龙眼DlbZIP21基因克隆与表达分析

【目的】分析bZIP转录因子基因DlbZIP21在石硖和四季蜜两个龙眼品种不同组织和年周期表达水平的差异性,为揭示不同龙眼品种成花差异的分子调控机制提供理论依据。【方法】以石硖和四季蜜龙眼为试材,克隆其DlbZIP21基因,并对其编码蛋白理化性质特性、磷酸化位点和结构域进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR分析该基因的时空表达特征。【结果】克隆获得石硖和四季蜜龙眼DlbZIP21基因分别命名为DlbZIP21-sx和DlbZIP21-sj,其开放阅读框(ORF)均为1353 bp,各编码450个氨基酸残基,预测蛋白质分子量分别为49.80和49.81 kD,理论等电点均为6.53。BLAST比对和系统发育进化树分析结果表明,DlbZIP21-sx与DlbZIP21-sj蛋白的同源性为99.78%,同时与大豆、水稻和菜豆的亲缘关系较近。DlbZIP21基因在花芽中的表达量表现为四季蜜龙眼比石硖龙眼高5倍;在年周期中,从1~12月DlbZIP21基因在四季蜜龙眼中的表达量均普遍高于石硖龙眼,其中在花芽分化期和开花期(12月—翌年4月)的表达量高于石硖龙眼6~8倍。【结论】DlbZIP21基因可能在四季蜜龙眼成花中发挥重要作用,且在诱导四季蜜龙眼一年多次成花过程中扮演重要角色。

21基因检测在早期乳腺癌辅助放疗中的应用

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤。随着基因组学技术和医学前沿技术的发展,乳腺癌的全身治疗逐渐进入个体化医疗时代。但是乳腺癌的辅助放疗决策仍然主要依赖于临床病理因素,缺乏科学可靠的工具来指导不同人群的精准放疗。激素受体(HR)阳性/人表皮生长因子受体2(HER2)阴性型乳腺癌是乳腺癌最常见的分子亚型,21基因复发评分(RS)(Oncotype Dx^(TM),Genomic Health,Redwood City,CA)是一种商业可用的乳腺癌基因组测试。本文回顾了目前关于21基因RS用于HR阳性HER2阴性早期乳腺癌放疗决策的研究证据。目前的临床研究支持21基因RS对辅助放疗疗效具有预测价值,该领域几项大规模的前瞻性临床研究正在进行中。

MAB21L2基因变异致小眼畸形2例及MAB21L1和MAB21L2的基因型-表型的系统回顾研究

目的:总结MAB21L2基因的变异和临床特点,并与高度同源的MAB21L1基因进行比较。方法:对中山眼科中心临床基因数据库中MAB21L2基因变异患者进行基因型和表型分析,回顾性分析既往文献报道的MAB21L2基因和高度同源基因MAB21L1变异的表型-基因型的关系。结果:在2个小眼畸形家系中发现2个MAB21L2基因杂合变异:先证者1携带已知变异c.151C>G/p.(Arg51Gly),患者双眼小眼畸形伴虹膜脉络膜缺损,伴骨关节屈曲。母亲携带相同杂合变异但表型正常;先证者2携带未报道的变异c.1042G>T/p.(Glu348*),左眼小眼畸形,右眼正常且无全身异常。结合文献回顾发现,在显性遗传模式下,80%的MAB21L2杂合致病变异(20/25)和100%的MAB21L1杂合致病变异(25/25)发生在氨基酸49-52区域,导致小眼无眼或眼缺损异常(microphthalmia,anophthalmia or coloboma,MAC);携带该区域MAB21L2基因杂合突变的患者除MAC外,部分还伴骨骼关节发育异常(12/24,50%);杂合截短变异发生在MAB21L2基因可导致MAC(5/5,100%),而发生在MAB21L1则不致病。结论:在2个小眼畸形家系中发现了MAB21L2基因1个新致病变异和1个已知热点致病变异,通过文献综述比较和总结了MAB21L1和MAB21L2基因的突变频谱以及基因型-表型相互关系,为此类基因缺陷导致遗传病的诊断和鉴别诊断提供依据。

