牛Dmrt7基因cDNA的克隆和生物信息学分析

【目的】探讨牛Dmrt7基因的生物学功能,为进一步研究该基因对牛精液品质的影响奠定基础。【方法】以牛睾丸组织为材料,根据GenBank中发表的小鼠Dmrt7基因序列,结合生物信息学技术,设计并合成2对引物,采用RT-PCR方法克隆牛Dmrt7 cDNA,并运用DNAMAN软件及在线工具对所得到的序列进行了生物信息学分析。采集牛肾脏、肝脏、睾丸、肺、脾脏、瘤胃、子宫、小肠、心脏、卵巢和肌肉等11个组织,以牛-βactin基因为内参基因,对牛Dmrt7基因的组织表达谱进行分析。【结果】牛Dmrt7基因cDNA长度为1 378 bp(Genbank登录号为EF534775),包含由1 113个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF包含1个TAG终止密码子,编码370个氨基酸;在进化关系上,牛首先与狗聚为一类,亲缘关系最近,再与小鼠和大鼠聚为一类,最后与人和短尾猿聚为一类。Dmrt7蛋白含有一个DM结构域。牛Dmrt7基因在睾丸组织中高度表达,在其他组织中不表达。【结论】获得了牛Dmrt7基因的cDNA序列(Genband登录号为EF534775);牛Dmrt7蛋白可能对精液品质有影响。

牛Dmrt7基因的cDNA克隆及遗传变异

[目的]探讨牛Dmrt7基因的生物学功能及群体遗传变异情况,为进一步研究该基因对牛精液品质的影响奠定基础。[方法]以牛睾丸组织为材料,根据GenBank上发表的小鼠的Dmrt7基因序列设计并合成2对引物,通过RT-PCR分别进行了扩增并运用DNA-MAN软件及在线工具对所得到的序列进行了生物信息学分析;同时,以牛肾脏、肝脏、睾丸、肺、脾脏、瘤胃、子宫、小肠、心脏、卵巢和肌肉共11个组织为材料,另外设计2对引物用于组织表达谱分析。利用PCR-SSCP技术和DNA测序对Dmrt7基因的多态性进行检测。[结果]获得了一个长为1616bp的cDNA片段(GenBank登录号为EF534775),该cDNA包含由1113个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码370个氨基酸;发现在第四内含子上有一个C/G突变,随后在277头本地牛品种和国外牛品种中进行群体多态性检测,发现G等位基因频率分布范围从0～0.4138;基因杂合度,有效等位基因数和多态信息含量分别为0～0.4851、1.0000～1.9423和0～0.3675。[结论]克隆了牛Dmrt7基因的cDNA序列并进行组织表达谱分析,该G等位基因在本地牛品种和外国牛品种中没有差异。

Dmrt7在绵羊不同发育期睾丸组织中的表达与定位

探讨Double sex和mab-3相关转录因子7(Double sex and mab-3related transcription factor7,Dmrt7)在不同发育期绵羊睾丸组织中的表达规律和定位情况,本试验选取0、2、6、12和24月龄健康绵羊15只,每组3只,采集睾丸组织,运用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色方法检测不同月龄睾丸组织中Dmrt7的表达与定位情况。结果显示,在不同月龄绵羊睾丸组织中均检测到Dmrt7mRNA和蛋白,并且表达趋势较为一致,但不同月龄睾丸中表达量存在差异;在0、2和6月龄绵羊睾丸中,Dmrt7mRNA和蛋白表达量很低,而在12和24月龄表达量较高,并且极显著高于0、2和6月龄(P<0.01);0、2和6月龄绵羊睾丸组织中免疫阳性反应定位于少量的精原细胞,而在12和24月龄睾丸组织中免疫阳性反应主要定位于次级精母细胞和部分初级精母细胞及精子细胞。研究结果表明,Dmrt7可能对各级生精细胞的分裂过程尤其是初级精母细胞通过两次减数分裂形成精子细胞的过程起着重要的调控作用。

槟榔江水牛Dmrt7基因克隆及分子特征、组织表达谱分析

【目的】Dmrt7基因是Dmrt基因家族成员之一,影响公畜精子形成。迄今,有关水牛精子发生的遗传基础的研究很少,本研究旨在对槟榔江水牛Dmrt7基因完整CDS区进行克隆和组织差异表达分析。【方法】采用RT-PCR和功能生物信息学方法。【结果】槟榔江水牛Dmrt7基因完整编码区序列长1 113 bp,编码370个氨基酸;Dmrt7包含DM和DMRT-like两个保守结构域,无信号肽,无跨膜结构,为核内蛋白。同源性分析显示,水牛与其他牛科物种Dmrt7氨基酸序列相似度达95%以上。在检测的10个组织中,Dmrt7基因仅在水牛睾丸组织中表达且高表达。在第6外显子发现1个SNP位点(c.665A>G),引起了p.Q222R的替换,此位点的替换对Dmrt7蛋白功能无影响。【结论】有助于了解水牛Dmrt7基因的基本功能。