长链非编码RNA DLX6-AS1调控喉癌细胞的机制研究

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)DLX6-AS1通过调节miR-144诱导喉癌巨噬细胞M2极化对喉癌细胞的影响。方法从健康志愿者中分离外周血单核细胞PBMCs,从喉癌患者中分离肿瘤相关巨噬细胞TAMs,qRT-PCR检测PBMCs和TAMs中白细胞介素10(IL-10)、精氨酸酶1(Arg-1)、lncRNA DLX6-AS1与miR-144的表达。用白细胞介素4(IL-4)诱导人单核细胞白血病细胞THP-1巨噬细胞M2极化,qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1、IL-10和Arg-1与CD163表达。下调lncRNA DLX6-AS1在Hep-2细胞中的表达量后,Hep-2细胞与THP-1细胞(M2型巨噬细胞)共培养48 h,CCK-8实验检测Hep-2细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞侵袭数目,Western blot实验检测细胞上皮间质转化能力。生物信息学软件miRcode预测lncRNA DLX6-AS1与miR-144的结合位点,并进行双荧光素酶活性检测。过表达lncRNA DLX6-AS1与miR-144后,分别用CCK-8、Transwell和Western blot检测Hep-2细胞增殖、侵袭和上皮间质转化能力。结果与PBMCs相比,TAMs中IL-10和Arg-1的mRNA表达明显升高(P<0.01),lncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.01),miR-144表达显著降低(P<0.01)。与Control组相比,IL-4组THP-1巨噬细胞IL-10、Arg-1和CD163表达显著上调(P<0.01);与IL-4+si-NC组相比,IL-4+si-DLX6-AS1组THP-1巨噬细胞IL-10、Arg-1和CD163表达则显著下调(P<0.01)。与IL-4+si-NC组相比,IL-4+si-DLX6-AS1组Hep-2细胞活力显著下降(P<0.01),侵袭数目明显减少(P<0.01),N-cadherin表达显著下调(P<0.01),E-cadherin表达显著上调(P<0.01)。生物信息学分析发现,lncRNA DLX6-AS1与miR-144之间存在潜在的结合位点;双荧光素酶报告系统检测显示,lncRNA DLX6-AS1与miR-144之间存在直接相互作用。与pcDNA-3.1(+)+mimics NC组相比,pcDNA-DLX6-AS1+mimics NC组THP-1巨噬细胞内IL-10、Arg-1和CD163表达显著上调(P<0.01);与pcDNA-3.1(+)+miR-144 mimics组相比,pcDNA-DLX6-AS1+miR-144 mimics组THP-1巨噬细胞内IL-10、Arg-1和CD163表达显著上调(P<0.01)。与pcDNA-3.1(+)+miR-144 mimics组相比,pcDNA-DLX6-AS1+miR-144 mimics组Hep-2细胞活力及细胞侵袭数目显著增加(P<0.01),N-cadherin表达显著上调(P<0.01),E-cadherin表达显著下调(P<0.01)。结论lncRNA DLX6-AS1可通过调节miR-144诱导喉癌巨噬细胞M2极化,并促进喉癌细胞发展。

Expression and function of long non-coding RNA DLX6-AS1 in endometrial cancer

Background:LncRNA DLX6-AS1 has been uncovered to exert effects on various cancers.Nevertheless,the impacts of DLX6-AS1 on endometrial cancer(EC)development remained obscure.The study explored the influence of DLX6-AS1 on EC progression via the microRNA(miR)-374a-3p/zinc-finger protein(ZFX)axis.Methods:EC cell lines were collected and DLX6-AS1,miR-374a-3p,and ZFX levels in EC cell lines were detected.The EC cells were transfected with DLX6-AS1,miR-374a-3p,and ZFX constructs to examine the biological functions of EC cells.The xenograft model was established for detecting tumor growth.Rescue experiments were conducted to verify the interaction of DLX6-AS1,miR-374a-3p,and ZFX in EC cells.Results:DLX6-AS1 and ZFX levels were elevated,while miR-374a-3p exhibited a reduced level in EC cells.Silencing DLX6-AS1 and elevated miR-374a-3p expressions repressed the biological activities of EC cells.Reduced DLX6-AS1 repressed tumor development.MiR-374a-3p silencing reversed the impacts of DLX6-AS1 silencing,while ZFX overexpression abrogated the impacts of miR-374a-3p elevation on EC cell growth.Mechanically,DLX6-AS1 was found to bind to miR-374a-3p,and miR-374a-3p targeted ZFX.Conclusion:DLX6-AS1 depletion restricts the malignant phenotype of EC cells.The study might provide novel therapeutic biomarkers for EC treatment.