乳腺MRI预测ER^(+)/HER2^(-)乳腺癌21基因检测复发风险评分的价值

目的:探究乳腺磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)影像学特征与21基因检测复发风险评分(recurrence score,RS)的相关性,并建立RS预测模型。方法:收集2017年4月—2019年3月在复旦大学附属肿瘤医院进行21基因检测的雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,HER2)阴性乳腺癌患者的资料,筛选出有术前MRI检查的患者拟入组。以RS=26分为临界值,将患者分为高危组(RS≥26)与低危组(RS<26)。根据2013版乳腺影像报告和数据系统标准评估患者图像。运用单因素检验比较MRI影像学特征在RS分组间差异,运用多元logistic回归构建RS预测模型。以7∶3比例将患者分为训练组和验证组,使用Pearson相关系数筛选法和递归特征消除法进行特征筛选,运用合成少数类过采样技术法进行重采样,使用4种不同机器学习模型算法构建模型(线性支持向量机、随机森林、决策树和K近邻)。运用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估模型效能。结果:共入组159例患者(低危组58例,高危组101例)。在临床病理学特征中,孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达状态组间差异有统计学意义(P=0.017),低危组PR表达阳性患者占比更高。在MRI影像学特征中,肿块边缘组间差异有统计学意义(P=0.008),低危组肿块多表现为边缘毛刺(64.8%),高危组肿块多表现为边缘不规则(54.7%)。将PR状态和肿块边缘纳入多因素logistic回归模型,PR阳性与PR阴性相比,PR阳性患者复发风险相对低,OR值为0.110(P=0.038);边缘毛刺的肿块与边缘不规则肿块相比,边缘毛刺的肿块复发风险相对低,OR值为0.343(P=0.004)。Logistic回归模型曲线下面积(area under curve,AUC)为0.67,且该模型校准性能良好且具有一定临床实用性。以7∶3划分后,训练组纳入111例患者(低危组34例,高危组77例),验证组纳入48例患者(低危组和高危组均为24例)。4种机器学习模型AUC为0.64~0.69,支持向量机和随机森林模型预测效能相对较高。结论:MRI在评估ER+/HER-乳腺癌患者复发风险方面具有潜在价值。

德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p基因及其脂类代谢靶基因表达研究

试验旨在探究德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p基因及其靶基因的表达规律。选取饲养条件相同、同一胎次、年龄相近、处于泌乳中期的健康德宏奶水牛,分为高乳脂率组(H组)、中乳脂率组(M组)和低乳脂率组(L组)。每组选取3头奶水牛,屠宰后采集乳腺组织,提取总RNA。采用生物信息学方法预测miR-21-5p的靶基因。利用荧光定量PCR技术检测miR-21-5p及其靶基因的表达水平,并与课题组前期测定的乳脂率进行相关性分析。结果显示,miR-21-5p的靶基因可能为AGPAT6和GPAM。L组德宏奶水牛乳腺组织中miR-21-5p的表达水平高于M组和H组(P<0.01)。相关性分析结果显示,miR-21-5p与靶基因AGPAT6的表达水平呈极显著负相关(P<0.01),与靶基因GPAM的表达水平呈显著负相关(P<0.05),德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p表达量与乳脂率呈显著负相关(P<0.05),靶基因AGPAT6和GPAM与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。蛋白互作网络结果显示,AGPAT6和GPAM互作关系最强。研究表明,miR-21-5p可能通过负调控靶基因AGPAT6和GPAM的表达影响乳脂合成,进而影响乳脂率。

Thermococcus siculi HJ21高温普鲁兰酶基因的克隆表达及其热稳定性保护剂研究

普鲁兰酶是水解α-1,6糖苷键的淀粉脱支酶,可提高淀粉制糖的糖化率。该研究将古菌Thermococcus siculi HJ21的超嗜热普鲁兰酶Pul-HJΔ782基因克隆在冷休克启动子cspA的质粒pColdⅠ,在宿主大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中诱导表达,研究其酶学性质,通过单因素和响应面试验优化该酶的热稳定性保护剂,并考察保护剂对酶水解马铃薯淀粉的影响。结果表明,该酶的最适作用温度和pH分别为90℃和6.5,在温度80~100℃及pH 4.0~9.0范围稳定性良好。最佳热稳定性保护剂配方为Ca^(2+)添加量0.15 mol/L、甘油添加量5.4%、Tween 20添加量3.8 mL/L、明胶添加量4.0 g/L。在该优化条件下,90℃保温12 h后,酶活保留率为97.43%,比对照组提高了34.94%。该酶的糖化率显著提高,对马铃薯淀粉糖化40 h葡萄糖当量(DE)值为58.35%,比对照组比提高了11.78%。

