Dm-dNK与吉西他滨联用对乳腺癌原代细胞杀伤的作用

目的探讨复制型腺病毒SG500介导的果蝇多底物脱氧核苷激酶(Drosophila melanogaster deoxyribonucleoside kinase,Dm-dNK)自杀基因与吉西他滨(gemcitabine,DFDC)联合应用对胶滴中3D培养的乳腺癌原代细胞的杀伤作用。方法通过肿瘤细胞的3D培养技术对外科手术切除肿瘤的原代细胞进行培养(n=63)。加入不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的重组腺病毒Ad-GFP,荧光显微镜下计数绿色荧光蛋白(GFP)的阳性细胞百分比,验证病毒转染效率。构建溶瘤腺病毒载体SG500-Dm-dNK,利用Western blot验证相关蛋白表达。用MOI=1,MOI=10,MOI=20的SG500及SG500-dNK分别感染肿瘤细胞48 h后,使用Primage图像分析系统检测细胞存活率;向肿瘤细胞中加入不同浓度的DFDC,72 h后测量细胞存活率;用MOI=10的SG500和SG500-dNK感染肿瘤细胞后,再分别加入不同浓度的DFDC,72 h后检测细胞存活率。结果 SG500-dNK与DFDC的联合应用对乳腺癌原代细胞的杀伤作用显著高于单用SG500、SG500-dNK、DFDC以及SG500与DFDC联用,并随着DFDC浓度的逐步提高而更加明显(P<0.05)。结论 Dm-dNK与DFDC联合应用在人乳腺癌原代细胞中具有更好的抗肿瘤作用。

SG500-dnk联合DFDC治疗人乳腺癌转移瘤的实验研究

目的:探讨选择复制型腺病毒SG500-dnk联合二氟脱氧聚胱氨酸(DFDC)对乳腺癌肺转移瘤的影响。方法:30只裸鼠接种MDA-MB-231细胞悬液,造模成功后随机分为实验组和对照组,每组15只,实验组移植瘤内隔天注射SG500-dnk,对照组移植瘤内隔天注射生理盐水。10 d后,实验组给予DFDC1 mg/(kg·d)腹腔注射,对照组给予PBS 1mg/(kg·d)腹腔注射,注射10 d。记录裸鼠饮食量、饮水量、体质量,观察裸鼠肿瘤大小变化。8周后处死,解剖后观察肺转移情况。结果:两组比较,体质量及饮食量差异均无统计学意义(P>0.05)。实验组移植瘤体积明显减小,移植瘤体积变化曲线差异明显,且与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。8周后实验组与对照组的肺转移率为13.3%(2/15)和53.3%(8/15),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SG500-dnk联合DFDC能明显缩小裸鼠的乳腺移植瘤,并有效抑制乳腺癌肺转移。

重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK对黑色素瘤细胞A-375增殖和凋亡的影响研究

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK,探讨其对黑色素瘤A-375细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数(MOI)感染黑色素瘤细胞A-375及人正常皮肤细胞HFF;以MTT法检测细胞增殖情况;并以流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时设空白对照组。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK转染后在黑色素瘤细胞A-375中呈特异表达,在人正常皮肤细胞HFF中无表达。黑色素瘤细胞A-375的增殖随MOI增加而逐渐受到抑制,HFF细胞的增殖无明显变化。慢病毒治疗组A-375细胞凋亡明显优于对照组,而对HFF细胞无明显作用。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK可靶向促进黑色素瘤细胞A-375的细胞凋亡,并抑制其增殖。