lncRNA DLX6-AS1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNAs表达具备时间特异性和空间特异性。DLX6-AS1是lncRNAs家族中的一员,其表达水平在多种恶性肿瘤中发生显著改变,提示DLX6-AS1在肿瘤的发生、发展和预后中发挥作用。文章对近5年国内外关于DLX6-AS1在恶性肿瘤中的研究进行综述,以期为恶性肿瘤的诊断和潜在治疗靶点选择提供参考。

Dlx1的天然反义转录物在大脑发育中的功能探索

目的探索Dlx1的天然反义转录物(Dlx1as)在小鼠大脑发育过程中的功能。方法根据生物信息学分析与分子生物学实验验证Dlx1as是否具有多聚腺苷酸尾,采用实时定量PCR检测Dlx1as与Dlx1 mRNA在小鼠大脑发育过程中随时间的变化,利用原位杂交的技术比较Dlx1as与Dlx1 mRNA空间表达谱。结果 Dlx1as具有多聚腺苷酸尾,在小鼠的胚胎发育过程中,从E14.5到E18.5高表达,与Dlx1 mRNA在各时间点表达水平虽比较接近,但在表达区域存在互补的特点。结论 Dlx1as在小鼠大脑发育过程中有一段时间的高表达,与蛋白编码基因Dlx1 mRNA空间互补,推测其可能是通过调控Dlx1 mRNA来影响小鼠的大脑发育。

DLX1联合BMP9促进人骨肉瘤细胞向成骨分化

目的探讨DLX1联合BMP9可否影响人骨肉瘤细胞MG63的成骨分化。方法用构建有DLX1和BMP9基因的重组腺病毒Ad DLX1和Ad BMP9,单独或联合感染MG63细胞,分为DLX1组(Ad DLX1+AdRFP感染组)、DLX1+BMP9组(Ad DLX1+Ad BMP9感染组)、BMP9组(Ad BMP9+AdRFP感染组)、RFP组(AdRFP感染组)。用RT-PCR和Western blot验证DLX1和BMP9的表达情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和读数分析细胞早期成骨能力,茜素红染色检测细胞晚期成骨能力,Western blot检测骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平。结果 Ad DLX1和Ad BMP9感染MG63细胞后,DLX1和BMP9的表达水平上调(P<0.05);与RFP组相比,DLX1组、DLX1+BMP9组和BMP9组细胞迁移能力和侵袭能力下降(P<0.05),DLX1+BMP9组细胞迁移能力和侵袭能力下降更为明显(P<0.05);ALP活性、钙盐沉积和OPN蛋白表达在DLX1+BMP9组和BMP9组增加(P<0.05),且DLX1+BMP9组较BMP9组显著增强(P<0.05)。结论 DLX1与BMP9联合作用可抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭,同时可诱导骨肉瘤细胞向成骨分化。

荞麦黄酮通过下调lncRNA DLX6-AS1抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达和纤维化