毛头鬼伞漆酶基因Cc_lac21的克隆及生物信息学和组织表达分析

为了确定毛头鬼伞基因组中漆酶基因Cc_lac21的“缺口”序列及可能的生理功能,本研究对其进行克隆和生物信息学分析,并以18S rDNA为内参基因,检测菌丝阶段以及商品成熟阶段子实体的菌盖、菌柄顶端和菌柄基部Cc_lac21的表达水平。结果表明,Cc_lac21基因全长2243 bp,含有12个内含子、13个外显子,编码序列为1452 bp,编码483个氨基酸。Cc_Lac21为稳定的亲水性蛋白,N端前17个氨基酸为信号肽序列,分泌到胞外;二级结构以无规则卷曲和延伸链为主;在28个丝氨酸(S)、21个苏氨酸(T)和5个酪氨酸(Y)上可能发生磷酸化修饰;在第286位的苏氨酸和第381位的丝氨酸处可能发生O-糖基化修饰;含有3个铜氧化蛋白结构域,分别是2个铜氧化还原蛋白超家族(cupredoxin super family)和1个云芝Tv-LCC样真菌漆酶的第三个铜氧化还原域(CuRO_(3)_Tv-LCC9);与鳞白环蘑漆酶的亲缘关系最近,包含3个基序。通过RT-qPCR分析发现,Cc_lac21在菌丝体阶段和成熟菌柄基部表达量高,在菌盖和伸长生长的菌柄顶端表达量低,推测Cc_lac21可能参与基质木质素的降解以及菌柄中菌丝细胞壁的成熟过程。本研究结果可为探究漆酶基因参与菌柄细胞壁成熟机制奠定基础。

1q21扩增型乳腺癌致癌基因的研究进展

乳腺癌是一种异质性较高的肿瘤,染色体扩增是驱动肿瘤细胞异质性的主要原因之一。1q21区域的扩增是人类乳腺癌中最常见的基因组拷贝数变化事件,该区域扩增型乳腺癌患者的疾病进展、耐药性和死亡的风险均增加。与1q21扩增相关的染色体畸变会导致该区域内致癌基因的表达失调,进而诱发乳腺癌转移、化学耐药及肿瘤复发等。该文对1q21扩增型乳腺癌相关的致癌基因及其功能研究进行综述,以期为开发和优化针对1q21扩增型乳腺癌的诊疗提供科学依据。

长链基因间非编码RNA-p21通过调控YAP表达促进胃癌细胞凋亡

目的:探讨lincRNA-p21在胃癌细胞凋亡中的作用及其潜在机制。方法:在胃癌MGC-803细胞系中分别转染siRNA以及过表达质粒实现下调/上调lincRNA-p21表达。lincRNA-p21和YAP的mRNA水平由qRT-PCR方法测定。之后通过流式细胞术和TUNEL测定对细胞凋亡进行检测,并用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白。结果:上调lincRNA-p21促进胃癌细胞凋亡,反之亦然。研究还发现下调lincRNA-p21会引起YAP mRNA及蛋白表达量升高。最重要的是,由lincRNA-p21下调引起的抑制凋亡作用可以通过敲低YAP表达来解除。结论:lincRNA-p21可以通过调控YAP表达促进胃癌细胞凋亡,这可能为胃癌治疗提供新思路。

TSC21基因部分缺失对雄性小鼠生育功能的影响

目的:探讨雄性小鼠体内TSC21基因的生物功能。方法:C57BL/6J TSC21基因敲除杂合子雄性小鼠12只(实验组)和野生型雄性小鼠12只(对照组),比较交配后雌性小鼠产仔数目,泌尿生殖系统发育情况,睾丸质量和组织形态,以及精子密度和精子活率。结果:两组交配后雌性小鼠产仔数目、雄性小鼠睾丸质量、精子密度和精子活率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。两组雄性小鼠泌尿生殖系统发育情况,睾丸组织和精子形态均正常。结论:TSC21基因部分缺失对雄性小鼠生育功能未造成明显影响。

