与假手术对照组相比也显著增多;而知母皂苷B给药治疗组均可使这种现象得到明显改善。结论知母皂苷B可通过抑制β-AP引起的p53及其后续的DKK的表达增加而有效改善AD大鼠脑内神经元的tau蛋白过度磷酸化。 展开更多
关键词 知母皂苷B TAU蛋白 P53 DKK Β淀粉样肽
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Dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种人肿瘤细胞系中的表达分析 被引量:16
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作者 余艳军 万晓桢 +4 位作者 于彬 游海燕 舒惠群 姚根富 覃文新 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1109-1112,共4页
目曲:检测dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法:采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果:肝癌组织检测RT—PCR... 目曲:检测dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法:采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果:肝癌组织检测RT—PCR,10/15肝癌中高表达;Real—time PCR方法检测,8/8肝癌中高表达;Western blot方法检测,5/8肝癌中高表达。酶联免疫吸附实验检测到DKK1在多种恶性肿瘤细胞系的细胞培养液上清液中均有表达,蛋白质表达量波动于5~210ng/mL之间;10种人恶性肿瘤细胞系在mRNA水平和蛋白质水平DKK1的表达均能检测到。结论:DKK1高表达于肝癌组织及广泛表达于多种恶性肿瘤细胞系,提示DKK1可能在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。 展开更多
关键词 肝细胞 基因 DKK1 肿瘤细胞 培养的
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左归丸调控DKK1靶点防治糖皮质激素性骨质疏松 被引量:14
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作者 张志达 任辉 +9 位作者 沈耿杨 张玉卓 招文华 余翔 尚奇 余佩沅 梁德 杨志东 姚珍松 江晓兵 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第16期2520-2525,共6页
背景:中医药可有效防治糖皮质激素性骨质疏松,但其防治机制尚不明确。DKK1是Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂,糖皮质激素可诱导其上调。因此,DKK1蛋白是防治糖皮质激素性骨质疏松的重要靶点。目的:探讨左归丸防治糖皮质激素性骨质疏松中... 背景:中医药可有效防治糖皮质激素性骨质疏松,但其防治机制尚不明确。DKK1是Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂,糖皮质激素可诱导其上调。因此,DKK1蛋白是防治糖皮质激素性骨质疏松的重要靶点。目的:探讨左归丸防治糖皮质激素性骨质疏松中对DKK1的调控作用。方法:18只3月龄雌性SD大鼠随机均分为3组:空白组、模型组和左归丸组。模型组和左归丸组大鼠皮下注射地塞米松建立糖皮质激素性骨质疏松模型;空白组给予等体积生理盐水;左归丸组皮下注射地塞米松同时给予左归丸水提液灌胃。1个月后取大鼠腰椎进行micro-CT检测骨量及骨微细结构、压缩试验检测生物力学性能,q PCR测定腰椎DKK1、Runx2和CTSK m RNA表达;血清检测碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)与空白组比较,模型组体积骨密度、相对骨体积、骨小梁数量和骨小梁厚度显著降低(P<0.05),骨小梁间距和结构模型指数较空白组显著增大(P<0.05),血清碱性磷酸酶活性较空白组呈降低趋势,DKK1 m RNA表达显著上调(P<0.05),成骨相关因子Runx2 m RNA表达呈下调趋势,破骨相关因子CTSK m RNA呈上调趋势;(2)与模型组比较,左归丸组体积骨密度、相对骨体积和骨小梁数量显著提升(P<0.05),结构模型指数显著降低(P<0.05),骨小梁间距有减小趋势但差异无显著性意义,血清碱性磷酸酶活性较模型组呈升高趋势,DKK1 m RNA表达显著下调(P<0.05),Runx2 m RNA表达呈上调趋势,CTSK m RNA呈下调趋势;(3)与模型组比较,左归丸组椎体压缩强度显著提升(P<0.05);(4)结果说明,左归丸可能通过下调DKK1的表达防治糖皮质激素性骨质疏松。 展开更多
关键词 中草药 骨密度 碱性磷酸酶 骨质疏松 组织工程 左归丸 激素性骨质疏松 DKK1 组织构建
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猪DKK1基因启动子区的克隆及其活性分析 被引量:10
13
作者 胡慧艳 贾青 +6 位作者 侯胜奎 刘津 赵思思 张伟峰 张军 张建亭 边慧敏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1150-1157,共8页
旨在初步探索DKK1基因转录调控机制,本研究利用启动子在线预测软件分析了该基因启动子区序列特征,根据Ensembl数据库已公布的猪DKK1基因的5′侧翼区序列,设计特异性PCR引物进行扩增、测序,进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-DKK1双荧... 旨在初步探索DKK1基因转录调控机制,本研究利用启动子在线预测软件分析了该基因启动子区序列特征,根据Ensembl数据库已公布的猪DKK1基因的5′侧翼区序列,设计特异性PCR引物进行扩增、测序,进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-DKK1双荧光素酶表达载体,分别转染293T细胞和Hela细胞,并进行双荧光素酶报告基因检测。结果显示,DKK1基因启动子中含有1个TATA-box、多种转录因子和1个CpG岛;DKK1基因启动子对239T细胞具有偏好性,其中p-1 679/+292bp启动子片段活性最高,且显著高于其他缺失片段(P<0.01)。-953^-1 679bp为核心启动子区域,-586^-953bp区域可能存在负调控元件,在-953^-1 679bp区域可能存在正调控元件。本试验通过对DKK1基因进行生物信息学分析并结合不同长度启动子片段双报告基因活性检测,证实了DKK1基因的5′侧翼区序列具有启动子转录活性,并初步确定了该基因的启动子区域,找到了启动子的核心区域和主要调控区域,为进一步研究DKK1基因转录调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 DKK1基因 启动子 荧光素酶活性 报告基因