目的:探讨荞麦黄酮(BF)对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子和纤维化的影响及作用机制。方法:体外培养人肾小球系膜细胞(HMCs),分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、低剂量BF(L-BF组)、中剂量BF组(M-BF组)、高剂量BF组(H-BF组)、si-NC组、si-DLX6-AS1组、H-BF+pc DNA组和H-BF+pc DNA-DLX6-AS1组,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞中内皮素-1(ET-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测细胞中DLX6-AS1表达水平。结果:与Control组比较,HG组IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平升高(P<0.05),DLX6-AS1水平升高(P<0.05)。与HG组比较,L-BF组、M-BF组和H-BF组IL-6和TNF-α水平均降低(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平均降低(P<0.05),DLX6-AS1水平均降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与H-BF+pc DNA组比较,H-BF+pc DNA-DLX6-AS1组IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:荞麦黄酮可能通过下调DLX6-AS1表达抑制高糖诱导的HMCs炎症反应和纤维化。

TNF-α和lncRNA DLX6-AS1在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达及诊断价值

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和长链非编码RNA(lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA 1(DLX6-AS1)在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达水平及诊断价值。方法选取126例2型糖尿病患者为研究对象,根据骨密度(BMD)测定结果分为单纯2型糖尿病组(72例)和2型糖尿病合并骨质疏松症组(54例)。另选取同时期60例健康体检者作为对照组。酶联免疫法检测各组患者血清TNF-α表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清lncRNA DLX6-AS1表达水平。Pearson相关性分析2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平与临床指标相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析TNF-α和lncRNA DLX6-AS1对2型糖尿病合并骨质疏松症的诊断价值,Logistic回归分析2型糖尿病合并骨质疏松症的影响因素。结果与健康对照组比较,单纯2型糖尿病组和2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。与单纯2型糖尿病组比较,2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α、lncRNA DLX6-AS1与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均呈正相关(P<0.05),与BMD呈负相关(P<0.05)。与TNF-α或lncRNA DLX6-AS1单独诊断比较,二者联合检测诊断2型糖尿病合并骨质疏松症的灵敏度、特异度及准确度升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,lncRNA DLX6-AS1是2型糖尿病合并骨质疏松症的独立影响因素(P<0.05)。结论TNF-α和lncRNA DLX6-AS1参与2型糖尿病合并骨质疏松症发生发展,可能成为该疾病的诊断指标。

长链非编码RNA DLX6-AS1与微小RNA-346在糖尿病足72例血清中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLX6-AS1与微小RNA(miR)-346在糖尿病足病人血清中的表达及其临床意义。方法收集2017年5月至2018年12月南阳市中心医院收治的72例糖尿病足病人为糖尿病足组,选取同期该院收治的60例2型糖尿病无糖尿病足病人为糖尿病组,取同期于该院进行健康体检的健康志愿者55例作为对照组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组受检者血清中DLX6-AS1、miR-346的表达水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、成纤维细胞生长因子2(FGF2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用电化学发光法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)水平;采用Pearson相关性分析检验糖尿病足病人血清DLX6-AS1、miR-346的表达水平与炎性因子的相关性;采用logistic回归分析研究影响糖尿病足发生的相关因素。结果糖尿病组、糖尿病足组病人VCAM-1、FGF2、TNF-α、IL-6水平高于对照组(P<0.05),糖尿病组与糖尿病足组比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组DLX6-AS1的表达量是1.01±0.13,低于糖尿病组、糖尿病足组DLX6-AS1的表达量2.16±0.25、3.20±1.03(P<0.05);对照组miR-346的表达水平是1.00±0.16,高于糖尿病组、糖尿病足组miR-346的表达水平0.73±0.11、0.41±0.08(P<0.05),糖尿病组与糖尿病足组相比差异有统计学意义(P<0.05);随着糖尿病足病人Wagner分级增加DLX6-AS1的表达水平显著升高(P<0.05),miR-346的表达水平显著降低(P<0.05);DLX6-AS1的表达与FGF2、TNF-α、IL-6呈正相关(P<0.05),而miR-346与之呈负相关(P<0.05);DLX6-AS1与miR-346表达量是影响糖尿病足发生的危险因素(P<0.05)。结论糖尿病足病人血清中DLX6-AS1表达量升高,而miR-346表达量降低,二者可能参与糖尿病足发生及发展过程,并可能作为临床诊断的分子标志物。

