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结核分枝杆菌DnaG引物酶与ssDNA模板相互作用的研究
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作者 陈江 罗昊 +2 位作者 张知明 宋旭 王刚刚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1920-1934,共15页
目的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引物酶DnaG(MtuDnaG)在其基因组DNA复制中起着至关重要的作用,因而被认为是抗结核药物研发的新靶点。然而MtuDnaG起始引物合成的机制尚不清楚,这阻碍了MtuDnaG抑制剂的筛选。本研究将鉴定M... 目的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引物酶DnaG(MtuDnaG)在其基因组DNA复制中起着至关重要的作用,因而被认为是抗结核药物研发的新靶点。然而MtuDnaG起始引物合成的机制尚不清楚,这阻碍了MtuDnaG抑制剂的筛选。本研究将鉴定MtuDnaG结合模板的特异性识别位点,探讨MtuDnaG与ssDNA模板之间的相互作用。方法本研究以MtuDnaG的双结构域蛋白MtuP49(包含了锌指结合结构域和RNA聚合酶结构域)为研究对象,利用生物化学和生物物理学方法,研究MtuDnaG与含不同三联体的ssDNA模板之间的相互作用,鉴定MtuDnaG的特异性识别位点。结果5'-GCG/C-3'三联体可能是MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点。此外,在结核分枝杆菌基因组的复制起始点附近也存在可以与MtuP49特异结合的5'-GCG/C-3'位点,其3'端侧翼序列显著影响ssDNA与MtuP49的亲和力。突变实验表明,位于锌指结合结构域中的Arg31对MtuP49结合ssDNA的活性具有重要贡献。基于预测的MtuP49结构,推测在MtuP49结合模板ssDNA过程中,锌指结合结构域会发生分子内重排。结论本研究首次鉴定了MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点,揭示了影响MtuDnaG与模板ssDNA相互作用的主要因素。本文的研究结果不但有助于阐明MtuDnaG起始引物合成的机制,也为靶向DnaG的新型抗结核药物开发提供了新的信息。 展开更多
关键词 引物酶dnag 结核分枝杆菌 特异性识别位点 结构域重排 DNA复制
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变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株DNAG+C含量测定 被引量:7
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作者 盛江筠 刘正 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2001年第1期49-51,共3页
目的 探讨变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株基因型是否发生改变。方法 采用高效液相色谱法测定变形链球菌和远缘链球菌及相应耐氟菌株DNA碱基含量 ,即DNAG +C摩尔百分比 (mol% )。结果 四株耐氟菌株DNAG +Cmol%为 5 4.45 ,44 .86 ,5 4... 目的 探讨变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株基因型是否发生改变。方法 采用高效液相色谱法测定变形链球菌和远缘链球菌及相应耐氟菌株DNA碱基含量 ,即DNAG +C摩尔百分比 (mol% )。结果 四株耐氟菌株DNAG +Cmol%为 5 4.45 ,44 .86 ,5 4.41,5 5 .39;相应亲代菌株G +Cmol%为 35 .8,37.4,43.35和 46 .6 2。两者明显不同 ,差值大于 5 %。结论 变形链球菌和远缘链球菌的耐氟菌株已发生基因型改变 ,且可能包括多个基因的突变。 展开更多
关键词 耐氟菌株 变形链球菌 远缘链球菌 dnag+Cmol% 基因型 口腔科
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用DNAG+C含量和DNA同源性测定法鉴定米克戴德军团菌
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作者 郭军巧 孙丽华 +1 位作者 赵卓 赵汉良 《中国卫生检验杂志》 CAS 1995年第2期72-74,共3页
本文采用热变性温度法和液相复性速率法对—轻型特征及血清学反应相似米克戴德军团菌(Lm)的菌株进行了测定,结果表明该菌与标准Lm(C DC株)的DNA G+Cmol%相差3.45%,与标准Lm(C DC株)的DNA同源性达81.99%,根据伯杰细菌鉴定手册(1984),... 本文采用热变性温度法和液相复性速率法对—轻型特征及血清学反应相似米克戴德军团菌(Lm)的菌株进行了测定,结果表明该菌与标准Lm(C DC株)的DNA G+Cmol%相差3.45%,与标准Lm(C DC株)的DNA同源性达81.99%,根据伯杰细菌鉴定手册(1984),可判定该菌株与标准Lm(C DC株)为遗传型一致的类群,即从遗传学角度证明该菌为Lm。 展开更多
关键词 军团菌 米克戴德军团菌 dnag+C含量 DNA同源性
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2008年至2010年我院口服降糖药使用分析 被引量:1
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作者 谢洪梅 刘同华 +2 位作者 黄晓 杨胜梅 枉前 《中国药业》 CAS 2012年第20期89-90,共2页
目的了解医院口服降糖药使用情况及发展趋势,为临床合理用药提供参考。方法采用限定日剂量(DDD)法,对2008年至2010年口服降糖药的销售金额、用药频度(DDDs)、日均费用(DDC)等进行统计、分析。结果口服降糖药销售金额呈上升趋势。销售金... 目的了解医院口服降糖药使用情况及发展趋势,为临床合理用药提供参考。方法采用限定日剂量(DDD)法,对2008年至2010年口服降糖药的销售金额、用药频度(DDDs)、日均费用(DDC)等进行统计、分析。结果口服降糖药销售金额呈上升趋势。销售金额排序前3位的是阿卡波糖、罗格列酮、格列美脲;用药频度(DDDs)排序前3位的是格列美脲、罗格列酮、二甲双胍;格列吡嗪的日均费用(DDC)最低。结论口服降糖药的使用逐年增加,二甲双胍的使用较少。 展开更多
关键词 口服降糖药 用药频度 日均费用 用药分析
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meso-四(4-(N-甲基吡啶基))卟啉TMPyP4与端粒DNA重复序列TTAGGG形成的G4结构的相互作用 被引量:1
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作者 张慧娟 王雪飞 +3 位作者 王鹏 庞思平 艾希成 张建平 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 2008年第3期254-258,共5页
通过圆二色谱、稳态吸收光谱、稳态荧光光谱和皮秒时间分辩荧光光谱研究了meso-四(4-(N-甲基吡啶基))卟啉(TMPyP4)与端粒DNA重复序列5′-TTAGGG-3′形成的平行结构DNAG4的相互作用.稳态实验结果表明,二者之间的结合常数为1.29×106(... 通过圆二色谱、稳态吸收光谱、稳态荧光光谱和皮秒时间分辩荧光光谱研究了meso-四(4-(N-甲基吡啶基))卟啉(TMPyP4)与端粒DNA重复序列5′-TTAGGG-3′形成的平行结构DNAG4的相互作用.稳态实验结果表明,二者之间的结合常数为1.29×106(mol/L)?1,饱和结合数为3.将时间分辨荧光光谱应用到二者相互作用的研究中,推测了TMPyP4以插入和末端堆积两种方式与DNAG4相结合.当达到饱和结合时,一个TMPyP4分子插入到DNAG4结构层层之间,另外两个分子以末端堆积的方式结合到G4结构的两端. 展开更多