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沉默DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞增殖、ALP活性和钙离子浓度影响研究 被引量:11
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作者 万雷 黄宏兴 +5 位作者 黄红 柴生颋 张志海 魏合伟 王凡 王吉利 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1361-1369,共9页
目的构建Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因沉默重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙离子浓度影响作用。方法设计出特异性针对DKK1、Sost和无关对照序列(Scr),构建DKK1、S... 目的构建Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因沉默重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙离子浓度影响作用。方法设计出特异性针对DKK1、Sost和无关对照序列(Scr),构建DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,用q PCR法和蛋白印记(Western blot)法选出沉默效率最好的扩增DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,并用荧光显微镜观察计算病毒滴度。MG63细胞被分成空白对照组、沉默DKK1(Ad-sh DKK1)组、沉默Sost(Ad-sh Sost)组、沉默DKK1+Sost(Ad-sh DKK1+Ad-sh Sost)组4组,分别用优选出的沉默效率最好的sh DKK1和sh Sost腺病毒载体转染MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测观察细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度。结果 1DKK1 p Ad-sh DKK1-1和Sost p Ad-GFP-shRNA-2沉默效率最高;2与空白对照组对比,沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默DKK1+Sost组的细胞光吸收值(OD)、ALP活性测定值均升高,而钙离子浓度均降低,以沉默DKK1+Sost组变化最明显,组间比较具有统计学差异(P<0.01和P<0.05)。结论 DKK1、Sost沉默可促进MG63细胞增殖、提高ALP活性,降低钙离子浓度,尤以二者同时沉默时的作用最强。 展开更多
关键词 DKK1 SOST 沉默基因 重组腺病毒 MG63细胞
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补肾健脾活血方干预过表达DKK1骨细胞对细胞活性及BMP2的影响 被引量:15
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作者 王凡 黄宏兴 +3 位作者 王吉利 万雷 黄红 柴爽 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期711-714,718,共5页
目的用补肾健脾活血方干预过表达的DKK1腺病毒转染的成骨细胞,通过观察细胞的活性及BMP2的表达,研究补肾健脾活血方治疗骨质疏松的分子生物学机制。方法将培养细胞分成NC对照组,Ad-DKK1组两组。NC对照组由空载腺病毒转染;Ad-DKK-1组由... 目的用补肾健脾活血方干预过表达的DKK1腺病毒转染的成骨细胞,通过观察细胞的活性及BMP2的表达,研究补肾健脾活血方治疗骨质疏松的分子生物学机制。方法将培养细胞分成NC对照组,Ad-DKK1组两组。NC对照组由空载腺病毒转染;Ad-DKK-1组由包装过表达的DKK1腺病毒转染。每组分别用含药血清和空白血清干预。采用CKK-8检测细胞增殖,蛋白印记法检测BMP2的表达。结果各组细胞活性变化:空白血清和含药血清干预均能提高细胞活性。与空白血清分别干预的两组比较,含药血清分别干预后的两组,在24 h,48 h,72 h的细胞活性的增加倍数都较多;在采用蛋白印记法检测后,BMP2在含药血清分别干预的两组的相对表达量较空白血清分别干预的两组的相对表达量高(P<0.01,P<0.01),在NC对照组中含药血清干预与空白血清干预无明显差异。结论补肾健脾活血方含药血清可以提高细胞活性,提高BMP2的相对表达量,有利于成骨细胞的矿化,尤其在过表达DKK1干预后。补肾健脾活血方可能通过调控DKK1进而影响成骨细胞的代谢。 展开更多
关键词 中医中药 骨质疏松症 DKK1 BMP2 补肾健脾活血方
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过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞和相关蛋白的影响 被引量:11
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作者 万雷 黄宏兴 +4 位作者 黄红 柴生颋 魏合伟 张志海 王吉利 《广州中医药大学学报》 CAS 2016年第4期578-584,共7页