LncRNA DLX6-AS1靶向miR-374a-3p调控糖尿病患者创面愈合的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLX6-AS1靶向miR-374a-3p对糖尿病(DM)患者创面愈合的影响。方法将人微血管内皮细胞(HMECs)分为对照(NC)组、高糖(HG)组,小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)+HG组(转染si-NC后用HG处理)、si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染si-LncRNADLX6-ASI后用HG处理)、miR-NC+HG组(转染miR-NC后用HG处理)、miR-374a-3p+HG组(转染miR-374a3p后用HG处理)、anti-miR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染imR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1后用的HG处理)、anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG后用HG处理)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测DM患者(DM组)和正常人(对照组)创面组织中miR-374a-3p和LncRNADLX6-AS1表达水平。CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检细胞迁移和侵袭。LncRNADLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验确定。结果与对照组相比,DM组创面组织中miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05),LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05)。与NC组比较,HG组HMECs中LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达、细胞增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。与si-NC+HG组比较,si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。与miR-NC+HG组比较,miR-374a-3p+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。miR-374a-3p是LncRNA DLX6-AS1的靶基因。与anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组比较,anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。结论下调LncRNA DLX6-AS1通过促进miR-374a-3p表达可诱导HMECs增殖、迁移和侵袭,促进DM患者创面愈合。

DLX1基因在人牙齿发育中的表达

目的:研究DLX1基因在人牙齿发育中的表达模式,确定DLX1转录子亚型。方法:提取人牙胚总RNA,利用巢式RT-PCR技术克隆DLX1cDNA序列;制备地高辛标记的RNA探针,检测人磨牙发育不同时期DLX1的表达情况。结果:人牙胚中表达的DLX1为转录子亚型1。在表达模式上,11周、14周、17周和19周4个不同发育时期磨牙均有DLX1表达,11周和14周少量表达于牙上皮和间充质,17周依然在牙上皮和间充质中表达,但表达增强,19周表达主要集中在内釉上皮细胞。结论:DLX1在人牙齿发育的各个时期均有表达,表明DLX1可能是人类牙齿发育中的一个重要调节因子。

大鼠脑皮质发育中Dlx1表达特点研究

目的明确Distal-less homeobox 1(Dlx1)在发育大鼠脑皮质中的表达特点,了解Dlx1与大脑发生发展的关系。方法应用实时荧光定量PCR技术分析Dlx1 mRNA在E11-P1 SD大鼠脑皮质中的表达趋势,应用免疫组织化学技术观察Dlx1蛋白在E11—P1 SD大鼠脑皮质中的表达变化。结果实时荧光定量PCR显示,在E11—P1 SD大鼠脑皮质中,Dlx1 mRNA的表达呈逐渐上升趋势,其中E11—E13上升不显著,E17—E19上升幅度较小;免疫组织化学法显示Dlx1蛋白在E11时,出现较高水平的表达,随后其表达于E13降至较低水平,在E13—P1 SD大鼠脑皮质中表现为持续上升趋势且随皮质的分层而呈现出区域性分布,但蛋白水平的表达与对应时间点mRNA的表达不一致。结论 Dlx1在SD大鼠脑皮质发育过程中可能起着重要的生理调控作用,且其表达与脑皮质的分层联系紧密。

丹参酮调控LncRNA DLX6-AS1对LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的作用

目的探讨丹参酮对脂多糖(LPS)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞建立急性肺损伤模型,随机分组:空白对照组、LPS组、LPS+丹参酮L组、LPS+丹参酮M组、LPS+丹参酮H组、LPS+si-NC组、LPS+si-DLX6-AS1组、LPS+丹参酮+pcDNA-DLX6-AS1组;MTT法、流式细胞术分别就检测细胞增殖及凋亡;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;qRT-PCR法检测DLX6-AS1的表达量。结果与空白对照组比较,LPS组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平升高(P<0.05),DLX6-AS1的表达量升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+丹参酮H组、LPS+丹参酮L组、LPS+丹参酮M组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率降低(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平降低(P<0.05),DLX6-AS1的表达量降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;与LPS组、LPS+si-NC组比较,LPS+si-DLX6-AS1组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率降低(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平降低(P<0.05);与LPS+丹参酮组比较,LPS+丹参酮+pcDNA-DLX6-AS1组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平升高(P<0.05)。结论丹参酮可通过抑制DLX6-AS1的表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎症反应从而减轻LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤。