21基因复发风险评分在激素受体阳性乳腺癌患者中的应用

近10年来,随着精准医疗的发展,乳腺癌的治疗进入了一个新时代,即在不影响生存结果的前提下,趋向于治疗降级、方案个体化,在给患者带来最大获益的同时尽可能减少医源性毒性暴露。21基因复发风险评分(21-gene recurrence score, RS)能够评估乳腺癌患者复发风险和化疗获益,已被美国临床肿瘤学会、美国国家综合癌症网络及中国抗癌协会推荐用于指导激素受体阳性、人类表皮生长因子受体2阴性的早期乳腺癌患者辅助治疗,但其临床应用尚存有争议。目前的研究主要聚焦于RS的临床优化,以更加准确地识别可从辅助治疗中受益的患者,使乳腺癌患者的治疗方案更加个体化。本文主要就RS在激素受体阳性乳腺癌患者辅助治疗中的应用、RS对临床决策的影响、RS面临的争议与应用前景等方面进行综述,以期指导临床进一步扩展RS的应用范围,使乳腺癌患者的辅助治疗更加精准。

IL-21/IL-21R基因多态性及表达水平与白癜风的相关性

目的探讨IL-21/IL-21R基因多态性及表达水平与白癜风的相关性。方法选择2015年9月—2016年12月就诊于黄石市中心医院皮肤科门诊的白癜风患者300例纳入患者组,选择同期于黄石市中心医院体检结论为健康的人群300例纳入健康对照组。抽取患者及健康对照空腹静脉血后将样本分为3份,1份样本通过ELISA法检测患者血清IL-21水平,1份样本分离外周血单个核淋巴细胞后通过流式细胞技术检测其表面IL-21R表达占比情况,最后1份通过SNaPshot微测序法检测样本中IL-21及IL-21R基因多态性,分析患者组与对照组上述指标之间的差异,并采用Logistic回归法分析影响白癜风发生的危险因素。结果患者组IL-21外周血含量为157.18(126.01,189.67)pg/mL,而健康对照组中外周血IL-21含量132.73(107.31,156.21)pg/mL,患者组外周血IL-21含量显著高于健康对照组(Z=3.156,P=0.009);患者组各单核淋巴细胞表面IL-21R表达占比均显著高于健康对照组(P<0.05);两组样本IL-21 rs907715及IL-21R rs2285452分布存在显著差异(P<0.05);患者组IL-21 rs907715中单核苷酸A分布频率及IL-21R rs2285452单核苷酸G分布频率显著高于健康对照组(P<0.05);rs907715及rs2285452为影响白癜风发生的独立因素;其中与rs907715分型为GG比较,rs907715分型为AA(OR=1.424,95%CI=1.007~5.274)是影响白癜风发生的独立危险因素;与rs2285452分型为GG比较,rs2285452分型为AA(OR=0.019,95%CI=0.006~0.707)是影响白癜风发生的独立保护因素(均P<0.05)。结论白癜风患者IL-21(rs907715)/IL-21R(rs2285452)分布与健康人群之间存在显著差异,可能是导致白癜风发生的关键因素。

IL-21和CCL19修饰可提高NKP30 CAR-T细胞对肺癌的杀伤效率并促进其肿瘤浸润

目的探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。方法在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激;流式细胞术检测免疫细胞表型;迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用;乳酸脱氢酶(LDH)及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测IFN-γ的分泌数量;ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况;体内实验中,将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊,构建斑马鱼移植瘤模型,24 h后将免疫细胞注射至同样部位,体式荧光显微镜拍摄荧光。结果NKP30配体(B7H6)在正常组织及血液细胞不表达,在肺癌细胞上高表达(90%以上)。IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比,具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成(P<0.001),免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低(P<0.005),对肺癌细胞具有更强的杀伤能力(P<0.001),伴随IFN-γ数量明显增加(P<0.001)。IL-21-CCL19 CAR-T细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL‑21(3152.33±526.74 pg/mL)和趋化因子CCL19(1853±211.95 pg/mL)。体内实验中,CAR-T细胞和普通T细胞比较,具有较强的杀伤能力和增殖能力,但2种CAR-T细胞无明显差异(P>0.05)。结论IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部,有效杀伤肿瘤细胞,同时产生更多的记忆T细胞。