关键词 TMPyP4 dnag4 光谱学手段 结合模式
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Effect of isopropyl myristate on the viscoelasticity and drug release of a drug-in-adhesive transdermal patch containing blonanserin 被引量:2
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作者 Chunyi Zhao Peng Quan +2 位作者 Chao Liu Qiaoyun Li Liang Fang 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期623-628,共6页
The purpose of this study was to investigate the effect of isopropyl myristate (IPM), a penetration enhancer, on the viscoelasticity and drug release of a drug-in-adhesive transdermal patch containing blonanserin. The... The purpose of this study was to investigate the effect of isopropyl myristate (IPM), a penetration enhancer, on the viscoelasticity and drug release of a drug-in-adhesive transdermal patch containing blonanserin. The patches were prepared with DURO-TAK (R) 87-2287 as a pressure-sensitive adhesive (PSA) containing 5% (w/w) of blonanserin and different concentrations of IPM. An in vitro release experiment was performed and the adhesive performance of the drug-in-adhesive patches with different concentrations of IPM was evaluated by a rolling ball tack test and a shear-adhesion test. The glass transition temperature (T-g) and rheological parameters of the drug-in-adhesive layers were determined to study the effect of IPM on the mechanical properties of the PSA. The results of the in vitro release experiment showed that the release rate of blonanserin increased with an increasing concentration of IPM. The rolling ball tack test and shear-adhesion test showed decreasing values with increasing IPM concentration. The results were interpreted on the basis of the IPM-induced plasticization of the PSA, as evidenced by a depression of the glass transition temperature and a decrease in the elastic modulus. In conclusion, IPM acted as a plasticizer on DURO-TAK (R) 87-2287, and it increased the release of blonanserin and affected the adhesive properties of the PSA. (C) 2016 Chinese Pharmaceutical Association and Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences. Production and hosting by Elsevier B.V. This is an open access article under the CC BY-NC-ND 展开更多
关键词 Isopropyl myristate Drug-in-adhesive patch VISCOELASTICITY dnag release BLONANSERIN
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结核分枝杆菌DNA复制解旋酶与引物酶的相互作用 被引量:1
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作者 刘文林 罗昊 +1 位作者 罗爽 王刚刚 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1486-1491,共6页
在细菌DNA复制过程中,DnaB解旋酶解开双链DNA为DNA聚合酶提供单链模板,DnaG引物酶合成引物支持后随链的合成,DnaB和DnaG紧密协调保证了DNA复制得以精确完成.目前对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)染色体复制机制仍然知之... 在细菌DNA复制过程中,DnaB解旋酶解开双链DNA为DNA聚合酶提供单链模板,DnaG引物酶合成引物支持后随链的合成,DnaB和DnaG紧密协调保证了DNA复制得以精确完成.目前对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)染色体复制机制仍然知之甚少,有关结核分枝杆菌DnaB和DnaG相互作用的研究还非常有限.重组表达了Mtb解旋酶DnaB和引物酶C端结构域(MtbP16),经过亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析制备得到高纯度目的蛋白.孔雀石绿定磷法检测MtbDnaB ATP水解活性表明,MtbDnaB六聚体状态下ATP水解活性较单体时提高5.4倍;当加入MtbP16,可以使MtbDnaB的ATP水解活性提高15%.利用凝胶迁移实验(Electrophoretic mobility shift assays,EMSA)分别检测MtbDnaB与ssDNA、MtbDnaB与MtbP1相互作用,发现可以形成稳定的MtbDnaB/ssDNA和MtbDnaB/MtbP16复合物.进一步研究发现,当将MtbP16蛋白加入到MtbDnaB/ssDNA中,随着MtbP16的增加,并未检测到MtbDnaB/ssDNA/MtbP16三元复合条带,反而导致游离ssDNA逐渐增多.上述结果表明,MtbDnaB可以与MtbP16形成稳定的二元复合物,MtbP16的结合可以增强MtbDnaB的ATPase活性,未来可进一步以MtbDnaB/MtbP16复合物为靶标,通过定磷法测定MtbDnaB/MtbP16复合物ATPase酶活进行抑制剂筛选.(图6表2参23) 展开更多
关键词 DNA复制 解旋酶 引物酶 ATP酶活 相互作用
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