lncRNA DLX6-AS1在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的观察宫颈癌组织中长链非编码RNA无远端同源框6反义1(lncRNA DLX6-AS1)在宫颈癌组织中的表达及意义,并探讨DLX6-AS1对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响及机制。方法收集50例宫颈癌组织和30例正常宫颈组织,采用qRT-PCR法检测DLX6-AS1的表达,分析DLX6-AS1表达水平与患者临床病理特征的关系。取宫颈癌HeLa细胞,分为干扰对照组(si-NC组)和si-DLX6-AS1组,分别转染NC siRNA和DLX6-AS1 siRNA。分别采用MTS实验、Transwell实验观察两组细胞的增殖、迁移能力,Western blotting法检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的表达。结果宫颈癌组织中DLX6-AS1表达高于正常宫颈组织(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移患者宫颈癌组织中DLX6-AS1表达水平高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P均<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组细胞增殖OD值降低,穿膜细胞数减少,细胞中β-catenin蛋白表达减少(P均<0.05)。结论DLX6-AS1在宫颈癌组织中的表达上调,其表达与宫颈癌恶性进展相关;干扰DLX6-AS1表达可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭。

血清lncRNA DLX6-AS1 Actinin-4表达与宫颈癌术后复发及预后的关系

目的:研究宫颈癌患者血清长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)DLX6-AS1、辅肌动蛋白4(Actinin-4)表达与宫颈癌根治术后复发及预后的关系。方法:选取自2016年2月至2018年2月期间行宫颈癌根治术的120例宫颈癌患者为研究对象(宫颈癌组),以同期健康体检的50例健康人为对照组。宫颈癌组根据术后3年肿瘤复发进展情况,分为无复发组(101例)及复发组(19例)。采用荧光实时定量聚合酶链反应法检测血清lncRNA DLX6-AS1表达,采用酶联免疫吸附实验检测血清Actinin-4表达。分析血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系。随访3年,采用Kaplan-Meier生存分析分析血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达与宫颈癌患者术后预后差异。分析影响宫颈癌患者术后复发的因素。结果:与对照组相比,宫颈癌组血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达显著升高(P<0.05)。Pearson相关分析结果,宫颈癌组血清lncRNA DLX6-AS1与Actinin-4的表达呈显著正相关性(r=0.560、P=0.000)。不同FIGO分期、病理分级、间质浸润深度及淋巴结转移患者血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达差异具有统计学意义(P<0.05)。lncRNA DLX6-AS1高表达组、Actinin-4高表达组3年无进展生存率及无进展生存时间均低于低表达组(均P<0.05)。病理分级低分化、FIGO分期ⅡA期、lncRNA DLX6-AS1高表达、Actinin-4高表达是影响宫颈癌根治术术后复发的独立危险因素(均P<0.05)。结论:宫颈癌患者血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达升高、两者的表达与宫颈癌术后复发有关、可能是新的预后判断的血清标志物。