【目的】针对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因构建过表达重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞和相关蛋白的影响。【方法】构建DKK1、Sost过表达重组腺病毒载体,将培养好的MG63细胞分为空白对照组、空... 【目的】针对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因构建过表达重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞和相关蛋白的影响。【方法】构建DKK1、Sost过表达重组腺病毒载体,将培养好的MG63细胞分为空白对照组、空载病毒组(NC对照组)、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组5组,根据组别不同分别用上述过表达重组腺病毒感染MG63细胞,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙离子浓度和骨调节蛋白表达情况。【结果】与空白对照组比较,过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的细胞光密度值、ALP活性值均显著降低,而钙离子浓度显著升高,以过表达DKK1+Sost组变化最明显(P<0.01)。与空白对照组比较,过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的骨保护蛋白(OPG)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(Lrp)5、骨形态发生蛋白(BMP)2、结缔组织生长因子(CTGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)2、骨桥蛋白(OPN)表达量均降低,而肿瘤坏死因子(TNF)-α表达量则升高,以过表达DKK1+Sost组变化最明显,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】过表达DKK1、Sost可降低MG63细胞增殖和ALP活性,升高钙离子浓度,对骨调节蛋白有一定影响,尤以两者同时过表达时的作用最强。 展开更多
关键词 DKK1 SOST 过表达基因 腺病毒 MG63细胞 细胞培养
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早期糖尿病大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路的变化 被引量:11
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作者 席晓慧 王福文 +2 位作者 王燕 尹茂山 牟艳玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期363-366,共4页
目的检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白在早期糖尿病大鼠心肌中的表达变化,明确其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法采用链脲佐菌素(60μg·g-1)一次性腹腔注射建立1型糖尿病大鼠模型,喂养2周,HE染色法观察心肌病理结构变化,W... 目的检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白在早期糖尿病大鼠心肌中的表达变化,明确其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法采用链脲佐菌素(60μg·g-1)一次性腹腔注射建立1型糖尿病大鼠模型,喂养2周,HE染色法观察心肌病理结构变化,Western blot和免疫组化法检测心肌Wnt2、β-catenin、c-Myc和DKK1蛋白的表达变化。结果显微镜下糖尿病组大鼠心肌可见局灶性心肌细胞变性、坏死。糖尿病组大鼠相对于正常对照组心肌Wnt2、β-catenin和c-Myc的表达明显增加(P<0.01),而DKK1的表达与正常对照组相比没有明显差异(P=0.885)。结论 Wnt/β-catenin信号通路的激活参与早期糖尿病心肌损伤,进一步研究其在糖尿病心肌中的变化可能为糖尿病心肌病找到新的治疗靶点。 展开更多
关键词 Wnt2 Β-CATENIN DKK1 C-MYC 糖尿病 心肌损伤 链脲佐菌素
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秦川牛DKK1基因SNPs检测及其与体尺、肉质性状的关联分析 被引量:6
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作者 高建斌 昝林森 +7 位作者 杨宁 李耀坤 皇甫一凡 郝瑞杰 马向辉 付常振 姜碧杰 成功 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期376-386,共11页
旨在对秦川牛DKK1基因进行SNPs检测,并研究其与秦川牛体尺、肉质性状的相关性。本研究随机选择相近饲养条件下447头18~24月龄的秦川牛母牛,采用DNA直接测序技术并结合PCR-SSCP方法进行DKK1基因全区段遗传变异检测。运用SPSS16.0程序中... 旨在对秦川牛DKK1基因进行SNPs检测,并研究其与秦川牛体尺、肉质性状的相关性。本研究随机选择相近饲养条件下447头18~24月龄的秦川牛母牛,采用DNA直接测序技术并结合PCR-SSCP方法进行DKK1基因全区段遗传变异检测。运用SPSS16.0程序中最小二乘法拟合线性模型对DKK1基因不同基因型与秦川牛体尺(体斜长、体高、腰高、尻长、腰角宽、胸深、胸围和坐骨端宽)和肉质性状(背膘厚、眼肌面积和肌间脂肪含量)进行关联分析。经DNA测序发现秦川牛DKK1基因存在5个突变位点,分别为第一内含子G523A突变;第二内含子A999G和A1 169G突变;第三内含子C1858T突变;第四外显子A2355G突变,其为第247位氨基酸Cys→Arg的错义突变。PCR-SSCP方法检测得到G523A和A2355G位点仅存在2种基因型;A999G、A1169G和C1858T位点存在3种基因型。卡方检验显示,G523A、A1169G和A2355G位点则处于Hardy-Weinberg极度不平衡状态(P<0.01),而A999G和C1858T位点于检测群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。关联分析表明,秦川牛DKK1基因不同突变位点的不同基因型与体斜长、体高、腰高、尻长、坐骨端宽和背膘厚、眼肌面积、肌间脂肪含量差异显著相关(P<0.05或P<0.01)。DKK1基因对秦川牛部分体尺、肉质性状有显著的影响,可以尝试作为秦川肉牛新品系培育的主效候选基因。 展开更多