含Pm21基因的次级易位创制及鉴定

小麦-簇毛麦6VS.6AL易位携带抗白粉病基因Pm21,对我国小麦抗白粉病育种做出了重要贡献。本文对162份四川小麦品种(系)的55KSNP芯片数据分析表明,25份含6VS.6AL易位染色体,占15.4%。重组位置和单倍型分析表明,这些材料的6VS.6AL均为着丝点易位、具有单一来源。根据系谱分析, 92R178为最原始的供体材料。利用由ph1b诱导6VS/6AS部分同源重组形成的,含Pm21基因的初级易位6VS-6AS.6AL和6AS-6VS.6AL为亲本,创制了1个含Pm21基因、6VS片段大幅减小的6AS-6VS-6AS.6AL次级易位。根据中国春参考基因组,该次级易位的2个重组位点,分别位于6A染色体53.1~53.8 Mb和90.7~92.2 Mb之间,易位片段大小在36.9~39.1 Mb之间。分子细胞学鉴定表明,ph1b诱导外源易位的同时,小麦自身的内源染色体也发生了大量易位,这影响易位系的遗传稳定和育种利用。为了解决这个问题,建议将ph1b基因突变系以杂合的形式进行长期保存。同时,在利用ph1b诱导小麦-外源易位的过程中,尽量减少ph1b纯合状态下的繁殖世代,以减少小麦内源染色体易位。育种利用时,应尽快消除小麦内源易位。

温石棉对内皮细胞Wnt5a、p16和p21表达的影响

目的探讨温石棉对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响。方法实验组以50、100、200 mg/L温石棉纤维液刺激HUVECs 24、48、72 h,对照组仅加RPMI 1640培养基培养细胞,观察细胞形态变化,β-半乳糖苷酶法分析细胞衰老情况,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中Wnt5a、p16和p21 mRNA的表达情况。结果实验组HUVECs多呈梭形,部分呈圆形或不规则形,出现裸核及空泡现象,可见死亡细胞。随温石棉质量浓度及暴露时间的增加,细胞活性逐渐降低,衰老细胞逐渐增多。100 mg/L温石棉处理HUVECs 24 h时,细胞生长较活跃。与对照组相比,实验组Wnt5a、p16和p21 mRNA表达水平均增高(P<0.05)。结论温石棉可促进HUVECs衰老,Wnt5a、p16和p21参与此过程。

乳腺MRI影像组学联合21基因检测预测乳腺癌复发风险的研究进展

乳腺癌具有高度异质性,且生物学行为差异大,不同患者的治疗方法与疗效不尽相同.在发展迅速的现代医疗水平之下,术后复发转移仍是其死亡的重要原因之一.因此如何更精准地预测乳腺癌患者术后复发风险成为当前临床工作中亟待解决的问题.21基因检测是近年来快速发展的乳腺癌复发风险预测的可靠方法,但是由于恶性肿瘤普遍存在的异质性,乳腺癌患者的基因检测不可避免会存在取样的局限性.乳腺MRI影像组学无创且高通量地提取MRI图像中的影像学特征,并结合临床特征获取更多肿瘤内在信息进而指导临床实现精准治疗,具有显著的临床应用价值.近年来已有国内外学者利用影像组学技术预测乳腺肿瘤复发风险,然而目前影像学标志物缺乏足够的生物学验证使其临床应用受限.因此联合乳腺MRI影像组学与21基因检测,寻找影像学特征与检测结果的相关性,或能通过无创的MRI影像学检查代替相应临床指标以预测乳腺癌复发风险具有重要意义.本文就以上两者的关联以及其研究进展进行综述,以期为临床诊疗提供借鉴.

miR-21低表达对垂体瘤细胞系RC-4BC增殖、凋亡的影响及与PTEN靶向关系

目的观察微小RNA-21(miR-21)低表达对垂体瘤细胞系RC-4BC增殖、凋亡的影响,并分析其与第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因(PTEN)的靶向关系。方法取对数生长期的RC-4BC细胞分为两组,沉默组转染miR-21抑制物miR-21 inhibitor,阴性对照组转染抑制物阴性对照NC-inhibitor,采用RT-PCR法检测miR-21、第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因(PTEN)mRNA,采用CCK8实验观察两组细胞增殖能力(以OD值表示),采用平板克隆实验观察两组细胞集落形成能力(以集落形成数表示),采用流式细胞术观察两组细胞凋亡率并观察细胞周期分布情况。收集RC-4BC细胞制备单细胞悬液,分别将miR-21 mimics或NC-mimics与PTEN-WT或PTEN-MUT共转染至RC-4BC细胞,转染后细胞标记为miR-21 mimics+PTEN-WT组、NC-mimics+PTEN-WT组、miR-21 mimics+PTEN-MUT组、NC-mimics+PTEN-MUT组,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PTEN的靶向关系。结果沉默组RC-4BC细胞中miR-21、PTEN mRNA相对表达量分别为0.30±0.08、2.89±0.14,阴性对照组RC-4BC细胞中miR-21、PTEN mRNA相对表达量分别为1.01±0.02、0.99±0.03,两组相比,P均<0.05。沉默组RC-4BC细胞24 h、48 h、72 h时OD值均低于阴性对照组(P均<0.05)。沉默组RC-4BC细胞集落形成数低于阴性对照组(P<0.05)。沉默组RC-4BC细胞凋亡率高于阴性对照组(P<0.05)。沉默组RC-4BC细胞G0/G1期占比65.65%±7.82%、S期占比19.25%±3.70%,阴性对照组RC-4BC细胞G0/G1期占比45.62%±5.03%、S期占比35.72%±4.67%,两组相比,P均<0.05。miR-21 mimics+PTEN-WT组、NC-mimics+PTEN-WT组、miR-21 mimics+PTEN-MUT组、NC-mimics+PTEN-MUT组细胞的相对荧光素酶活性分别为0.39±0.07、1.02±0.03、1.01±0.04、1.00±0.03,其中miR-21 mimics+PTEN-WT组相对荧光素酶活性与其他各组相比,P均<0.05。结论沉默miR-21能够移至垂体瘤细胞系RC-4BC的增殖、促进其凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN基因有关。