血清lncRNA DLX6-AS1和miR-335-3p与糖尿病视网膜病变患者微血管损伤的关系

目的:探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)无远端同源框6反义1(DLX6-AS1)、微小RNA-335-3p(miR-335-3p)与糖尿病视网膜病变(DR)患者微血管损伤的关系。方法:前瞻性研究。选取2019-02/2021-12我院2型糖尿病(T2DM)患者160例,根据DR分期标准,分为无DR(NDR)组69例、非增殖型DR(NPDR)组48例、增殖型DR(PDR)组43例。比较三组患者血清lncRNA DLX6-AS1、miR-335-3p、血管内皮生长因子(VEGF)以及内皮细胞(ECs)、内皮祖细胞(EPCs)水平。Pearson法进行各指标相关性分析。Logistic回归模型分析影响T2DM患者发生DR的因素。结果:NDR组、NPDR组、PDR组患者血清miR-335-3p表达水平及EPCs比例逐次减少,lncRNA DLX6-AS1、VEGF表达水平及ECs比例逐次增加(均P<0.05)。DR患者血清lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p负相关(r=-0.668,P<0.01)。NPDR组、PDR组血清lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p表达水平均呈负相关性(r=-0.647、-0.675,均P<0.01),lncRNA DLX6-AS1与VEGF均呈正相关(r=0.619、0.630,均P<0.01),VEGF与miR-335-3p均呈负相关(r=-0.625、-0.649,均P<0.01);PDR组lncRNA DLX6-AS1与ECs呈正相关,与EPCs呈负相关(r=0.528、-0.594,均P<0.01),miR-335-3p与ECs呈负相关,与EPCs均呈正相关(r=-0.554、0.586,均P<0.01)。多因素回归分析显示,lncRNA DLX6-AS1(OR=2.484,95%CI:1.366~4.516)、miR-335-3p(OR=2.171,95%CI:1.218~3.871、VEGF(OR=1.603,95%CI:1.115~2.304)是T2DM患者发生DR的危险因素(均P<0.05)。结论:DR患者血清中lncRNA DLX6-AS1表达上调,miR-335-3p表达下调,lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p呈负相关,二者异常表达均与DR患者微血管损伤有关。

长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞的分子机制

目的探讨长链非编码RNA DLX6-AS1通过靶基因miR-103a-3p调控宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法培养正常宫颈细胞Ect1/E6E7和宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C33a、Caski。将SiHa随机分为对照(NC)组、si-con组、si-DLX6-AS1组、PCDNA组、PCDNA-DLX6-AS1组、miR-con组、miR-103a-3p组、si-DLX6-AS1+anti-miR-con组、si-DLX6-AS1+anti-miR-103a-3p组。RT-qPCR检测各组细胞中miR-103a-3p和DLX6-AS1表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测DLX6-AS1和miR-103a-3p的靶向关系。结果与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞HeLa、SiHa、C33a、Caski中DLX6-AS1表达水平升高,miR-103a-3p表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。干扰DLX6-AS1表达或miR-103a-3p过表达后,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,迁移、侵袭数量减少,CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平降低,Bax、Cleaved caspase-3表达水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。同时抑制miR-103a-3p和DLX6-AS1表达后,宫颈癌SiHa中MMP-2、MMP-9、CyclinD1、Bcl-2表达水平升高,Bax、Cleaved caspase-3表达水平降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DLX6-AS1靶向调控miR-103a-3p的表达。结论干扰DLX6-AS1表达可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-103a-3p表达有关,可能为宫颈癌的治疗提供新思路和新靶点。

LncRNA DLX6-AS1调控miR-497/HMGA2对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)无远端同源框6反义1(DLX6-AS1)调控miR-497/高迁移率族蛋白A2(HMGA2)分子轴对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将骨肉瘤MG63细胞分为control组、si-DLX6-AS1组、si-NC组、pcDNA3.1-DLX6-AS1组、pcDNA3.1组、miR-497 mimics组、anti-miR-497组、miR-NC组、anti-miR-NC组、si-DLX6-AS1+anti-miR-497组和si-DLX6-AS1+HMGA2组。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测转染后细胞DLX6-AS1、miR-497和HMGA2表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase3表达。通过双荧光素酶报告实验验证miR-497与DLX6-AS1和HMGA2的靶向关系。结果:与control组比较,si-DLX6-AS1组DLX6-AS1表达和细胞增殖能力降低,细胞凋亡率、miR-497表达升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组PCNA表达降低,cleaved caspase3表达升高(P<0.05)。DLX6-AS1可靶向miR-497并下调其表达,miR-497可负调控HMGA2表达。与si-DLX6-AS1组比较,si-DLX6-AS1+anti-miR-497组或si-DLX6-AS1+HMGA2组HMGA2、PCNA表达水平、细胞增殖能力升高,凋亡率、cleaved caspase3表达降低(P<0.05)。结论:DLX6-AS1可通过下调miR-497/HMGA2分子轴促进骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,为骨肉瘤早期诊疗提供潜在分子靶点。