关键词 秦川牛 DKK1基因 SNPS PCR-SSCP 体尺性状 肉质性状
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重组DKK1及pCMV-HA2/DKK1重组质粒对宫颈癌细胞体外增殖作用的影响 被引量:6
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作者 陆奎英 崔素芬 +4 位作者 徐亮 张玲玲 丁永玲 覃文新 包广宇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期898-901,共4页
目的观察人重组DKK1和pCMV-HA2/DKK1重组质粒对体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的影响。方法体外培养Hela细胞,非放射性细胞增殖(MTS)法检测重组DKK1、抗DKK1抗体和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞增殖作用的影响,wester... 目的观察人重组DKK1和pCMV-HA2/DKK1重组质粒对体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的影响。方法体外培养Hela细胞,非放射性细胞增殖(MTS)法检测重组DKK1、抗DKK1抗体和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞增殖作用的影响,western blot及ELISA法检测转染pCMV-HA2/DKK1重组质粒后Hela细胞中DKK1蛋白的表达情况。结果与对照组相比,10,50 ng/mL的DKK1对Hela细胞有明显抑制作用(F分别为162.31,184.65,P均<0.01);抗DKK1抗体对Hela细胞的增殖影响无统计学意义(P均>0.05);pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后对细胞增殖有明显抑制作用,加入抗DKK1抗体不能完全拮抗pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞的抑制作用;pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后可检测到DKK1蛋白表达,经western blot证实为DKK1蛋白(Mr约为38 000),ELISA法结果表明,DKK1蛋白的分泌量随培养时间的延长而增加,第5天时达峰值(19.82 mg/L)。结论重组DKK1和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1可抑制Hela细胞的增殖,抗DKK1抗体可部分抵抗DKK1的抑制作用,提示DKK1在宫颈癌肿瘤发生中对肿瘤细胞具有抑制作用。 展开更多
关键词 重组DKK1 真核表达质粒 pCMV-HA2/DKK1 HELA细胞 细胞增殖
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C-MET、Golph2、EZH2及DKK1蛋白在肝细胞肝癌中的表达及相关性 被引量:7
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作者 付尧 吴鸿雁 +5 位作者 顾劲扬 陈骏 余慧萍 孙琦 孟凡青 史炯 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1334-1338,共5页
目的探讨肝细胞生长因子受体(C-MET)、高尔基磷酸化蛋白2(Golph2)、组蛋白甲基转移酶(EZH2)及Dickkopf-1蛋白(DKK1)在原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及癌旁组织中的表达,进一步明确其在肿瘤诊断与进展中的作用。方法... 目的探讨肝细胞生长因子受体(C-MET)、高尔基磷酸化蛋白2(Golph2)、组蛋白甲基转移酶(EZH2)及Dickkopf-1蛋白(DKK1)在原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及癌旁组织中的表达,进一步明确其在肿瘤诊断与进展中的作用。方法采用免疫组化En Vision两步法对75例HCC及癌旁组织的组织芯片分别进行C-MET、Golph2、EZH2及DKK1检测,进一步分析其表达特点及与肿瘤分期、分级之间的相关性。结果 C-MET、Golph2、EZH2和DKK1在HCC组织中的阳性率分别为90.67%(68/75)、93.33%(70/75)、42.67%(32/75)和84.00%(63/75);在癌旁组织中的阳性率分别为88.00%(66/75)、89.33%(67/75)、6.67%(5/75)和68.00%(51/75)。EZH2蛋白对HCC的诊断特异性达93.33%。C-MET、Golph2、EZH2、DKK1蛋白表达与HCC患者年龄、性别、肿瘤最大径、结节数量及脉管侵犯均无明显相关性(P>0.05)。在不同分级HCC组织中C-MET、Golph2、EZH2表达差异具有统计学意义(P<0.05);在不同分期HCC组织中C-MET、Golph2、EZH2、DKK1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EZH2在HCC中的表达具有较高特异性,其可作为诊断HCC的辅助标记,但其敏感性略低。C-MET、Golph2、EZH2、DKK1表达与肿瘤分级具有一定的相关性,其表达与肿瘤进展无显著相关性。C-MET、Golph2、DKK1三者之间具有相关性,共同促进HCC的进展。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝细胞肝癌 C-MET Golph2 EZH2 DKK1 免疫组织化学
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