DNMT2在胃癌的表达及靶向抑制

目的研究DNA甲基化转移酶2(DNMT2)在胃癌的表达,并分析靶向抑制DNMT2对胃癌的影响。方法免疫组化法对60例胃癌与癌旁组织,免疫荧光法对胃癌细胞SGC-7901行DNMT2表达研究。构建3个靶向抑制DNMT2的siRNA(DNMT2-siRNA-1,DNMT2-siRNA-2,DNMT2-siRNA-3)。转染DNMT2-siRNA入SGC-7901,RT-PCR及Western免疫印迹法验证DNMT2的抑制效果。噻唑蓝比色法检测SGC-7901增殖率。结果胃癌组织DNMT2表达率43.3%,显著低于癌旁组织的93.3%(P<0.05);晚期及低分化胃癌组织的DNMT2表达率更低(P<0.05)。DNMT2在胃癌细胞核表达显著。DNMT2-siRNA可成功转染SGC-7901,并成功筛选靶向抑制DNMT2的siRNA(DNMT2-siRNA-3)。发现转染DNMT2-siRNA-3后96 h与120 h,SGC-7901增值率1.138±0.110与1.078±0.060较对照增殖率1增加(P<0.05)。结论 DNMT2在胃癌表达降低,抑制DNMT2可能利于胃癌增殖。

脊尾白虾Dnmt2启动子克隆及其转录调控分析

为探明脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)Dnmt2(DNA methyltransf-erase2,Dnmt2)启动子对Dnmt2转录的调控作用,本研究利用染色体步移技术克隆得到脊尾白虾Dnmt2启动子,使用在线软件预测该基因启动子区域的转录调控元件及转录因子结合位点,通过构建一系列缺失表达载体,利用双荧光素酶报告基因检测技术鉴定了该基因核心启动子区,并对其启动子活性进行检测。结果表明,克隆的脊尾白虾Dnmt2启动子长度为1315 bp,转录起始位点“A”位于ATG上游236 bp,启动子区域含有多种转录因子结合位点,包括STAT3、SOX、NF-κB、E2F、GATA-1等,但缺乏CpG岛。双荧光素酶报告基因检测显示,Dnmt2核心启动子区位于-196~+81bp,对启动子区域进行活性检测发现,在该基因启动子-640~-452bp区域内可能存在促进基因表达的转录调控元件,而在-1160~-640bp区域可能存在抑制该基因表达的转录调控元件。本研究结果为进一步研究Dnmt2启动子的表达调控机制提供理论依据。

Dnmt2的底物识别机制与生物学功能

Dnmt2的同源基因首次在酵母基因组中被发现,由于其蛋白质序列与已知的DNA甲基转移酶家族成员DNMT1的序列高度同源,所以被认为是一个DNA甲基转移酶,归属于DNA甲基转.移酶家族。然而,一直没有足够的证据证明Dnmt2对DNA具有甲基转移能力。直到2006年发现Dnmt2有催化tRNA^(Asp)(GUC)甲基化修饰的能力,才确定Dnmt2的功能是一种RNA甲基转移酶,负责催化tRNA上第38位胞嘧啶的甲基化修饰,但Dnmt2识别和催化底物tRNA的分子机制仍未被全面阐明。之前研究表明,Q34可以增强Dnmt2对tRNA^(Asp)(GUC)的催化活力;王恩多课题组发现人源Dnmt2对底物tRNA的关键识别位点是G34或I34,Dnmt2识别底物依赖于底物tRNA的反密码子环、D茎和可变环的关键位点和完整的三级结构。此外,Dnmt2在细胞代谢、胚胎发育、有丝分裂、表观遗传、肿瘤与免疫等方面发挥着重要作用。该文从进化保守性、底物识别机理、蛋白质结构与功能、修饰之间的调控等方面综述了Dnmt2在RNA修饰中的最新研究进展。

动物中DNA甲基转移酶2研究进展

哺乳动物中DNA甲基转移酶家族包括DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,Dnmt1),DNA甲基转移酶2(DNA methyltransferase 2,Dnmt2,也叫做天冬氨酸tRNA甲基转移酶1(tRNA aspartic acid methyltransferase 1,TRDMT1))和DNA甲基转移酶3(DNA methyltransferase 3,Dnmt3)。Dnmt2在进化史上比Dnmt1和Dnmt3更古老,存在于更多物种中,包括植物、真菌、寄生虫、昆虫、鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物,但其生化学机制和生物学功能仍不十分清楚,已有研究报道也存在许多矛盾之处。本文仅就Dnmt2在动物中的研究,包括其结构特点,对RNA甲基化的作用及相关生物学表型的研究进展作一总结。

精子RNA及RNA修饰在获得性遗传中的研究进展

越来越多的证据表明,上一代在环境压力下产生的某些获得性性状可以"记忆"在配子中,并以一种不依赖DNA序列的方式传递给下一代,这种现象被称为获得性遗传。然而,关于精子中介导获得性遗传现象的分子机制尚不清楚。近年来,随着精子RNA领域的发展,我们实验室率先发现精子中一类来源于成熟tRNA的小RNA (tRNA-derived small RNAs, tsRNAs)及其RNA修饰可以作为一种新型的表观遗传信息载体,介导父代获得性代谢紊乱性状向子代传递。此外,我们进一步发现了调控精子RNA介导获得性遗传的关键分子——tRNA甲基转移酶DNMT2,从RNA修饰及修饰酶的角度为获得性遗传的机制研究打开了新思路。鉴于该领域的迅速发展,该文拟从精子tsRNAs、RNA修饰以及DNMT2的角度综述近年来精子RNA及RNA修饰介导的获得性遗传机制的研究进展。

寻常性银屑病患者表皮中DNA甲基化转移酶2和3amRNA的表达

目的 检测寻常性银屑病患者表皮中DNA甲基化转移酶（DNMT2和DNMT3a）mRNA表达。方法 利用实时定量PCR技术检测2009年3月至2010年12月来自中国医学科学院皮肤病医院皮肤科及宜兴市人民医院皮肤科门诊的46例寻常性银屑病患者皮损和非皮损表皮以及来自中国医学科学院皮肤病医院皮肤外科的28例健康对照表皮中DNMT2和DNMT3a mRNA的表达。结果 在银屑病患者皮损、非皮损和对照组表皮DNMT2 mRNA表达水平（2-ΔΔCt值）分别是0.62 ± 0.02、0.36 ± 0.05和0.15 ± 0.11，皮损组明显高于非皮损组（t = 6.23，P 〈 0.01），非皮损组明显高于对照组（t = 7.33，P 〈 0.01）；DNMT3a mRNA表达水平（2-ΔΔCt值）分别是0.85 ± 0.03、0.43 ± 0.04和0.18 ± 0.09，皮损组明显高于非皮损组（t = 5.66，P 〈 0.01），非皮损组明显高于对照组（t = 8.62，P 〈 0.01）。结论 寻常性银屑病患者表皮DNMT2和DNMT3a mRNA均异常高表达。