转录因子Dlx1在HT22细胞中调控CRMP2转录活性的研究

目的:观察转录因子Dlx1对小鼠海马神经元细胞HT22细胞CRMP2(Collapsin response mediator protein 2)基因的调控作用.方法:构建pcDNA3.1-HA-Dlx1质粒及pGL3.0-Basic-CRMP2 promoter质粒,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测Dlx1对CRMP2基因启动子转录的影响;检测过表达Dlx1对内源CRMP2基因表达的影响.结果:Dlx1直接结合在CRMP2启动子上,促进CRMP2基因表达.结论:Dlx1促进CRMP2基因表达.

黑色素瘤相关抗原D1在小鼠牙发育过程中的动态表达规律与调控作用研究

目的研究黑色素瘤相关抗原D1(mdanoma associated antigen D1,Mage-D1)在小鼠出生后不同牙发育阶段的动态表达规律,以及敲除Mage-D1在体内对小鼠牙发育造成的影响。方法C57-BL/6野生型乳鼠分为出生后1、4、7、11、15 d等5组(n=3),HE染色观察出生后小鼠下颌第一磨牙的发育动态,免疫组织化学染色观察Mage-D1及同源盒基因Dlx1、Msx1在小鼠出生后牙发育不同阶段的表达情况。选择出生后1、3月龄的Mage-D1纯合敲除鼠(knockout type,KO)、野生小鼠(wild type,WT)进行表型观察(n=6),并对下颌骨进行Micro-CT扫描,分析牙齿及下颌骨的相关数据。结果小鼠出生后第1天,下颌第一磨牙处于钟状晚期,无明显的硬组织形成;第4天,牙本质与牙釉质交替形成,牙冠开始发育;第7天,上皮根鞘形成,牙根开始发育;第11天,牙釉质及冠部牙本质发育基本完成,牙根约发育至一半;第15天,牙根进一步发育,达到2/3以上,牙骨质形成。从小鼠出生后1~15 d,Mage-D1及同源盒基因Dlx1、Msx1全程在成釉细胞及成牙本质细胞中呈阳性表达。与WT小鼠相比,KO小鼠体质量明显增加(P<0.05);牙齿在数目上与野生型小鼠一致,但外观上稍有差异,表现为切牙不易着色以及磨牙更易磨损。但牙及牙槽骨的密度未发现明显差异。结论Mage-D1与Dlx1、Msx1可能共同参与了小鼠牙釉质及牙本质的形成;Mage-D1基因敲除小鼠出现肥胖体征同时牙齿表型发生改变。

lncRNA DLX6-AS1靶向miR-195-5p调控前列腺癌细胞增殖、侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lnc RNA)DLX6-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用机制。方法qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌细胞PC3、正常前列腺上皮细胞RWPE-1中DLX6-AS1、miR-195-5p的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-DLX6-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DLX6-AS1和anti-miR-NC)、si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p组(共转染si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p)用脂质体法转染至PC3细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,前列腺癌细胞PC3中DLX6-AS1的表达显著上调,miR-195-5p的表达显著下调(P<0.05);抑制DLX6-AS1、过表达miR-195-5p均可显著抑制PC3细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);miR-195-5p可显著抑制野生型DLX6-AS1细胞的荧光活性(P<0.05),且显著抑制miR-195-5p可逆转抑制DLX6-AS1对PC3细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论lncRNA RNADLX6-AS1可促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-195-5p有关。