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建伪狂犬病病毒UL21基因缺失重组病毒

旨在构建伪狂犬病病毒(PRV)UL21基因缺失重组病毒。采用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白系统9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术,设计针对UL21的单导向RNA(sgRNA),并构建UL21基因左右两侧同源臂质粒(pUC19 UL21-Left-Right-GFP),将其与PRV基因组共转染HEK-293T细胞,通过蚀斑纯化获得PRV-ΔUL21病毒,并通过PCR和Western blot检测方法鉴定该毒株成功缺失了UL21基因。结果表明,CRISPR/Cas9技术可用于构建PRV基因缺失重组病毒,为PRV致病机制研究提供重要依据。

鸡源IL-21基因的密码子优化、表达及生物活性分析初探

本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/MH,根据人偏爱密码子对鸡IL-21基因进行密码子优化,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-opt/MH。测序正确后转染HEK293T细胞进行表达,经His标签纯化后,通过脾脏淋巴细胞增殖实验鉴定纯化后的IL-21蛋白生物活性。结果显示,扩增的鸡IL-21序列与Genbank中的IL-21序列相对比有2个碱基发生突变(141C→141T,312C→312T),但不影响氨基酸序列;生物信息学分析表明,鸡IL-21基因含有信号肽序列可介导其分泌表达,同时含有1个潜在的N-糖基化位点;Western blot在培养基和细胞内均检测到鸡IL-21蛋白的表达;密码子优化后IL-21表达水平与野生型相比显著升高(P<0.0001);MTT法检测发现,纯化后的IL-21具有增强淋巴细胞增殖的功能。综上所述,本试验成功构建了鸡IL-21的真核表达载体,通过密码子优化提高了IL-21在真核细胞中的表达且表达的蛋白具有良好的生物活性,为进一步探索IL-21蛋白功能奠定一定的基础。

细胞角蛋白19片段21-1、转移相关基因1、切除修复交叉互补基因1在肺癌中的应用价值

目的 分析细胞角蛋白19片段21-1(CYFRA21-1)、转移相关基因1(MTA1)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)检测在肺癌患者术前分期及淋巴结转移中的应用价值。方法 收集我院96例行手术治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床资料,记录其癌组织与癌旁组织CYFRA21-1、MTA1、ERCC-1表达情况,比较三项指标在不同临床病理特征者癌组织中的表达差异,评估癌组织CYFRA21-1、MTA1、ERCC-1表达与NSCLC临床病理特征的关联性。结果 NSCLC患者癌组织CYFRA21-1、MTA1、ERCC-1表达阳性率均高于癌旁组织(P<0.05)。淋巴结转移者癌组织MTA1、ERCC-1阳性率及表达强度均高于未淋巴结转移者(P<0.05),TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者癌组织CYFRA21-1、MTA1、ERCC-1阳性率及表达强度均高于Ⅰ~Ⅱ期者(P<0.05)。淋巴结转移与癌组织MTA1、ERCC-1表达强度呈正相关,TNM分期与癌组织CYFRA21-1、MTA1、ERCC-1表达强度呈正相关(P<0.05)。结论 检测癌组织CYFRA21-1、MTA1、ERCC-1表达情况,可辅助判断NSCLC临床分期及淋巴结转移,为临床治疗提供指导意见。